عنوان

بررسی بیان miR-383-5p و PD-L1 در بافت سرطانی سینه و اثر جایگزینی miR-383-5P در مهار بیان PD-L1، رشد سلولی، مهاجرت سلولی و القای آپوپتوز در رده سلولی سرطان سینه

شماره

پ۲۴۱۲۴

زبان متن نوشتاري يا گفتاري و مانند آن

per

عنوان اصلي

بررسی بیان miR-383-5p و PD-L1 در بافت سرطانی سینه و اثر جایگزینی miR-383-5P در مهار بیان PD-L1، رشد سلولی، مهاجرت سلولی و القای آپوپتوز در رده سلولی سرطان سینه

نام نخستين پديدآور

شیرین آذربرزین

نام ناشر، پخش کننده و غيره

علوم طبیعی

تاریخ نشرو بخش و غیره

۱۳۹۹

نام خاص و کميت اثر

۶۲ص.

مواد همراه اثر

سی دی

جزئيات پايان نامه و نوع درجه آن

دکتری

نظم درجات

زیست جانوری ژنتیک مولکولی

زمان اعطا مدرک

۱۳۹۹/۱۱/۱۳

متن يادداشت

مقدمه: سرطان پستان یکی از علل مرگ‌ومیر در سراسر جهان است و درمان آن‌یک چالش جهانی می‌باشد. MiRNA ها، RNA های غیر کد شونده کوچکی (~18-22 نوکلئوتید) هستند که یک تنظیم‌کننده مهم بیان ژن به شمار می‌آیند. MiR-383-5p یکی از ژن‌هایی هست که نشان داده‌شده است که PD-L1 را هدف قرار می‌دهد و در بسیاری از سرطان‌ها کاهش بیان دارد و با عدم تنظیم ژن هدفش موجب افزایش بیان آن می‌شود. هدف از این مطالعه بررسی اثرات جایگزینی miR-383-5P بر روی رده‌ی سرطانی MDA-MB-231 و بررسی مسیرهای مولکولی درگیر برای فرآیندهای ضد سرطان می‌باشد.مواد و روش‌ها: در این مطالعه ابتدا سطوح بیان miR-383-5P و PD-L1 با استفاده از qRT-PCR در بافـت سرطانی بیمـاران مبتلابه سـرطان پستان و چهار رده سرطانی پستان بررسی شد و بر این اساس mimic-miR-383-5P با استفاده از تکنیک الکتروپوریشن در رده‌ی سلولی MDA-MB-231 ترانسفکت شد و برای بررسی اثرات سایتوتوکسیک mimic-miR-383-5P تست MTT بر روی سلول‌های MDA-MB-231 انجام گرفت. برای بررسی اثرات جایگزینی روی تهاجم از تست خراش استفاده شد و بیان ژن‌های درگیر در این مسیر ازجمله MMP-2, 3, 9 و Vimentin بررسی شد. تست آپوپتوز برای بررسی اثرات جایگزینی بر روی مرگ سلولی انجام گرفت و ژن‌های درگیر در این مسیر ازجمله Caspase-3, 9, Bax و Bcl-2 بررسی شدند. مراحل چرخه سلولی با استفاده از فلوسایتومتری ارزیابی شد. ژن‌های کلیدی مسیر سیگنالینگ PI3K/AKT/mTOR بررسی شدند. سلول‌های MDA-MB-231 با سلول‌های T استخراج‌شده از خون محیطی توأمان کشت شدند و ژن‌های درگیر در مسیر خستگی سلول‌های T ازجمله IL-2, IL-10, TNF-α, TGF-β, INF-γ بررسی شدند.یافته‌ها: میزان بیان miR-383-5P و PD-L1 در بافت سرطانی سینه و رده‌های سلولی به ترتیب کاهش و افزایش داشت. نتایج تست MTT نشان داد که جایگزینی miR-383-5P موجب مهار رشد سلولی شد. بر اساس داده‌های به‌دست‌آمده، جایگزینی miR-383-5P موجب القای آپوپتوز و فعال شدن Caspase-3, 9 و Bax در سلول‌های MDA-MB-231 شد. در ادامه، نتایج تست خراش نشان داد که جایگزینی miR-383-5P می‌تواند مهاجرت سلولی سلول‌های سرطانی پستان را در مقایسه با گروه کنترل کاهش دهد و موجب کاهش بیان ژن‌های درگیر در این مسیر ازجمله MMP-2, 3, 9, و Vimentin شود. همچنین جایگزینی موجب مهار مسیر سیگنالینگ PI3K/AKT/mTOR در سلول‌های MDA-MB-231 شد. درنهایت، نتایج تست هم کشتی نشان داد که جایگزینی miR-383-5P موجب تغییر بیان ژن‌های درگیر در مسیر خستگی سلول‌های T شد.نتیجه‌گیری: بر اساس این مطالعه، فعال شدن مسیرهای متاستاز، مسیر سیگنالینگ PI3K/AKT/mTOR غیرفعال شدن مسیر آپوپتوز می‌تواند ناشی از کاهش بیان miR-383-5P باشد؛ بنابراین miR-383-5P می‌تواند هدف درمانی جدید برای درمان سرطان پستان باشد.

