عنوان

بررسی موتاسیون ژن cyp51A در جدایه های آسپرژیلوس فومیگاتوس مقاوم به دارو های آزول جدا شده از نمونه های بالینی حیوانی و محیطی

Number

پ۲۶۶۸۹

.Language of Text, Soundtrack etc

per

Title Proper

بررسی موتاسیون ژن cyp51A در جدایه های آسپرژیلوس فومیگاتوس مقاوم به دارو های آزول جدا شده از نمونه های بالینی حیوانی و محیطی

First Statement of Responsibility

رسول یوسف شرقی

Name of Publisher, Distributor, etc.

دامپزشکی

Date of Publication, Distribution, etc.

۱۴۰۰

Specific Material Designation and Extent of Item

۱۲۲ص.

Accompanying Material

سی دی

Dissertation or thesis details and type of degree

کارشناسی ارشد

Discipline of degree

دامپزشکی

Date of degree

۱۴۰۰/۱۰/۲۸

Text of Note

چکیده: آزول ها داروهای ضد قارچی هستند که مانع از بیو سنتز ارگوسترول توسط مهار 14α-demethylase می شوند. آزول ها، به عنوان مثال، ایتراکونازول، وریکونازول و پوزاکونازول از میان عوامل خط اول توصیه شده در مدیریت و پیشگیری از آسپرژیلوزیس هستند. چندین ژن کد کننده (ERG11 / cyp51)14α-demethylase برای مقاومت به فلوکونازول از جدایه های بالینی کاندیدا آلبیکنس شناسایی شده اند. نقش cyp51A در سویه های ناک اوت cyp51A ارزیابی شده است و ثابت شده است که این آنزیم مسئول حساسیت آسپرژیلوس فومیگاتوس به آزول هاست. در مطالعه حاضر نیز جهش های ژنی که یکی از عوامل ایجاد مقاومت در برابر تریازول ها می باشند، مورد بررسی قرار گرفت که شامل توالی تکراری 34 بازی یا 46 بازی و جابجایی آمینواسید شماره 98 لوسین با هیستیدین، و جابجایی آمینواسید شماره 121 تیروزین با فنیل آلانین، جابجایی آمینواسید شماره 289 ترئونین با آلانین است.در مطالعه انجام گرفته ما، پس از تهیه 48 نمونه اولیه بالینی و محیطی، از ۱۵ نمونه قارچی حاصله محتوی آسپرژیلوس فومیگاتوس که از نظر ماکروسکوپیک و میکروسکوپیک تایید شده بودند، استفاده گردید. پس از پیمودن مراحل تشخیص اولیه نمونه ها، آزمایش تعیین حساسیت دارویی سویه های قارچ آسپرژیلوس فومیگاتوس، با دارو های ضد قارچی مورد نظر انجام گردید. در مطالعه حاضر، مقاومت به پوزاکونازول تنها در یک ایزوله و همچنین در ۴ ایزوله، مقاومت به وریکونازول یا ایتراکونازول مشاهده شد. و هیچ یک از ایزوله های مقاوم به آزول به داروی پلی ان مقاومت نشان ندادند. پس از طی مراحل آزمایش تعیین حساسیت دارویی، آزمایش هایی به منظور استخراج DNA از نمونه های موجود، جهت انجام آزمایش واکنش زنجیره ای پلی مراز یا PCR به منظور آمپلیفیکاسیون قطعه ‌ای از ژن بتا توبولین(Beta 2 tubulin) و ناحیه ITS انجام گرفت و الکتروفورز در مرحله بعدی و سپس مرحله تعیین توالی برای شناسایی قطعی سویه های آسپرژیلوس فومیگاتوس صورت گرفت. و در نهایت پس از PCRژن cyp51A،تعیین توالی این ناحیه ژنی در ایزوله های مقاوم از نمونه های تایید شده آسپرژیلوس فومیگاتوس و مقایسه مطابقت آن با ژن الگوی cyp51A آسپرژیلوس فومیگاتوس در پایگاه داده های NCBI و همچنین شناسایی نواحی موتاسیون ژنی در 4 ایزوله مقاوم مذکور، با استفاده از نرم افزارMEGA5 ، انجام گردید. که بطور کلی با وجود مقاومت چهار ایزوله به داروهای وریکونازول و ایتراکونازول هیچ موتاسیونی در ژن cyp51A یافت نگردید. طبق بررسی ها و نتایج این تحقیق، مقاومت به داروهای تریازول که انتخاب اول درمان آسپرژیلوزیس در بیماری حیوانی نیز می باشد رایج است. عدم وجود موتاسیون در ژن cyp51A مورد بررسی نشان می دهد مقاومت دارویی می تواند در اثر سایر مکانیسم های مقاومت دارویی رخ داده باشد.

Text of Note

AbstractIntroduction: Azoles are antifungal drugs that inhibit the biosynthesis of ergosterol by inhibiting 14α-demethylase. Azoles are among the first-line agents recommended in the management and prevention of aspergillosis. The role of cyp51A gene in cyp51A knockout strains has been evaluated and it has been shown that this enzyme, 14α-demethylase (ERG11 / cyp51), is responsible for the susceptibility of Aspergillus fumigatus to azoles. The goal of this study, was to examine the resistance of Aspergillus isolates to the azole drugs and then analyzing the presence of mutations in the cyp51A gene in the resistant isolates collected from the intended animal clinical and environmental samples.Materials & Methods: 15 obtained fungal samples out of the first 48, containing Aspergillus fumigatus that have been macroscopically and microscopically confirmed initially, were studied. Then, the antifungal drug sensitivity test was performed to determine the resistance of Aspergillus fumigatus strains by applicating the intended drugs. At the next level, extracting the DNA from the existing samples, to perform PCR test and finally the gene sequencing phase to identify Aspergillus fumigatus strains were performed. At the next stage, the sequencing of the four resistant strains’ cyp51A gene region after amplification of the mentioned region, was also performed to select the most similar strains genetically to the Aspergillus fumigatus cyp51A template gene in NCBI databases. In the final step, determining the gene sequencing and finding the probable mutations of the cyp51A gene were done by the MEGA5 program.Results: In the present study, resistance to posaconazole was observed in only one isolate, and also four isolates showed resistance to voriconazole or itraconazole. And none were resistant to polyenes. Despite the resistance of the four isolates to voriconazole and itraconazole, no mutations were found in the cyp51A gene. Conclusion: According to the other studies and the results of this study, resistance to triazole drugs, which is also the first choice for the treatment of aspergillosis in animal diseases, is common. The absence of mutations in the studied cyp51A gene indicates that drug resistance may have occurred due to other mechanisms of drug resistance.

Variant Title

Study of Mutation of cyp51A Gene in Isolates of Azole-resistant Aspergillus fumigatus Isolated from Animal Clinical and Environmental Samples

Entry Element

‏یوسف شرقی،

Part of Name Other than Entry Element

‏رسول

Relator Code

تهيه کننده

Entry Element

‏کتیرائی،

Entry Element

‏شهباز فر،

Entry Element

مددی،

Part of Name Other than Entry Element

‏فرزاد

Part of Name Other than Entry Element

‏امیر علی

Part of Name Other than Entry Element

‏محمد صادق

Dates

استاد راهنما

Dates

استاد مشاور

Dates

استاد مشاور

Entry Element

‏تبریز