همسانه سازی نواحی جناحین ناقل های پلاستیدی در کتان
/شیرین میرآقائی
: کشاورزی
چاپی
کارشناسی ارشد
به نژادی و بیوتکنولوژی
۱۳۹۳/۰۶/۲۵
تبریز
تکنولوژی انتقال ژن به کلروپلاست های گیاهان، یک روش ارزشمند و در حال توسعه در مهندسی ژنتیک است این امر به دلایل مختلفی مانند سطح بالای بیان پروتئین، امکان بیان اپرونی، نبود اثرات خاموشی ژن، پلیوتروپی، اثرات موضعی و شرایط خاص ایمنی زیستی و غیره می باشد .ناقلین کلروپلاستی برای هر گونه گیاهی، حالت اختصاصی دارند و این به خاطر ورود ترانس ژن، در پدیده نوترکیبی همتا ست .وقوع این پدیده به واسطه حضور توالی های همولوگ از ژنوم کلروپلاست میزبان، در دو طرف کاست ژنی می باشد،،که در طراحی و ساخت ناقل های انتقال ژن باید در نظر گرفته شوند .در این تحقیق همسانه سازی ناحیهrrn۵ - rrn۲۳ از ژنوم کلروپلاست کتان، به عنوان نواحی جناحین ناقل های پلاستیدی در نظر گرفته شد .طراحی آغازگرهای اختصاصی برای تکثیر این نواحی به کمک نرم افزارهایBlast - Primerو Analyzer Oligo صورت پذیرفت .پس از استخراج ژنوم کل وتکثیر قطعه با واکنش زنجیره ای پلیمراز، و ارزیابی توسط الکتروفورز ژل آگاروز، عملیات همسانه سازی از طریق روشT/A - cloning و دستورالعمل کیت مربوطه انجام گرفت .پس از موفقیت در همسانه سازی و تایید حضور قطعه ژنوم کلروپلاستی در ناقل پلاستیدی، توالی نوکلئوتیدی آن تعیین گردید و سپس با دسترسی به این توالی نوکلئوتیدی، نسبت به تایید مولکولی آن از طریق نرم افزار بیوانفورماتیکی اقدام شد .با توجه به این که ژنوم کلروپلاست گیاه کتان توالی یابی نشده، بلاست توالی بدست آمده از قطعهrrn۵ - rrn۲۳با توالی های مشابه درNCBI ، بیشترین تشابه را با گیاهانی از قبیل اکنا) گلابی وحشی(، بید، کرچک و غیره را نشان داد و به این ترتیب صحت همسانه سازی تایید شد
Gene transfer to the chloroplasts of plants,as a valuable technique in genetic engineering were fast developing during last two decade because of variety reasons such as high level of protein expression, possibility of polycistronic gene expression, lack of gene silencing, Pliotropy and biosafety aspects. Chloroplast vectors for each species allon to enter of transgenes by recombination phenomenon at de find region. In this study, the cloning of rrn23- rrn5 region of chloroplast genome was considered. Primers designed to amplify this region using Primer-Blast software and Oligo Analyzer occurred. After extracting the entire genome fragments were amplified by polymerase chain reaction and evaluated by agarose gel electrophoresis, cloning operation was done by kit. cloning T/A and the instruction sets were used. Since the chloroplast genome of flax has not been reported, blast studis of target fragments with gene bank showed the greatest similarity with plants such as Ochna, tree), Salix, Ricinus, ... And in this way cloned authenticity has been verified