بررسي اثر غلظت های مختلف اسید هیالورونیک در رقیق کننده برروی کیفیت منی گاوهای نر سیمنتال با قدرت تحمل انجماد پایین و بالا
محمدرضا امینی راد
دامپزشکی
۱۴۰۰
۷۳ص
سی دی
دکتری
دامپزشکی
۱۴۰۰/۰۶/۳۱
چکیده:هدف از این مطالعه، بررسي اثر غلظت¬های مختلف اسید هیالورونیک در رقیق کننده برروی کیفیت منی گاوهای نر سیمنتال با قدرت تحمل انجماد پایین و بالا بود. 6 راس گاو سیمنتال 3 تا 5 ساله جهت جمع آوری اسپرم انتخاب شده و اسپرم¬گیری به وسیله مهبل مصنوعی انجام گرفت. در این مطالعه، فقط نمونه¬های اسپرم با تحرک پیش¬رونده بیش از 70% ، غلظت اسپرم بیش از 1×〖10〗^9 و ریخت¬شناسی غیرطبیعی کمتر از 10% مورد استفاده قرار¬گرفتند. برای به حداقل رساندن تفاوت¬های فردی، انزال¬ها جمع شده و طبق طرح تجربی به چهار قسمت تقسیم شدند. تيمارهاي مورد استفاده در اين مطالعه شامل: گروه 1) رقيق كننده فاقد اسید هیالورونیک به عنوان گروه شاهد یا کنترل، گروه 2) رقیق کننده حاوی 1میلی مولار ، گروه 3) رقيق كننده حاوي 2 ميلي مولار اسید هیالورونیک (HA) ، گروه 4) رقيق کننده حاوی 4 میلی مولار اسید هیالورونیک(HA) می¬باشند. فراسنجه¬های تحرک و تحرک پیش رونده ، زنده مانی و ریخت شناسی، عملکرد غشای پلاسمایی ، اسپرم¬های زنده ، شبه آپوپتوز و مرده (تعیین آپوپتوز اسپرم) و پتانسیل غشای میتوکندری مورد بررسی قرار گرفت. داده¬ها با روش تحلیل واریانس روشی (ANOVA ) ارزیابی گردید. افزودن دوز بالای اسید هیالورونیک (4 میلی مولار) به رقیق کننده اسپرم گاوهای با قدرت تحمل انجماد خوب باعث کاهش معنی¬دار سرعت اسپرم در خط مستقیم (VSL) ، فرکانس حرکات جانبی (BCF) و معیار مستقیم بودن حرکت اسپرم (STR) در مقایسه با گروه کنترل و سایرگروه¬های درمان شد. افزودن 1 میلی مولار اسید هیالورونیک به رقیق کننده اسپرم با قدرت تحمل انجماد خوب باعث افزایش معنی¬دار میزان معیار خطی بودن اسپرم(LIN) در مقایسه با گروه کنترل گردید. اضافه کردن دوزهای مختلف اسید هیالورونیک به رقیق کننده انجماد گاوهای با قدرت تحمل انجماد قوی تاثیر معنی داری بر روی میزان زنده مانی اسپرم گاوها پس از یخ گشایی نداشت. نتایج افزودن دوزهای مختلف اسید هیالورونیک به رقیق کننده اسپرم گاوهای با قدرت تحمل انجماد خوب نشان داد میزان سلامتی غشاپلاسمای اسپرم در مقایسه با گروه کنترل افزایش معنی¬داری داشت. افزودن 1میلی مولار اسید هیالورنیک به رقیق کننده منجمد گاو های با قدرت تحمل انجماد بالا نشان داد میزان زنده مانی اسپرم در مقایسه با گروه 2 میلی مولار بطور معنی داری بالاتر بود. افزودن 1 میلی مولار اسید هیالورونیک به رقیق¬کننده انجماد گاوهای با قدرت تحمل انجماد پایین منجر به افزایش معنی¬دار درصد سلول¬های زنده در مقایسه با گروه تیمار 4 میلی مولار اسید هیالورونیک گردید. علاوه¬براین افزودن2 میلی مولار اسید هیالورونیک به رقیق¬کننده گاوهای با قدرت تحمل انجماد بالا منجر به افزایش معنی¬دار درصد سلول¬های با آپوپتوز اولیه در مقایسه با گروه کنترل شد. درحالیکه افزودن دوز 1 میلی مولار اسید هیالورونیک به رقیق کننده اسپرم گاوهای با قدرت تحمل انجماد پایین باعث کاهش معنی¬دار درصد سلول¬های آپوپتوتیک تاخیری نسبت به گروه تیمار 4 میلی مولار اسید هیالورونیک شد. مقایسه درصد سلول¬های آپوپتوتیک تاخیری در دو گروه گاو نشان داد درصد این سلول¬ها در تیمار4 بطور معنی¬داری با یکدیگر متفاوت هستند. در حالیکه افزودن دوز 1 میلی مولار و 2 میلی مولار اسید هیالورونیک به رقیق کننده گاوهای با قدرت تحمل انجماد ضعیف منجر به افزایش معنی¬دار پتانسیل عملکرد غشامیتوکندری در مقایسه با اسپرم گاوهای گروه کنترل و تیمار 4 میلی مولار شد. نتایج نشان داد عملکرد پتانسیل غشاپلاسمایی اسپرم بین دو گروه گاوها تفاوت معنی¬داری دارد و تاثیر اضافه کردن اسید هیالورونیک به رقیق¬کننده منجر به پاسخ¬های متفاوت در دو گروه گاوها می¬شود.
