عنوان

بررسی اثر سرکوب ژن LncRNA PVT1 و پاکلیتاکسل بر رشد، آپوپتوز و مهاجرت ردهی سلولی AGSسرطان معده

شماره

پ۲۸۳۹۵

زبان متن نوشتاري يا گفتاري و مانند آن

per

عنوان اصلي

بررسی اثر سرکوب ژن LncRNA PVT1 و پاکلیتاکسل بر رشد، آپوپتوز و مهاجرت ردهی سلولی AGSسرطان معده

نام نخستين پديدآور

بهار ناصری ممقانی

نام ناشر، پخش کننده و غيره

علوم طبیعی

تاریخ نشرو بخش و غیره

۱۴۰۱

نام خاص و کميت اثر

۷۸ص.

مواد همراه اثر

سی دی

جزئيات پايان نامه و نوع درجه آن

کارشناسی ارشد

نظم درجات

زیست شناسی، گرایش سلولی و مولکولی

زمان اعطا مدرک

۱۴۰۱/۱۱/۱۸

متن يادداشت

سرطان معده جزء سرطان های رایج می¬باشد و در اغلب موارد بیماران در مراحل پیشرفته بیماری و زمانی که فرصت مناسب برای جراحی از دست رفته ¬است؛ شناسایی می¬شوند. از دلایل شکست درمان سرطان معده می¬توان مهاجرت سلولی و مقاومت دارویی را نام برد. در نتیجه شناسایی ژن‌های مهم درگیر در سرطان معده و اهداف مولکولی جدیدی که ‌بتوانند در تشخیص زودهنگام و درمان سرطان معده مفید باشند، ضروری می¬باشد. RNA های بلند غیر کد کننده (LncRNAs) دارای نقش های بحث برانگیز در تشخیص و درمان سرطان هستند که ممکن است سرکوب کننده و یا تقویت کننده تومور باشند. در این میان ژن LncRNA PVT1 یکی از مهم¬ترین ژ¬ن¬های درگیر در سرطان می¬باشد؛ بطوریکه وجود تعداد زیادی مکان¬های برهمکنش تنظیمی بر روی آن¬ موجب شده¬ است که اهداف بالقوه¬ای برای توسعه داروهای جدید سرطانی فراهم شود. بررسی¬ها نشان داده¬است که ژنLncRNA PVT1 بیان بالایی در سلول¬های سرطانی معده دارد و موجب افزایش پیشروی سرطان معده می¬شود؛ بنابراین میتواند در تشخیص سرطان معده نقش داشته باشد و یک هدف درمانی نوید¬بخش برای سرطان معده باشد. پاکلیتاکسل یک داروی شیمی درمانی ضد سرطان بسیار قوی با فعالیت سیتوتوکسیک علیه بسیاری از سلول¬های سرطانی است که نتایج امیدوار کننده¬ای در درمان بیماران مبتلا به سرطان معده نشان داده¬ است. پاکلیتاکسل باعث القای توقف چرخه سلولی و همچنین ایجاد آپوپتوز در سلول¬های سرطانی می¬شود. با توجه به اهمیت نقش ژنLncRNA PVT1 در پیشرفت سرطان و نقش آن در ایجاد مقاومت دارویی و نیز با توجه به نقش شناخته شده داروی شیمی درمانی پاکلیتاکسل در درمان انواع مختلف سرطان¬ها؛ در این پژوهش اثرات ترکیبی و مجزای سرکوب بیان ژنLncRNA PVT1 با استفاده از siRNA اختصاصی آن و تیمار با پاکلیتاکسل بر روی میزان آپوپتوز، رشد و مهاجرت سلول¬های رده AGSسرطان معده مورد بررسی قرار گرفت. در این مطالعه، سلول¬های سرطانی AGS کشت داده شدند و سپس ترانسفکت با siPVT1 انجام گرفت. جهت بررسی تاثیر سرکوب LncRNA PVT1 و تیمار با داروی پاکلیتاکسل بر بقای سلول¬های سرطانی معده، از تست MTT استفاده شد. همچنین مهاجرت سلول¬ها با استفاده از تست خراش مورد بررسی قرار گرفت. علاوه بر این، تاثیرتیمار دارو و سرکوب LncRNA PVT1 بر روی فرایند چرخه سلولی و نیز القاء آپوپتوز در سلول¬های سرطانی معده با استفاده از روش فلوسایتومتری ارزیابی شد. در نهایت بیان نسبی ژن¬های LncRNA PVT1، MMP3،MMP9،MDR1،MRP1،Bax،Bcl-2،K-Ras و c-Myc با استفاده از روش qRT-PCR مورد ارزیابی قرار گرفت. یافته¬های حاصل از تست MTT نشان داد که سرکوب بیان ژن LncRNA PVT1 به همراه تیمار با پاکلیتاکسل موجب کاهش بقای سلول¬های سرطانی می¬شود. همچنین نتایج حاصل از تست خراش نشانگرکاهش مهاجرت و متاستاز سلول¬های سرطانی معده در گروه درمان ترکیبی بود. نتایج فلوسایتومتری نشان داد که ترنسفکت siPVT1 به همراه تیمار با پاکلیتاکسل بطور معنی داری میزان آپوپتوز سلول¬های سرطانی را افزایش می¬دهد. همچنین در گروه درمان ترکیبی در مقایسه با گروه کنترل تعداد سلول¬هایی که در مرحله G2متوقف شده¬اند افزایش معنی داری داشت. بر اساس نتایج qRT-PCR، درمان ترکیبی در مقایسه با گروه کنترل بطور معنی داری باعث کاهش بیان ژن های MMP3، MMP9،MDR1، MRP1، Bcl-2، K-Ras و c-Mycو افزایش بیان ژن Bax شد. نتایج مطالعه ما نشان داد که سرکوب بیان ژن LncRNA PVT1 به همراه تیمار با پاکلیتاکسل موجب القاء آپوپتوز، مهار رشد، از بین بردن مقاومت دارویی و کاهش مهاجرت سلول¬های سرطانی معده می¬شوند. بنابراین؛ می¬توان نتیجه گرفت که سرکوب بیان ژن LncRNA PVT1 به همراه تیمار با پاکلیتاکسل می¬تواند رویکرد موثری جهت مهار مهاجرت و بقای سلولی، القاء آپوپتوز و کاهش مقاومت به پاکلیتاکسل در سرطان معده باشد.

