کلون کردن ژن های sopE، aroA ، hilA و galE و بررسی تاثیر آنها در رده های سلول های(- THP ۱مونوسیت(، )J۷۷۴A ماکروفاژ (و) HT۲۹ اپیتلیال کولون (در پی برخورد با LPS سالمونلا تایفی موریوم و سالمونلا انترایتیدیس
/یاسمن افرازه
: دانشکده دامپزشکی
۸۷ص
چاپی
دکترای حرفه ای
دامپزشکی
۱۳۹۱/۰۶/۱۹
تبریز
سالمونلا انترایتیدیس و سالمونلا تایفی موریوم به عنوان دو سروتایپ بسیار مهم و بیماری زای سالمونلا در انسان و حیوانات شناخته می شوند و در ایران نیز بسیار شیوع دارند .در این تحقیق چهار ژن شاخص و مهم در سالمونلا با کارکردهای مهم در متابولیسم و پاتوژنز برای اولین بار از جهت توانایی تحریک سیستم ایمنی ذاتی و نیز ایجاد مقاومت در برابر اثرات مخرب) LPSبه عنوان مدلی از عفونت با سالمونلا انترایتیدیس و سالمونلا تایفی موریوم (مورد بررسی قرار گرفتند(sopE ،hilA ، galE و .aroA) به طور خلاصه پس از ساخت پرایمر های اختصاصی برای هر ژن، به کمک PCR این ژن ها از سالمونلا انترایتیدیس تکثیر و خالص سازی شدند، در پلاسمید ناقل و باکتری اشریشیا کلای استاندارد کلون شده، پس از تکثیر مجددا استخراج گرید و در سلول های یوکاریوتی(- THP ۱مونوسیت(،J۷۷۴A ( ماکروفاژ (و) HT۲۹ اپیتلیال کولون (کلون شدند .کلون شدن و تثبیت این ژن ها در سلول ها در هر مرحله با PCRتایید گردید .این سلول ها با و بدون پلاسمید کلون شده، با LPSسالمونلا تایفی موریوم و سالمونلا انترایتیدیس برخورد داده شدند .سپس نحوه تاثیرLPS بر سلول ها، اثر متقابل سلول ها بر یکدیگر و سیتوتوکسیسیتی احتمالی رده های مونوسیت و ماکروفاژ بر روی سلول اپیتلیال کولون مورد بررسی قرار گرفت
extracted following amplification and then cloned in eukaryotic cells. At any stage, we confirmed the establishment of cloned genes in the cells by PCR. The cells with or without cloned plasmids were challenged with LPS of Salmonella Typhimurium and Salmonella Enteriditidis. Finally, the effects of LPS on cells, interaction between cells and potential cytotoxicity of monocyte/macrophage lineages on colonal epithelial cells were investigated-Salmonella Typhimurium and Salmonella Enteriditidis are known to be important pathogenic Salmonella serotypes in humans and animals and are also very common in Iran. In this survey, four prominent genes (aroA, sopE, galE, hilA) owing to their Important functions in metabolism and pathogenesis were investigated regarding their potency of the innate immune system stimulation and development of resistance to the destructive effects of LPS (as a model of infection with Salmonella Typhimurium and Salmonella Enteriditidis). Following the design of specific primers for each gene, the genes were amplified from Salmonella Typhimurium and Salmonella Enteriditidis using PCR. Afterwards, PCR products were cloned in the AT plasmid vector and the Escherichia coli standard bacterium DH5, re