مقایسهی حساسیت جمعیتهای مختلف سوسک کلرادوی سیب زمینی Leptinotarsa decemlineata (Say) به حشره کش اندوسولفان و بررسی سازوکارهای بیوشیمیایی و مولکولی مقاومت احتمالی
نام نخستين پديدآور
/محمود محمدی شریف
وضعیت نشر و پخش و غیره
نام ناشر، پخش کننده و غيره
تبریز: دانشگاه تبریز ، دانشکده کشاورزی، گروه گیاهپزشکی ،گرایش :حشرهشناسی کشاورزی
مشخصات ظاهری
نام خاص و کميت اثر
۱۴۵ ص .
یادداشتهای مربوط به نشر، بخش و غیره
متن يادداشت
چاپی
یادداشتهای مربوط به مندرجات
متن يادداشت
فاقد اطلاعات کامل
یادداشتهای مربوط به پایان نامه ها
جزئيات پايان نامه و نوع درجه آن
دکتری
نظم درجات
گیاهپزشکی ،گرایش :حشرهشناسی کشاورزی
زمان اعطا مدرک
۱۳۸۵/۱۱/۱۸
کسي که مدرک را اعطا کرده
تبریز: دانشگاه تبریز ، دانشکده کشاورزی، گروه گیاهپزشکی ،گرایش :حشرهشناسی کشاورزی
یادداشتهای مربوط به خلاصه یا چکیده
متن يادداشت
مقاومت به حشرهکشها یکی از مهمترین مشکلاتی است که متخصصین مدیریت آفات با آن مواجه هستند .مقاومت به حشرهکشها باعث کاهش کارایی گروههای مختلف حشرهکشها و کاهش تعداد حشرهکشهای موثر میشود .هدف از این بررسی، آگاهی از وضعیت حساسیت جمعیتهای سوسک کلرادو به حشرهکشهای آزینفوس متیل، اندوسولفان و فوزالون و بررسی سینرژیستی، بیوشیمایی و مولکولی سازوکارهای ممکن مقاومت بود .جمعیتهایی از دو استان آذربایجان شرقی و اردبیل در سالهای ۱۳۸۲ و ۱۳۸۳ جمعآوری گردیدند .این جمعیتها در یکی از بخشهای گلخانهی تحقیقاتی گروه گیاهپزشکی در دمای ۲۶ C۲ ، رطوبت ۵۰ ۵ درصد و دورهی نوری ۱۶ ساعت روشنایی و ۸ ساعت تاریکی پرورش داده شدند .زیست سنجی به روش قرار دادن سم در سطح بدن حشره انجام گردید .در این آزمایشها، لاروهای سن چهار تا ۲۴ ساعته که بمدت ۲۴ ساعت در شرایط یکنواخت تغذیه شده بودند، استفاده شدند .محدودهی دوزهای مورد استفادهی حشرهکشهای آزینفوس متیل، اندوسولفان و فوزالون روی جمعیت حساس بترتیب ۲/۰ - ۱ ، ۰۵/۰ - ۵/۰ و g ۵- ۲ به ازای هر حشره بود .این محدوده در مورد سایر جمعیتها در سال ۱۳۸۲ بترتیب ۰۵/۰ - ۶ ، ۶۰ - ۱ و g ۵۰- ۱به ازای هر حشره و در سال ۱۳۸۳ بترتیب ۲/۰ - ۲ ،۸۰ - ۲ و g ۴۰- ۲ به ازای هر حشره بود .این آزمایشها برای هر یک از سموم و برای هر جمعیت چهار بار در روزهای مختلف تکرار گردیدند .نتایج نشان داد که مقاومت قابل توجهی نسبت به اندوسولفان وجود دارد و میزان حساسیت جمعیتها نسبت به دو حشرهکش دیگر تا حدودی مشابه جمعیت حساس بود .بیشترین مقاومت به اندوسولفان در جمعیتهای جمعآوری شده از بستان آباد مشاهده شد .بدین ترتیب که در آزمایشهای انجام شده در دو سال بترتیب ۲۲۰ و ۱۰۹ برابر مقاومت مشاهده گردید .در آزمایشهای سینرژیستی از دو ترکیب سینرژیست DEF و PBO استفاده گردید .این آزمایشها در سال ۱۳۸۳ روی جمعیت بستان آباد و حساس انجام شد .روش کار بدین ترتیب بود که یک ساعت قبل از تیمار با دوزهای حشرهکش اندوسولفان، لاروهای انتخاب شده یا با دوز /g ۵ lترکیب PBO یا با دوز /۱۰ g lترکیب DEF تیمار شدند .سایر شرایط مشابه آزمایشهای زیست سنجی بود .نسبت سینرژیسم برای این دو ترکیب در مورد جمعیت بستان آباد بترتیب ۳/۲ و ۵/۳ محاسبه گردید .میزان سینرژیسم بوجود آمده توسط PBO در حدی نبود که مبین تفاوت قابل ملاحظهای در میزان فعالیت سیستم اکسایشی در دو جمعیت حساس و مقاوم باشد .میزان سینرژیسم مربوط به DEF نیز قابل توجه نبود .میزان فعالیت سیستم آنزیمی گلوتاتیونS - ترنسفراز در دو جمعیت با استفاده از زیرنهشت CDNB اندازهگیری شد .نتایج نشان داد که میزان فعالیت این سیستم آنزیمی در دو جمعیت تفاوت معنیداری ندارد .برآورد عوامل کینتیکی Km و Vmax نیز عدم دخالت قابل توجه گلوتاتیونS - ترنسفرازها را در مقاومت به اندوسولفان تأیید نمود .از این رو غیر حساس شدن نقطهی هدف در اثر جهشهای نقطهای به عنوان عامل مقاومت مورد سو ظن قرار گرفت .برای بررسی این موضوع در آزمایشهای مولکولی، در ابتدا بخش مورد نظر از ژن عامل مقاومت به ترکیبات سایکلودینی با استفاده از آغازگر رو به جلوی دژنره CPBF۶ و آغازگر رو به عقب CPBR۴ که اختصاصی سوسک کلرادو بود، تکثیر گردید .قطعات تکثیر شده از ژل آگاروز استخراج شده و با استفاده از پلاسمید pTZ۵۷R/T همسانهسازی شدند .توالی یابی قطعات همسانهسازی شده جهش نقطهای عامل مقاومت به ترکیبات سایکلودینی) جایگزینی اسید آمینهی آلانین با سرین (را برای اولین بار در سوسک کلرادو مشخص نمود .در مرحلهی بعدی وجود الل مقاوم با روش تکثیر اختصاصی الل (PASA) تأیید گردید .