متن يادداشت

Stomach cancer is one of the most common cancers, and in most cases, patients are detected in the advanced stages of the disease and when the right opportunity for surgery has been missed. Cell migration and drug resistance are the most common reasons for stomach cancer treatment failure. As a result, it is necessary to identify important genes involved in gastric cancer and new molecular targets that can be useful in the early diagnosis and treatment of gastric cancer. Long non-coding RNAs (LncRNAs) have controversial roles in cancer diagnosis and treatment, which may be tumor suppressors or promoters. Meanwhile, the LncRNA PVT1 gene is one of the most important genes involved in cancer; so that the existence of a large number of regulatory interaction sites on it has made it possible to provide potential targets for the development of new cancer drugs. Investigations have shown that the LncRNA PVT1 gene has a high expression in gastric cancer cells and increases the progression of gastric cancer; therefore, it can play a role in the diagnosis of stomach cancer and be a promising therapeutic target for stomach cancer. Paclitaxel is a very strong anticancer chemotherapy drug with cytotoxic activity against many cancer cells, which has shown promising results in the treatment of gastric cancer patients. Paclitaxel induces cell cycle arrest and causes apoptosis in cancer cells. Considering the importance of the role of the LncRNA PVT1 gene in cancer progression and its role in inducing drug resistance, and also considering the well-known role of the chemotherapy drug paclitaxel in the treatment of various types of cancers, in this research, the effects of the LncRNA PVT1 gene silencing using a specific siRNA in combination with the treatment with paclitaxel on the rate of apoptosis, growth, and migration of AGS gastric cancer cells were investigated. In this study, AGS cancer cells were cultured and then transfected with siPVT1. MTT test was used to investigate the effect of suppression of LncRNA PVT1 and treatment with paclitaxel on the viability of gastric cancer cells. Also, the migration of cells was investigated using the scratch test. In addition, the effect of drug treatment and knockdown of LncRNA PVT1 on the cell cycle process and induction of apoptosis in gastric cancer cells was evaluated using flow cytometry method. Finally, the gene expression of LncRNA PVT1, MMP3, MMP9, MDR1, MRP1, Bax, Bcl-2, K-Ras, and c-Myc was evaluated using the qRT-PCR method. The results of the MTT test showed that suppressing the expression of the LncRNA PVT1 gene along with paclitaxel treatment reduces the viability of cancer cells. Also, the results of the scratch test showed a decrease in the migration and metastasis of gastric cancer cells in the combined treatment group. Flow cytometry results showed that siPVT1 transfection along with paclitaxel treatment significantly increases the apoptosis rate of cancer cells. Also, in the combined treatment group, compared to the control group, there is a significant increase in the number of cells that have been arrested in the G2 phase. Based on the results of qRT-PCR, combined treatment significantly decreased the expression of MMP3, MMP9, MDR1, MRP1, Bcl-2, k-Ras, and c-Myc genes and increased the expression of Bax gene compared to the control group. The results of our study showed that suppressing the expression of the LncRNA PVT1 gene together with paclitaxel treatment induces apoptosis, inhibits growth, eliminates drug resistance, and reduces the migration of gastric cancer cells. Therefore, it can be concluded that suppression of LncRNA PVT1 gene expression along with paclitaxel treatment can be an effective approach to inhibit cell migration and survival, induce apoptosis and reduce resistance to paclitaxel in gastric cancer.

عنوان گونه گون

Investigation of LncRNA PVT1 gene knockdown and Paclitaxel effects on growth, apoptosis and migration in gastric cancer cell line AGS

عنصر شناسه اي

‏ناصری ممقانی،

ساير عناصر نام

‏‏بهار

کد نقش

تهیه کننده

عنصر شناسه اي

‏ فرساد اختر،

عنصر شناسه اي

‏ شانه بندی،

ساير عناصر نام

‏‏نادر

ساير عناصر نام

‏داریوش

تاريخ

استاد راهنما

تاريخ

استاد راهنما

عنصر شناسه اي

‏تبریز