عنوان

بررسی شیوع ژن های کد کننده آنزیم های غیر فعال کننده آمینوگلیکوزیدها، ‮‭(aph A۶, aac C۱, aac C۲, aad B, aad A۱)‬ در بین آسینتوباکتر بومانی های مقاوم به داروی جدا شده از عفونت های بیمارستانی و ارتباط آن ها با سطح ‮‭MIC‬ آمیکاسین و جنتامیسین

شماره

‭۱۲۷۶۶پ‬

زبان متن نوشتاري يا گفتاري و مانند آن

per

عنوان اصلي

بررسی شیوع ژن های کد کننده آنزیم های غیر فعال کننده آمینوگلیکوزیدها، ‮‭(aph A۶, aac C۱, aac C۲, aad B, aad A۱)‬ در بین آسینتوباکتر بومانی های مقاوم به داروی جدا شده از عفونت های بیمارستانی و ارتباط آن ها با سطح ‮‭MIC‬ آمیکاسین و جنتامیسین

نام نخستين پديدآور

/مریم کافی خسروشاهی

نام ناشر، پخش کننده و غيره

: دانشکده علوم طبیعی

نام خاص و کميت اثر

‮‭۹۰‬ص‬

متن يادداشت

چاپی

جزئيات پايان نامه و نوع درجه آن

کارشناسی ارشد

نظم درجات

در رشته زیست شناسی - میکروبیولوژی

زمان اعطا مدرک

‮‭۱۳۹۲/۱۱/۲۵‬

کسي که مدرک را اعطا کرده

دانشگاه تبریز

متن يادداشت

باکتری آسینتوباکتر بومانی یکی از مهم ترین میکروارگانیسم ها در بحث ایجاد عفونت های بیمارستانی نظیر باکتریمی، عفونت مجاری ادراری و مننژیت ثانویه و کسب مقاومت در برابر آنتی بیوتیک هاست .اهمیت موضوع کسب مقاومت آنتی بیوتیکی در آسینتوباکتر بومانی ما را بر آن داشت تا مطالعه و تحقیقی در زمینه ژن های غیر فعال کننده آنتی بیوتیک های خانواده آمینوگلیکوزیدها در این میکروارگانیسم داشته باشیم .در این مطالعه میزان مشارکت و نقش ژن های کدکننده آنزیم های غیرفعال کننده آمینوگلیکوزیدها، شامل آمینوگلیکوزید استیل ترانسفرازها ‮‭(aac C۱‬ و ‮‭aac C۲)‬ آمینوگلیکوزید فسفوترانسفرازها ‮‭(aph A۶)‬و آمینوگلیکوزید نوکلئوتیدیل ترانسفرازها ‮‭( aad B‬ و ‮‭aad A۱)‬ و افزایش سطح ‮‭MIC‬ آنتی بیوتیک های آمیکاسین و جنتامیسین در ژنوتیپ های مقاوم به چند داروی آسینتوباکتر بومانی جدا شده از نمونه های بالینی مورد مطالعه قرار گرفت .برای این کار ابتدا به وسیله تست های بیوشیمیایی، کمپلکس باکتری آسینتوباکتر کالکواستیکوس- بومانی شناسایی شد .سپس ‮‭DNA‬ باکتری های مورد نظر استخراج شده و پس از خالص سازی، با کمک تکنیک‮‭RFLP - PCR‬روی ژن ‮‭ribosomal RNA ۱۶S‬ فقط باکتری های مربوط به ‮‭genomic species ۲‬ که شامل آسینتوباکتر بومانی می باشند، انتخاب شد .در مرحله بعد با روش دیسک دیفیوژن سویه های حساس و مقاوم به آمیکاسین و جنتامیسین شناسایی گردید .با کمک تکنیک ‮‭Repetitive Extragenic Palindrome PCR‬ که توالی های تکراری را در ژنوم باکتری مورد تکثیر قرار می دهد، سویه ها، تایپینگ شده و به این طریق ایزوله های دارای کلون مشترک شناسایی گردید .