بررسی اثر انتقال ژن haxi به سلولهای hsc بیماران دارای نوتروپنی شدید مادرزادی با استفاده از وکتور در محیط آزمایشگاه
نام عام مواد
[پایان نامه]
نام نخستين پديدآور
حمید فرجی فرد
وضعیت نشر و پخش و غیره
نام ناشر، پخش کننده و غيره
دانشگاه علوم پزشکی تهران، دانشکده پزشکی
تاریخ نشرو بخش و غیره
۱۳۹۷
مشخصات ظاهری
نام خاص و کميت اثر
۱۰۱ص.
ساير جزييات
جدول نمودار
مواد همراه اثر
سی دی
یادداشتهای مربوط به پایان نامه ها
جزئيات پايان نامه و نوع درجه آن
دکتری تخصصی(PHD)
نظم درجات
ایمنی شناسی پزشکی
یادداشتهای مربوط به خلاصه یا چکیده
متن يادداشت
نوتروپنی به معنی کاهش تعداد نوتروفیلها به کمتر از 1500 نوتروفیل در میکرولیتر خون محیطی اطلاق می شود که در این موارد فرد مستعد انواع عفونتهای باکتریال و قارچی می گردد. نوتروپنی با توجه به شمارش مطلق نوتروفیلهای خون محیطی به سه قسمت تقسیم می شود. نقص در ژنهای مختلفی می تواند علت ایجاد بیماری SCN باشد که مهمترین آنها شامل ELA2 ، HAX1 ، G6PC3 ، VPS45 و JAGN1 می باشند. نقص در ژن HAX1 علت ایجاد درصد زیادی از بیماران SCN می باشد. طی تقسیم بندی بیماران SCN، بیماران با نقص در ژن HAX1 را SCN3 یا سندرم کاستمن می نامند. در این پروژه سعی شده با استفاده از سلولهای HSC بیماران سندرم کاستمن، ژن درمانی انجام شود تا مشکل نوتروپنی در شرایط آزمایشگاهی مرتفع گردد.روش انجام: هدف ما در این مطالعه تولید یک رترو وکتور حامل ناحیه کد کننده ژن HAX1 جهت انتقال این ژن به سلولهای HSC بیماران سندرم کاستمن می باشد. برای این کار پس از تکثیر ناحیه کد کننده این ژن به روش PCR، این قطعه در وکتور MigR1 کلون شد و با برش دو طرفه و توالی یابی تایید شد. سپس با استفاده از سل لاین Platinium-A مراحل Packaging و تولید ویروس انجام شد. از ویروس تولید شده برای آلوده کردن سلولهای یوکاریوتی HEK293T استفاده شد و تولید پروتئین HAX1 در این سلول به استفاده از فلوسیتومتری تایید شد. با استفاده از همین ویروس، به سلولهای HSC بیماران سندرم کاستمن نیز ژن HAX1 انتقال یافت و در محیط کشت این سلولها با استفاده از سیتوکاینها به رده میلوئیدی جهت تولید نوتروفیل تمایز داده شدند. جهت تایید تمایز از مارکرهای سطحی CD66 و CD177 استفاده شد.نتیجه: نتایج به دست آمده حاکی از تولید موفق رتروویروس حاوی ژن HAX1 می باشد. این نتایج در مراحل مختلف کلونینگ و توالی یابی مشخص شد. علاوه بر این ویروس تولید شده از این وکتور کاملا توانایی آلوده کردن سلولهای یوکاریوتی و تولید پروتئین HAX1 را دارد. با آلوده کردن سلول HSC بیماران سندرم کاستمن، روند تولید نوتروفیل در مقایسه با گروهای کنترل بهبود قابل توجهی یافت که نشانه رفع جلوگیری از بلوغ در رده میلوئیدی می باشد. نتیجه گیری نهایی: با توجه به نتایج حاصله از این پژوهش، به نظر می رسد در صورتی که این بیماران به درمانهای رایج پاسخ مناسبی ندادند، می توان از ژن درمانی برای ایشان به عنوان یک انتخاب استفاده کرد.
موضوع (اسم عام یاعبارت اسمی عام)
موضوع مستند نشده
انتقال ژن
موضوع مستند نشده
HAX1
موضوع مستند نشده
سلولهای HSC
موضوع مستند نشده
نوتروپنی شدید مادرزادی
نام شخص به منزله سر شناسه - (مسئولیت معنوی درجه اول )