Abstract:The purpose of this study was to investigate the effect of different concentrations of hyaluronic acid on semen quality of Simmental bulls with low and high low and high freezability. Six 3 to 5 year-old Simmental bulls were selected for sperm collection and sperm collection was performed by artificial vagina. Only semen samples with progressive motility ≥ 70%, sperm concentration ≥ 1 × 109 and abnormal morphology ≤ 10 % were in rolled in this study. To minimize individual differences ejaculates were pooled and divided into four aliquots according to the experimental design.Parameters of motility and progressive motility, viability and morphology, plasma membrane functionality, viable sperm, apoptotic-like s and dead sperm and mitochondrial membrane potential were evaluated. Data were analyzed by method analysis of variance (ANOVA). Adding a high dose of hyaluronic acid (4 mM) to the sperm extender of cows with high freezability significantly reduces sperm velocity (VSL), lateral motility frequency (BCF) and sperm motility (STR) in compared with control group and other treatment groups. Addition of 1 mM hyaluronic acid to sperm extender with high freezability significantly increased sperm linearity (LIN) compared to the control group. Adding different doses of hyaluronic acid to the cryopreservation extender of bulls with high freezability did not have a significant effect on the sperm viability of bulls after thawing. The results of adding different doses of hyaluronic acid to the sperm extender of bulls with high freezability showed that the health of sperm membrane plasma was significantly increased compared to the control group. Addition of 1 mM hyaluronic acid to the frozen extender of bulls with high freezability showed that sperm viability was significantly higher compared to the 2 mM group. Addition of 1 mM hyaluronic acid to the freezing extender of bulls with low freezability resulted in a significant increase in the percentage of viable cells compared to the 4 mM hyaluronic acid treatment group. In addition, the addition of 2 mM hyaluronic acid to the extender of bulls with high freezability resulted in a significant increase in the percentage of cells with primary apoptosis compared to the control group. While adding 1 mM dose of hyaluronic acid to the sperm extender of bulls low freezability significantly reduced the percentage of delayed apoptotic cells compared to the 4 mM hyaluronic acid treatment group. Comparison of the percentage of delayed apoptotic cells in the two groups of bulls showed that the percentage of these cells in treatment 4 were significantly different from each other.While adding 1 mM and 2 mM doses of hyaluronic acid to the extender of bulls with low freezability resulted in a significant increase in mitochondrial membrane potential compared to sperm of control and 4 mM cows. The results showed that the function of sperm membrane potential was significantly different between the two groups of bulls and the effect of adding hyaluronic acid to the extender led to different responses in the two groups of bulls.
Investigation of the effect of different concentrations of hyaluronic acid in extender on semen quality of Simmental bulls with low and high freezability