سپس وجود ژن های‮‭aac C۱‬ ،‮‭aac C۲‬ ،‮‭aad B‬ ، ‮‭aad A۱‬ و ‮‭aph A۶‬ روی ‮‭DNA‬ های استخراج شده با تکنیک ‮‭PCR‬ مورد بررسی قرار گرفته و با کمک الکتروفورز روی ژل آگارز وجود یا عدم وجود باندهای مربوطه مشخص گردید .در مرحله آخر با کمک روش‮‭test - E‬میزان ‮‭MIC‬ آمیکاسین و جنتامیسین برای هر ایزوله مشخص شد .در نهایت، نتایج حاصل به کمک نرم افزار آماری ‮‭SPSS ۱۶‬ تحلیل شده و با استفاده از تستهای آماری، فراوانی هر یک از ژن های نامبرده درایزوله های به دست آمده از نمونه های مختلف مشخص شده و نقش هر یک از ژن های مقاومت در افزایش سطح ‮‭MIC‬ هر یک از آنتی بیوتیک ها تعیین شد .برطبق نتایج‮‭REP PCR‬ ، ایزوله های مورد مطالعه در شش گروه ‮‭A, B, C, D, E, F‬ قرار گرفتند و البته چند مورد از نمونه ها در هیچ گروهی قرار نگرفتند .در این طبقه بندی تقریبا ایزوله های موجود در کلاسترهای‮‭A, B, C, D, F‬ ، مقاوم به جنتامیسین بودند .ایزوله های موجود در کلاسترهای ‮‭C‬ و ‮‭D‬ مربوط به بخش سوختگی بوده و همه مقاوم به جنتامیسین و آمیکاسین بودند .بر اساس نتایج این تحقیق، میزان شیوع ژن های ‮‭aph A۶‬ و ‮‭aad B‬ در نمونه های ما بیشتر از سایر ژن های مورد مطالعه بوده و میزان آن ها به ترتیب ‮‭۷/۹۰‬ و ‮‭۳/۵۴‬ بود .علاوه بر این مشخص شد حضور حداقل یکی از این ژن ها در ایزوله ها، میزان ‮‭MIC‬ آنتی بیوتیک های جنتامیسین و آمیکاسین را تا حدود زیادی بالا می برد، به طوری که ارتباط معنی داری بین ژن های ‮‭aph A۶‬ و ‮‭aad B‬ و افزایش مقاومت در برابر جنتامیسین و آمیکاسین وجود داشت .همچنین مشخص شد که میزان مقاومت به جنتامیسین و آمیکاسین در بخش های سوختگی و غیرسوختگی بیمارستان های مورد مطالعه باهم متفاوت بوده و ارتباط معنی‌داری بین مقاومت به آمیکاسین و بخش سوختگی وجود داشت .بررسی میزان ‮‭MIC‬ به وسیله نوار‮‭Test - E‬نشان داد که ‮‭۵۶‬ ایزوله‌های مورد مطالعه دارای =‮‭g/ml ۲۵۶ MIC‬برای جنتامیسین و ‮‭۷/۳۴‬ ایزوله ها دارای همین مقدار ‮‭MIC‬ برای آمیکاسین بودند .علی رغم این که بیش از نیمی از عفونت های شایع در بخش های مراقبت ویژه بیمارستانی توسط باکتری های گرم منفی مقاوم به آنتی بیوتیک ها ایجاد می شود، اما توزیع این میکروارگانیسم های پاتوژن در مطالعات مختلف متفاوت است .با این حال، با توجه به این که براساس اغلب مطالعات انجام یافته، یکی از پاتوژن‌های شایع ایجادکننده عفونت های بیمارستانی، آسینتوباکتر بومانی‌های مقاوم به دارو می باشد، لذا می‌توان دریافت که مقاومت به جنتامیسین و آمیکاسین در بین سویه های مورد مطالعه، بالا است .بنابراین مشکل یاد شده، نیازمند اقدام فوری از سوی سازمان‌های مسئول، سیاست‌گذاری عرصه سلامت و پرسنل مربوط به کنترل عفونت در بیمارستان‌ها می‌باشد

