پ۲۴۸۲۱
per
ارزیابی اثرات ترهالوز و ویتامین C بعنوان محافظت‌کننده سرمایی بر میزان زنده‌مانی و تکثیر سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی گوسفند
سمیرا کلانتری
: دامپزشکی
۱۰۴ص.
سی دی
کارشناسی ارشد
علوم درمانگاهی
۱۳۹۷/۱۲/۰۴
دستکاری ژنتیکی سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی (SSCs) می‌تواند تکنولوژی‌های باروری را بهبود بخشیده و حیوانات تراریخته را در طیف وسیعی از گونه‌ها توسعه دهد. با این حال، این تکنولوژی‌ها به‌دلیل عدم وجود یک سیستم کشت ایده‌آل برای حفظ و تکثیرSSCs، به‌ویژه در حیوانات اهلی مانند گوسفند، داری محدویت است. هدف از انجام این مطالعه بررسی اثرات ویتامین C و ترهالوز و ترکیب آنها در محیط پایه انجماد بر میزان زنده‌مانی و تشکیل کلونی سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی (SSCs) پس از انجماد می‌باشد. برای این منظور، جداسازی سلول‌های SSC با هضم آنزیمی دو مرحله‌ای انجام شد. پس از غنی سازی و کشت، SSC ها با استفاده از بیان ژن‌های Bax ، Bcl-2 و GAPDH به‌عنوان نشانگرهای اختصاصی سلول‌های بنیادی، شناسایی شدند. برای به حداکثر رساندن کارایی انجماد و نگهداری SSC (مدت انجماد 1 هفته و 2 هفته)، اثرات عوامل محافظت کننده سرمایی (ویتامین C و ترهالوز و ترکیب آنها) مورد آزمایش قرار گرفتند. انجماد در حضور 200 میلی مولار ترهالوز + 40 میکروگرم ویتامین C موجب افزایش قابل ملاحظه‌ای در زنده‌مانی سلول‌های SSC شد، در صورتی که اضافه کردن ویتامین C افزایش معناداری در زنده‌مانی سلول‌ها در مقایسه با کنترل نداشت. همچنين انجماد در حضور 200 ميلي مولار ترهالوز و ترکيب آنها (ويتامين C و ترهالوز) باعث تشکيل کلوني‌هاي بيشتري از SSC در مقايسه با گروه کنترل شد. این داده‌ها نشان می‌دهد که سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی گوسفند می‌توانند در حضور 200 میلی مولار ترهالوز و در ترکیب با ویتامین C با کارایی بیشتری منجمد و نگهداری شوند. با این حال، یافته‌های این مطالعه همچنین نشان می‌دهد که نیاز به تحقیقات بیشتری در ارتباط با بهبود کارایی انجماد و نگهداریSSC های گوسفند وجود دارد
The genetic manipulation of spermatogonial stem cells (SSCs) can facilitate assisted reproductive technologies and the development of transgenic animals in a wide range of species. However, this technology is limited by the absence of an ideal culture system in which SSCs can be maintained and proliferated, especially in domestic animals like the sheep. The aim of present study was to investigate the effects of vitamin C and Trehalose and their combination in basal freezing medium on viability and colony formation of post thaw transfected spermatogonial stem cells (SSCs). For this purpose, the isolation of SSC was performed by double enzymatic digestion twice. After enrichment and culture, SSCs were characterized by using expression of Bax, Bcl-2 and GAPDH genes as specific stem cell markers. To maximize the efficiency of SSC cryopreservation (frozen for 1 and 2 weeks), the effects of cryoprotective agents (vitamin C and Trehalose and their combination) were tested. Freezing in 200 mM trehalose + 40µg vitamin C resulted in significantly greater cell viability of SSCs, however addition of vitamin C did not result in increased cell viability compared to control, but their combination increased cell viability compared to control too. These data demonstrate that ovine spermatogonial stem cells can be efficiently cryopreserved in the presence of 200 mM trehalose and in combination with vitamin C. Nevertheless, the findings of this study also suggest the need for further research regarding improvement of the efficiency of SSCs cryopreservation.
Evaluation the effects of trehalose and vitamin C as a cryoprotectant on viability and proliferation ovine spermatogonial stem cell
کلانتری،
سمیرا
تهيه کننده
اسدپور،
جعفری جوزانی،
شهبازفر،
رضا
رضی الله
امیرعلی
، استاد راهنما
، استاد مشاور
، استاد مشاور
تبریز