متن يادداشت

Aims: MicroRNAs (miRs) play pivotal roles in breast cancer development. The dysregulation of miRs has been associated with PD-L1-mediated immune suppression. This study aimed to examine the effect of transfected miR- 383-5p on breast cancer cells and T-cells and its association with clinicopathological features in affected patients. Main methods: Initially, miR-383-5p and PD-L1 expression levels were investigated in breast cancer tissues. Then, MDA-MB-231 cells were transfected with miR-383-5p mimics to perform analyses. Cell viability was investigated using the MTT assay, and the annexin V/PI staining assay was performed to examine apoptosis induction. Furthermore, the effect of miR-383-5p on cell migration and cell cycle progression was analyzed using the wound-healing assay and flow cytometry, respectively. Gene and protein expressions were studied using qRTPCR and western blotting. Finally, the effect of miR-383-5p on T-cells, which were co-cultured with cancer cells, was investigated. Key fndings: Compared to non-malignant tissues, PD-L1 was up-regulated, and miR-383-5p expression was downregulated in breast cancer tissues. Moreover, miR-383-5p reduced breast cancer cell viability via inducingapoptosis and modulating the expression of apoptosis-related genes. Besides, miR-383-5p could inhibit the migration of breast cancer cells via down-regulating metastasis-related genes. Besides, transfected miR-383-5p induced the secretion of pro-inflammatory cytokines from T-cells. Furthermore, the results showed that miR- 383-5p might exert its tumor-suppressive effect via inhibiting the PI3K/AKT/mTOR pathway. The inhibitoryeffect of transfected miR-383-5p on the PI3K/AKT/mTOR pathway might be the underlying mechanism for inhibiting tumoral PD-L1 expression. Signifcance: Overall, miR-383-5p can be a promising therapeutic agent for treating breast cancer.

عنوان گونه گون

Investigating the expression of miR-383-5P and PD-L1 in breast cancer tissues and the effect of replacing miR-383-5P mimic in the inhibition the PD-L1 expression, cell growth, cell migration, and apoptosis induction in the breast cancer cell line.

عنصر شناسه اي

‏آذربرزین،

ساير عناصر نام

‏‏ شیرین

کد نقش

تهيه کننده

عنصر شناسه اي

‏صفرعلیزاده،

عنصر شناسه اي

‏حسین پور فیضی،

عنصر شناسه اي

‏برادران ،

عنصر شناسه اي

‏خجسته بانان،

ساير عناصر نام

‏‏ رضا

ساير عناصر نام

‏محمدعلی

ساير عناصر نام

‏بهزاد

ساير عناصر نام

سید مهدی

تاريخ

استاد راهنما

تاريخ

استاد راهنما

تاريخ

استاد مشاور

تاريخ

استاد مشاور

عنصر شناسه اي

تبریز