متن يادداشت

called problem requires, immediate action by the responsible organizations and health field and personnel relating to infection control in hospitals -resistant A.baumannii. There fore we find that the resistance of gentamicin and amikacin among the studied since a high. So-negative bacteria resistant to antibiotics, but the distribution of pathogenic microorganisms various in different studies. Yet given these findings based on studies, one of the most common pathogens causing nosocomial infections is multi drug-burned patients of the hospitals in this study were different, so that significant relationship exists between resistance to amikacin and gentamicin and burn wards. Despite the fact that, more than half of the most common infections in the intensive care unit of the hospitals occur by Gram-test method the amount of MIC of amikacin and gentamicin for each isolates was determined. Finally, the results which obtained by using the statistical software named SPSS 16 were analysed and by using statistical tests, the frequency of each of these genes in isolates obtained from different samples identified, and role of them in the level of MIC of each antibiotic was determined. According to REP PCR results, the studied isolates were divided into six groups, A, B, C, D, E, F and a few samples were not in any groups. In this classification almost all the isolates in clusters found in almost all clusters, were resistant to gentamicin, and most of them had aph A6 gene. Isolates in clusters C and D were related to the burn ward and were all resistant to gentamicin and amikacin. This study showed that prevalence of genes aph A6 and aad B in samples were more than other studied genes. In adition it was found, the presence of at least one of the genes in isolates largly raises the amount of MIC in gentamicin and amikacin so that there is meaningful relationship between some of genes isolates and increase in resistance to gentamicin and amikacin. It also became clear that the resistance of gentamicin and amikacin in burn and non-PCR technique that couse to amplification of repeated sequences in the genome of the bacterium strains, was typing by this way and isolation of common clone was identified. Then the existence of aac C1, aac C2, aad B, aad A1 and aph A6 genes by the PCR technique was examined on extracted DNA,s and with the help of electrophoresis on agarose gel, the presence or absence of related bands was determined. By the help of E-RFLP technique in 16S rRNA gene, just those bacteries that were related to genomic species 2 were selected. In the next step by disk diffusion method, sensitive and resistant strains to amikacin and gentamicin were identified. With assistance of REP-baumannii complex was identified. Then the DNA was extracted from bacteria and purified, then with the help of PCR-resistant genotypes isolated from clinical specimens were examined. For this, first by biochemical tests, the Acinetobacter calcoaceticus-Acinetobacter baumannii is one of the most important microorganisms in nosocomial infections such as bacteremia, urinary tract infections and secondary meningitis which acquire resistance to antibiotics. Importance of the acquisition of antibiotic resistance in A. baumannii was on us to study the inactivating of genes of antibiotic aminoglycoside family in these microorganisms. In this study, the genes encoding enzymes that inactivate aminoglycosides, including aminoglycoside acetyltransferase (aac C1 and aac C2) aminoglycoside phosphotransferase (aph A6) and aminoglycoside nucleotidyltransferase (aad B and aad A1) and increased levels of MIC amikacin and gentamicin antibiotics in A. baumannii multidrug

مستند نام اشخاص تاييد نشده

کافی خسروشاهی، مریم

مستند نام اشخاص تاييد نشده

زرینی، غلامرضا، استاد راهنما

مستند نام اشخاص تاييد نشده

آهنگرزاده رضایی، محمد، استاد راهنما

مستند نام اشخاص تاييد نشده

پژند، امید، استاد مشاور

يادداشت عمومي

سیاه و سفید

وضعیت فهرست نویسی

نمایه‌سازی قبلی