بررسی قابلیت فیکساتیو ابداعی در مقایسه با مشابه خارجی در حفظ مورفولوژی سلول های HeLa و پایداری محتوای DNA سلولی جهت تشخیص ویروس پاپیلومای انسانی (HPV)
نام عام مواد
[پایان نامه]
نام نخستين پديدآور
غزل صداقت شایگان
وضعیت نشر و پخش و غیره
نام ناشر، پخش کننده و غيره
دانشگاه علوم پزشکی تهران، دانشکده پزشکی
تاریخ نشرو بخش و غیره
۱۴۰۰
مشخصات ظاهری
نام خاص و کميت اثر
۱۲۲ص.
مواد همراه اثر
سی دی
یادداشتهای مربوط به پایان نامه ها
جزئيات پايان نامه و نوع درجه آن
کارشناسی ارشد
نظم درجات
ژنتیک انسانی
زمان اعطا مدرک
۱۴۰۰/۱۱/۰۶
یادداشتهای مربوط به خلاصه یا چکیده
متن يادداشت
مقدمه و هدف: تست غربالگری جهت پیگشیری از سرطان سرویکس حداقل هر 5 سال یک بار تکرار میشود و اگر یک عفونت پایدارو فعال با تایپ های سرطان زای ویروس پاپیلومای انسانی تشخیص داده نشود در مدت 5 سال میتواند تغییرات پاتولوژیکی زیادی در فرد ایجاد کند. از این رو جهت افزایش صحت و دقت تست انجام شده می توان از فیکساتیو مناسب و سازگار با تست های تشخیصی بر اساس مورفولوژی سلول های سرویکس و تست های ژنتیکی اختصاصی برای HPV استفاده نمود. چنین فیکساتیوی شرایط انتقال نمونه و نگه داری آنها، تشخیص نوع و فاز فعالیت HPV، و تصمیم گیری های متناسب پزشکی را تسهیل میکند. در این پروژه تلاش شد فیکساتیوی مناسب برای هر دو نوع تست سلولی و مولکولی مرتبط با تشخیص HPV ساخته شود که بتواند ضمن حفظ جمعیت سلولی در نمونه ی بیولوژیکی، پیوستگی طولی در محتوای DNA و RNA سلولی را حفظ کند. روش کار: فیکساتیو های مختلف با ترکیب 3 ماده ی الکل، بافر، و افزودنی از نوع نمک و پلی هیدریک الکل ساخته شدند. سلول های HeLa با تعداد یکسان به هر یک از فیکساتیو های ساخته شده اضافه شدند و پایداری مشخصه های بیولوژیکی در نمونه با شمارش دستی سلول ها و مشاهده ی پیوستگی طولی در DNA و RNA استخراج شده روی ژل آگارز 1% بررسی شد. واکنش PCR برای تکثیر انکوژن های E6 و E7 و امپلیکون های بزرگتر جهت بررسی ثبات توالی هدف تحت شرایط ذخیره سازی انجام شد. پتانسیل فیکساتیو ابداعی در پیشگیری از تخریب RNA نسبت به فیکساتیو تجاری با انجام qRT-PCR روی تعداد مشابه سلول های فیکس شده سنجیده شد. نمونه های سرویکس در 20 میلی لیتر از فیکساتیو ابداعی جمع آوری شد و برای تأیید کارامدی آن به آزمایشگاه نیلو ارسال شد. یافته ها: تعداد سلول های فیکس شده با تغییرات ایجاد شده در هر یک از 3 جزء فیکساتیو ثابت باقی ماند به استثنای موارد حاصل از افزودن سدیم استات، 5% PEG8000، 1% Mannitol و1% PEG 200، و 40% متانول. علی رغم آنکه تعداد سلول ها در اغلب فیکساتیو های ساخته شده بعد از نگهداری ثابت باقی ماند، تفاوت چشمگیری در میزان DNA و RNA سلولی استخراج شده از آن فیکساتیو ها دیده شد. فیکساتیو حاوی اتانول 40% و بافر استات کارامدترین مورد جهت حفظ پایداری DNA و RNA سلولی در زمان ذخیره سازی بود. افزودن دو نوع خاص از پلی هیدریک الکل به این ترکیب باعث افزایش میزان DNA و RNA شد. افزودن 5% Mannitol و 2% PEG8000 به مهار تخریب نوکلئیک اسید ها کمک میکند. نتیجه گیری: فیکساتیو ابداعی طبق نتایج به دست آمده نه تنها برای بررسی های سلولی بلکه برای هر دو نوع آنالیز بر اساس DNA و RNA مناسب است و میتوان آن را به عنوان فیکساتیوی که میتواند با روش های غربالگری HPV بر اساس RNA سازگار باشد در نظر گرفت.
موضوع (اسم عام یاعبارت اسمی عام)
عنصر شناسه ای
دی.ان.ا
عنصر شناسه ای
DNA
داده رابط بین فیلدها
a11
داده رابط بین فیلدها
a11
موضوع مستند نشده
فیکساتیو ابداعی
موضوع مستند نشده
HPV
موضوع مستند نشده
RNA سلولی
نام شخص به منزله سر شناسه - (مسئولیت معنوی درجه اول )