متن يادداشت
.Insecticide resistance is the most severe problem in pest management programs. It involves loss of effectiveness of several groups of insecticides. Determining the resistance status of different populations of Colorado potato beetle to azinphos methyl, endosulfan and phosalone and investigating the biochemical and molecular aspects of possible mechanisms of resistance were the goals of this project. During ۲۰۰۳ and ۲۰۰۴, populations of Colorado potato beetle were collected from potato fields in Ardabil and East Azarbaijan provinces. Colonies of these insects were reared in greenhouse at ۲۶ ۲?C, ۵۰ ۵ RH and ۱۶:۸ (L:D) photoperiod. Bioassays were conducted using ۲۴-۴۸ h old ۴th instar larvae. To obtain uniform larvae to be used in bioassays, up to ۲۴ h old larvae were fed for ۲۴ hours under rearing conditions. The insecticides were applied topically. The ranges of azinphos methyl, endosulfan and phosalone doses for susceptible strain were ۰.۲ - ۱, ۰.۰۵ - ۰.۵ and ۲ - ۵ g/larva, respectively. The dose ranges for the strains suspected of resistance were ۰.۰۵ - ۶, ۱ - ۶۰ and ۱ - ۵۰ g/larva in ۲۰۰۳ and ۰.۲ - ۲, ۲ - ۸۰ and ۲ - ۴۰ g/larva in ۲۰۰۴, respectively. These treatments were replicated four times at different days. Compared with the susceptible strain, Bostanabaad strain was ۲۲۰ and ۱۰۹ times resistant to endosulfan in ۲۰۰۳ and ۲۰۰۴, respectively. Susceptibility of the other populations to azinphos methyl and phosalone was fairly similar to that of susceptible strain. The synergists used in this study were DEF and PBO. These chemicals were applied topically one hour prior to treatment with insecticides using the same procedure described above. Each treated larva received ۵ g DEF or ۱۰ g PBO. The insecticide doses and the procedure were similar to those described in bioassays. PBO and DEF reduced resistance ۲.۳ and ۳.۵ times, respectively. The synergism ratio was not considerable using neither PBO nor DEF. Glutathione S-transferase (GST) activity was measured using CDNB in order to investigate possible difference in susceptible and resistant strains. No significant difference was observed between the two strains in GST activity. There were also no differences in Vmax and Km in resistant vs. susceptible strains. Hence, target site insensitivity caused by point mutations was suspected. To investigate this matter in molecular experiments, the segment of the gene responsible for resistance to cyclodiene insecticides was successfully amplified using a degenerate forward, CPBF۶ and a CPB- specific reverse, CPBR۴ primers. Amplified segments were extracted and cloned using the plasmid, pTZ۵۷R/T. Sequencing verified the mutation responsible for resistance to cyclodiene insecticides (alanine to serine) in CPB for the first time. Validation of the mutation was done by PCR amplification of specific alleles
موضوع (اسم عام یاعبارت اسمی عام)
موضوع مستند نشده
Insecticide resistance
موضوع مستند نشده
Colorado potato beetle
موضوع مستند نشده
Potato
موضوع مستند نشده
Endosulfan
موضوع مستند نشده
Azinphos methyl
موضوع مستند نشده
Phosalone
موضوع مستند نشده
Synergism
موضوع مستند نشده
Glutathione S-transferase
موضوع مستند نشده
Rdl
موضوع مستند نشده
PASA
نام شخص به منزله سر شناسه - (مسئولیت معنوی درجه اول )