عنوان

مقایسه و ارزیابی کارآیی انتقال و بیان ژن ‮‭GFP‬ به سلول‌های یوکاریوتی توسط سازه‌های فاژی لامبدا و‮‭M۱۳‬

Number

‭۱۲۶۵۹پ‬

.Language of Text, Soundtrack etc

per

Title Proper

مقایسه و ارزیابی کارآیی انتقال و بیان ژن ‮‭GFP‬ به سلول‌های یوکاریوتی توسط سازه‌های فاژی لامبدا و‮‭M۱۳‬

First Statement of Responsibility

/سیده الهام عابدحیدری

Name of Publisher, Distributor, etc.

: دانشکده علوم طبیعی

Specific Material Designation and Extent of Item

‮‭۱۰۱‬ص‬

Text of Note

چاپی

Dissertation or thesis details and type of degree

کارشناسی ارشد

Discipline of degree

در رشته ژنتیک

Date of degree

‮‭۱۳۹۲/۱۱/۱۶‬

Body granting the degree

تبریز

Text of Note

ژن‌درمانی به عنوان روشی نوین برای درمان برخی بیماری‌های ژنتیک و سرطان، جایگاه ویژه‌ای را در عرصه پزشکی به خود اختصاص داده است .با این وجود موفقیت این روش درمانی الزامات گسترده‌ای دارد که ازآن جمله می‌توان به انتقال مؤثر ترانسژن، القاء بیان و کنترل میزان بیان در سلول هدف اشاره کرد .در میان گستره وسیعی از انواع ناقل‌های ژنی ویروسی و غیرویروسی، باکتریوفاژها به علت ویژگی‌های منحصر به فردی که دارند به عنوان حامل‌های ژنی بی‌خطر برای استفاده در بالین معرفی شده‌اند .دانشمندان تا کنون انواع متعددی از تحویل‌دهنده‌های ژنی مبتنی بر فاژ را طراحی نموده‌اند .در این میان دو فاژ و ‮‭M۱۳‬ کارآیی به نسبت خوبی را در انتقال ژن از خود نشان داده‌اند .آنچه که در رابطه با این دو ناقل فاژی حائز اهیمت می‌باشد این است که سازه‌های فاژی مبتنی بر فاژهای و ‮‭M۱۳‬ به دلیل ساختار ژنومی متفاوتی که دارند انتظار می‌رود که کارآیی متفاوتی نیز در انتقال و بیان ترانسژن از خود نشان دهند .در این مطالعه ناقل‌های ژنی-‮‭CMV -ZAP‬و ‮‭pCMV Script‬ حاوی ژن ‮‭GFP‬ به ترتیب به عنوان سازه‌های ژنی مبتنی بر فاژهای و ‮‭M۱۳‬ مورد استفاده قرار گرفتند .ابتدا ذرات فاژی - ‮‭GFP‬تکثیر شده و سپس از ذرات فاژی مذکور با روش برش و خارج‌سازی درون سلولی ‮‭(In Vivo Excision)‬ با کاربرد فاژ کمکی ‮‭R۴۰۸‬ ذرات فاژی‮‭GFP - M۱۳‬تهیه شدند .ذرات فاژی حاصل پس از تأیید و تکثیر برای آلوده‌سازی سلول‌های ‮‭AGS‬ مورد استفاده قرار گرفتند و جهت تأیید ورود ذرات فاژی، سلول‌های تیمار شده توسط میکروسکوپ فلورسانس و نیز واکنش ‮‭PCR‬ مورد بررسی قرار گرفتند .در گام بعدی برای به دست آوردن سازه‌های فاژی-‮‭GFP -CMV-ZAP‬و نیز‮‭pCMV Script GFP‬ ، به ترتیب ‮‭DNA‬ ژنومی مربوط به ذرات فاژی - ‮‭GFP‬و نیز‮‭GFP - M۱۳‬تکثیر شده، استخراج و برای آلوده‌سازی سلول‌های ‮‭AGS‬ مورد استفاده قرار گرفتند .در نهایت کارآیی انتقال و بیان ژن ‮‭GFP‬ در سلول‌های ‮‭AGS‬ توسط دستگاه ‮‭FACS‬ مورد بررسی قرار گرفت .بررسی میکروسکوپی سلول‌های تیمار شده با ذرات فاژی‮‭GFP - M۱۳‬و نیز نتایج واکنش ‮‭PCR‬ نشان می‌دهد که درصد کمی از سلول‌های ‮‭AGS‬ ذرات فاژی مذکور را دریافت نموده‌اند .هم‌چنین بررسی سلول‌های ‮‭AGS‬ با دستگاه ‮‭FACS‬ نشان می‌دهد که آن دسته از سلول‌هایی که سازه‌های فاژی- ‮‭CMV -ZAP-GFP‬را دریافت نموده‌اند در مقایسه با سلول‌هایی که سازه ژنی ‮‭pCMV Script GFP‬ را دریافت نموده‌اند، نه تنها تعداد سلول‌های ‮‭GFP‬ مثبت بیشتری نشان می دهند بلکه شدت بیان ژن ‮‭GFP‬ نیز بیشتر می‌باشد .این نتایج می‌تواند مؤید این مطلب باشد که ناقل‌های ژنی مبتنی بر ذرات فاژی لامبدا به علت ساختار ژنومی ‮‭DNA‬ دورشته‌ای که دارند، نسبت به تحویل‌دهنده‌های ژنی مبتنی بر فاژ ‮‭M۱۳‬ کارآیی بیشتری را در انتقال و بیان ترانسژن از خود نشان می‌دهند

Text of Note

GFP construct show highest percentage of GFP positive cells and Mean fluorescence intensity in comparision with cells that received pCMV Script GFP construct. These results may confirm that Lambda phage based gene carriers due to dsDNA genomic structure are more efficient in transgene delivery and expression in comparision to M13 phage based gene carriers-CMV-ZAP-GFP phage particles and also the results of PCR reaction show that a low percentage of cells received mentioned particles. As well, the results of FACS assay shows that AGS cells that received -GFP have been extracted and then used for transfecting AGS cell line. Finally the efficiency of transfering and expression of GFP gene to AGS cells was evaluated by FACS calibur. Microscopic assay of treated cells with M13-GFP and M13-GFP and pCMV Script GFP constructs, genomic DNA of -CMV-ZAP-GFP phage particles, they have been used for transfecting AGS cell line. The treated cells were assayed by fluorescence microscopy and PCR reaction. In the second step, to gain -GFP phage particles produced. After verifying and amplification of M13-GFP phage particles amplified and then via In vivo excision protocol and in the presence of R408 helper phage M13-CMV and pCMV Script vectors have been used as and M13 based gene carriers, respectively. First, -ZAP-Gene therapy as a new method has dedicated a special place in modern medicine that promise to cure some genetic disorders and cancer. The success of this method is largely dependent on the efficient delivery of the transgene, inducing and controlling its expression. Among a wide range of viral and non viral gene vectors, bacteriophages due to their unique features, have been proposed as a safe delivery vehicle. So far scientists have designed many kinds of phage based vectors. Through them, phages have indicated high efficiency in transgene delivery. It is expected that and M13 show different efficiency in transgene delivery and expression, as a result of different genomic structure. In the current study,

عابدحیدری، سیده الهام

خلج کندری، محمد، استاد راهنما

حسینپور فیضی، محمدعلی، استاد مشاور

Public note

سیاه و سفید

نمایه‌سازی قبلی