عنوان

بررسی بیان ژن های التهابی COX2 و TNFSF-10 و HGF در سلول های بنیادی انسانی مشتق از بافت چربی کشت شده روی داربست حاوی پودر نانوهیدروکسی آپاتیت

Number

پ۲۴۲۹۹

.Language of Text, Soundtrack etc

per

Title Proper

بررسی بیان ژن های التهابی COX2 و TNFSF-10 و HGF در سلول های بنیادی انسانی مشتق از بافت چربی کشت شده روی داربست حاوی پودر نانوهیدروکسی آپاتیت

First Statement of Responsibility

نسا برپور

Name of Publisher, Distributor, etc.

علوم طبیعی

Date of Publication, Distribution, etc.

۱۳۹۹

Specific Material Designation and Extent of Item

۷۴ص.

Accompanying Material

سی دی

Dissertation or thesis details and type of degree

کارشناسی ارشد

Discipline of degree

ژنتیک

Date of degree

۱۳۹۹/۱۱/۲۸

Text of Note

چکیدهزمينه و هدف: سلول های بنیادی مزانشیمی مورد مناسبی برای درمان بسیاری از بیماری ها توسط پزشکی بازساختی و مهندسی بافت می باشند. بافت چربی به عنوان یک منبع که دسترسی به آن آسان و ارزان قیمت می باشد، برای سلول های بنیادی مزانشیمی در سلول درمانی مورد توجه قرار گرفته است.این مطالعه به هدف بررسی کارایی اسکافولد ساخته شده و سنجش میزان بیان ژن های التهابی نظیر COX2 ،TNFSF10 ،HGF در جهت بررسی میزان التهاب در سلول های بنیادی مشتق از بافت چربی انسانی که در شرایط مختلف محیط کشت ساده، اسکافولد نانوهیدروکسی آپاتیت حاوی آلندرونات و اسکافولد نانوهیدروکسی آپاتیت فاقد آلندرونات کشت داده شده اند، صورت گرفت.روش بررسی: سلول های بنیادی چربی انسانی به روش آنزیمی از بافت چربی فرد سالم تهیه و پس از انجام مراحل مختلف کشت، قدرت تکثیر و قابلیت زیست پذیری سلول ها با استفاده از تست MTT بررسی شد. هم چنین به جهت بررسی کارایی داربست زیست تخریب پذیر استفاده شده نیز از تست MTT استفاده شد و در نهایت نیز بیان ژن ها در سه شرایط مختلف توسط Real Time PCR مورد ارزیابی قرار گرفت.نتایج: بیان متفاوتی در mRNA ژن های COX2 ،TNFSF10 ،HGF در شرایط مختلف تحت بررسی مشاهده گردید. همچنین اسکافولد نانوهیدروکسی آپاتیت استفاده شده باعث افزایش تکثیر سلول ها نسبت به کشت عادی می شود. نتیجه گیری: مطالعه حاضر به بررسی بیان ژن های COX2 ،TNFSF10 ،HGF در شرایط مختلف کشت پرداخته که به نقش مهم اسکافولد نانوهیدروکسی آپاتیت در تنظیم فعالیت سلول های بنیادی مزانشیمی مشتق از چربی از جمله نقش تعدیل و تنظیم نمودن سیستم ایمنی و التهاب با مشاهده ی تفاوت در بیان ژن ها پی برده شد. به این صورت که ژن COX2 در شرایط رشد و تکثیر سلول ها در حضور اسکافولد فاقد داروی ضد التهاب آلندرونات در مقایسه با شرایط کشت عادی، بیان ژن اندکی کاهش یافته ولی این کاهش معنادار نمی باشد و رشد و تکثیر سلول ها در حضور اسکافولد محتوی داروی آلندرونات در مقایسه با شرایط عادی کشت و نیز شرایط رشد در حضور اسکافولد بدون دارو، بیان ژن افزایش معناداری یافته است که تایید کننده نقش ضد التهابی داروی آلندرونات و تقویت خاصیت ضد التهابی ژن COX2 می باشد. بیان ژن TNFSF10، در شرایط رشد سلول ها در حضور اسکافولد با دارو در مقایسه با سایر حالات کاهش یافته که این کاهش معنادار نبود. و همچنین بیان این ژن در شرایط رشد سلول ها در حضور اسکافولد بدون دارو در قیاس با سایر حالات به طور معناداری افزایش نشان داد که تایید کننده نقش ضد التهابی داروی آلندرونات و نیز تایید کننده نقش تقویت کنندگی التهاب توسط اسکافولد می باشد. در ارتباط با ژن HGF ، بیان این ژن در هر دو شرایط رشد سلول ها بر روی اسکافولد با و بدون داروی آلندرونات در مقایسه با کشت عادی کاهش یافته بود ولی این کاهش بیان در هیچکدام از موارد معنادار نبود.

