درج هدفمندKnock in ژن آنزیم نیتروردوکتاز پروکاریوتی در سلول های بتای پانکراس Zebrafish به منظور تولید مدل حیوانی مناسب در مطالعات ترمیمی سلول های بتا
نام عام مواد
[پایان نامه]
نام نخستين پديدآور
حسین پور قدمیاری
وضعیت نشر و پخش و غیره
نام ناشر، پخش کننده و غيره
دانشگاه علوم پزشکی تهران، دانشکده پزشکی
تاریخ نشرو بخش و غیره
۱۳۹۶
مشخصات ظاهری
نام خاص و کميت اثر
۱۳۳ص.
ساير جزييات
جدول نمودار
مواد همراه اثر
سی دی
یادداشتهای مربوط به پایان نامه ها
جزئيات پايان نامه و نوع درجه آن
دکتری تخصصی(PHD)
نظم درجات
بیوشیمی بالینی
یادداشتهای مربوط به خلاصه یا چکیده
متن يادداشت
دیابت یکی از مهمترین علل مرگ و میر در سطح جهان به شمار میآید. مطالعات کاهش تودهی سلولی بتا را در دیابت نوع یک و مراحل نهایی دیابت نوع دو را تائید کرده¬اند. بر همین اساس یکی از درمانهای پیشنهاد شده و جدید برای این بیماری¬ها افزایش تودهی سلولی بتا و جبران سلولهای از دست رفته میباشد. در حال حاضر دو رویکرد کلی برای جبران سلولهای از دست رفته وجود دارد که عبارتند از پیوند جزایر پانکراسی و ترمیم سلول های بتا (Beta Cell Regeneration). در رویکرد پیوند جزایر لانگرهانس (Islet Transplantation) جزایر پانکراسی افراد مرگ مغزی جدا شده به بیمار دیابتی پیوند زده می شود و از این طریق توده سلولی بتاي فرد دیابتی را افزایش میدهند. این روش محدودیتهائی چون کمبود دهنده پیوند و استفاده طولانی مدت از داروهای سرکوب کننده ایمنی را نیز به همراه دارد. در رویکرد ترمیم سلولهای بتا (Beta Cell Regeneration)، با استفاده از فاکتورهای سنتتیک و یا فاکتورهای طبیعی، پانکراس را طوری تحریک میکنند که منجر به افزایش اندوژن توده سلولی بتا گردد. در حال حاضر مطالعات زیادی برای شناسایی فاکتورهای موثر در ترمیم سلولهای بتا در محیطin vivo و in vitro انجام میشود. یکی از معضلات در حیطه مطالعات ترمیمی سلولهای بتا، نبود مدل حیوانی مناسب میباشد. یکی از بهترین مدلهای حیوانی برای مطالعات ترمیمی (Regeneration)، گورخرماهی (Zebrafish) میباشد که خصوصیات مناسبی برای مطالعات ترمیمی دارد. و از طرفی مشخص گردیده که آنزیم نیترورودکتاز(NTR) با اثر بر داروی مترونیدازول (MTZ) موجب تولید ترکیبات سمی القا کننده مرگ سلولی میگردد. هدف: در این طرح پژوهشی بر آن بودیم که ژن آنزیم نیتروردوکتاز(NTR) پروکاریوتی را در سلول های بتای پانکراس گورخرماهی قرار دهیم و مدل ترانسژنی تولید کنیم که سلول های بتا به صورت القاپذیر قابل تخریب و از طرف دیگر به طور برگشت پذیر قابل ترمیم باشند. روش کار: در ابتدا سازه¬های ژنی مربوط به سیستم¬های هدف¬گیری ژن CRISPR/Cas9 و Tol2 توسط روش¬های کلونینگ و نسخه برداری در محیط in vitro تهیه گردید و این سازه¬های ژنی توسط روش میکروتزریق به سلول تخم گورخرماهی در مرحله¬ی تک سلولی وارد شدند. سپس بررسی¬های میکروسکپی بیان ژن برای تایید مدل ترانس¬ژن تولید شده انجام شد. یافته¬ها: میکروتزریق سازه¬های ژنی سیستم CRISPR/Cas9 در 1814 تخم بارور گورخرماهی انجام شد و در بررسی¬های میکروسکپی در روز چهارم پس از لقاح (4dpf) هیچکدام از جنین¬¬ها GFP را در ناحیه¬ی پانکراسی نشان ندادند. سپس میکروتزریق سازه¬های ژنی سیستم Tol2در 1206 تخم بارور گورخرماهی انجام شد و در بررسی¬های میکروسکپی در روز چهارم پس از لقاح (4dpf) GFP در ناحیه¬ی پانکراسی 27 مورد از جنین¬ها مشاهده گردید. پس از اینکه به مرحله¬ی بلوغ رسیدند از آنها جنین گیری شد و مشخص گردید یکی از آنها توانایی انتقال GFP را به نسل بعد داراست. سپس با اضافه کردن MTZ به غلظت 10 میلی مولار به مدت 24 ساعت به لاروهای ترانس¬ژن مشخص شد که سلول¬های GFP مثبت از بین می¬روند و 48 ساعت بعد از حذف MTZ از محیط لاروهای ترانس¬ژن، بررسی¬های میکروسکپی پدیدار شدن نور فلورسنت سبز ناشی از GFP را تایید کردند. همچنین بررسی¬های بیان ژنی قبل از اضافه کردن MTZ و بعد از حذف MTZ نشان دادند که MTZ به طور اختصاصی سلول¬های بتا را از بین می¬برد و علاوه بر آن این بررسی¬ها توانایی ترمیم سلول¬های بتا را در مدل ترانس¬ژن تولیدی نیز تایید کردند.
موضوع (اسم عام یاعبارت اسمی عام)
عنصر شناسه ای
دیابت
عنصر شناسه ای
Diabetes
داده رابط بین فیلدها
a09
داده رابط بین فیلدها
a09
موضوع مستند نشده
ترمیم سلول های بتا
موضوع مستند نشده
حیوان ترانس ژن
موضوع مستند نشده
سیستم مترونیدازول/نیترورودکتاز
نام شخص به منزله سر شناسه - (مسئولیت معنوی درجه اول )