Text of Note

Background: Mesenchymal stem cells are suitable for the treatment of many diseases by regenerative medicine and tissue engineering. Adipose tissue has been considered as an easy and inexpensive source for mesenchymal stem cells in cell therapy.The aim of this study was to evaluate the efficiency of new built scaffold and to measure the expression of some inflammatory genes such as COX2, TNFSF10, HGF in order to evaluate the level of inflammation in human adipose tissue-derived stem cells in different culture conditions such as: simple medium culture, culture on nano hydroxyapatite scaffold containing alendronate and the third one is culturing on nano hydroxyapatite scaffold without alendronate.Methods: Human adipose stem cells were prepared enzymatically from adipose tissue of a healthy person and after performing different stages of culture, proliferation and viability of cells were assessed using MTT test. MTT test was also used to evaluate the performance of the biodegradable scaffold and finally the expression of genes in three different conditions was evaluated by Real Time PCR.Result: Different expression was observed in mRNA of COX2, TNFSF10, HGF genes under different conditions. The nano hydroxyapatite scaffold also increases cell proliferation compared to normal culture.Conclusions: The present study investigated the expression of COX2, TNFSF10, HGF genes in different culture conditions, different expression of genes is one of the consequents of using nano hydroxyapatite scaffold which has role in regulating the activity of fat-derived mesenchymal stem cells, including the role of modulating and regulating the immune system and inflammation that confirmed by the different expression of genes. In this case, the expression of COX2 gene in the growth and proliferation of cells in the presence of scaffold without alendronate compared to normal culture, the expression is slightly reduced but this reduction is not significant. The growth and proliferation of cells in the presence of scaffold containing Alendronate compared with normal culture conditions and proliferation in the presence of drug-free scaffold, gene expression increased significantly, which confirms the anti-inflammatory role of alendronate and enhances the anti-inflammatory properties of COX2 gene. The expression of TNFSF10 gene decreased in cell growth conditions in the presence of scaffold with the drug compared to other conditions, but this decrease was not significant. Also, the expression of this gene in the conditions of cell growth in the presence of drug-free scaffold in comparison with other cases showed a significant increase that confirms the anti-inflammatory role of alendronate and also confirms the role of scaffold in inflammation. In relation to HGF gene, the expression of this gene was decreased in both cell growth conditions on scaffold with and without alendronate compared to normal culture, but this reduction in expression was not significant in either case.

Variant Title

Expression analysis of inflammatory genes, COX2 , TNFSF-10 and HGF, in the Adipose derived stem cells cultured on scaffold containing nano-hydroxyapatite

Entry Element

‏ برپور،

Part of Name Other than Entry Element

‏‏ نسا

Relator Code

تهيه کننده

Entry Element

‏ زینال زاده،

Entry Element

‏روشنگر،

Entry Element

‏قربانی،

Part of Name Other than Entry Element

‏‏نرگس

Part of Name Other than Entry Element

‏لیلا

Part of Name Other than Entry Element

مرجان

Dates

استاد راهنما

Dates

استاد راهنما

Dates

استاد مشاور

Entry Element

تبریز