عنوان

بررسی نقش عوامل اپی ژنتیک در ناباروری مردان

‭۳۹۶۵پ‬

per

بررسی نقش عوامل اپی ژنتیک در ناباروری مردان

/نسترن خزامی پور

: دانشکده علوم طبیعی

، ‮‭۱۳۸۷‬

چاپی

فاقد اطلاعات کامل

کارشناسی ارشد

رشته ژنتیک مولکولی) علوم جانوری

‮‭۱۳۸۷/۱۱/۲۱‬

دانشگاه تبریز

ناباروری بیماری با دلایل بسیار متنوع شناخته و ناشناخته می باشد .تقریبا در ‮‭۵۰‬ موارد فاکتورهای مردانه به تنهایی و یا همراه با فاکتورهای زنانه دخالت دارند .یکی از ناهنجاریهایی که اخیرا نقش آن در ناباروری مورد بررسی قرار گرفته است، تغییرات نابجا در الگوی اپیژنتیک خصوصا متیلاسیون می باشد که می تواند باعث تغییر در بیان و حتی خاموشی ژن شود .در این تحقیق الگوی متیلاسیون ناحیه پروموتر دو ژن ‮‭GSTM۱‬ و ‮‭MTHFR‬ که هر کدام به طریقی در مسیر باروری دخیلند بررسی شد ‮‭MTHFR‬ .با تأثیر در سنتز نوکلئوتیدها و متیلاسیون ‮‭DNA‬ ، ‮‭RNA‬و پروتئین ها در اسپرماتوژنز نقش دارد .ژن ‮‭GSTM۱‬ یک آنتی اکسیدان قوی را کد می کند که مهمترین نقش آن در مسیر اسپرماتوژنز حفاظت اسپرمهای در حال رشد در برابر عوامل اکسید کننده داخلی و خارجی است .به علاوه ‮‭GSTM۱‬ به عنوان پروتئین انتقالی درون سلولی در انتقال هورمونها و استروئیدهای جنسی ضروری برای اسپرماتوژنز شرکت می کند .به دلیل عملکرد مهم این دو ژن در اسپرماتوژنز و محافظت از اسپرمها، تصور می شود تغییر در الگوی متیلاسیون ناحیه تنظیمی این دو ژن در ناباروری نقش داشته باشد .برای بررسی الگوی متیلاسیون روشهای متعددی وجود دارد .یکی از سریعترین، دقیقترین و ساده ترین روشها که در این تحقیق نیز استفاده شده است تکنیک ‮‭PCR‬ ویژه متیلاسیون می باشد .این تکنیک بر پایه تغییراتی است که سدیم بی سولفاید روی توالی ‮‭DNA‬ ایجاد می کند و سیتوزین های غیر متیله را با تبدیل به یوراسیل از سیتوزین های متیله متفاوت می کند .سپس با استفاده از پرایمرهای اختصاصی برای حالت متیله و غیر متیله در دو واکنش ‮‭PCR‬ جداگانه می توان الگوی متیلاسیون ژن را مشخص کرد .این تحقیق روی نمونه خون محیطی ‮‭۵۰‬ فرد نابارور آزوسپرم غیر انسدادی و ‮‭۵۰‬ فرد بارور به عنوان کنترل، همچنین نمونه بافت بیضه از ‮‭۳۲‬ فرد نابارور آزوسپرم غیر انسدادی و ‮‭۵‬ فرد نابارور انسدادی به عنوان کنترل انجام گرفت .برای ژن ‮‭MTHFR ۳۰‬ بیماران و در گروه کنترل ‮‭۱۸‬ نمونه های خون، الل متیله را نیز علاوه بر غیر متیله نشان دادند .برای نمونه های بافت نابارور انسدادی در ‮‭۵۳‬ ها و برای نمونه های کنترل انسدادی در هیچ نمونه ای الل متیله مشاهده نشد .در مورد ژن ‮‭GSTM۱‬ در همه نمونه های خون و بافت بیمار و کنترل هر دو الل متیله و غیر متیله مشاهده شد بجز در مورد ‮‭۲‬ نمونه ( ‮‭(۲۵/۶‬ بافت نابارور غیر انسدادی که تنها الل متیله وجود داشت .نتایج حاصل از این تحقیق وجود رابطه چشمگیری بین متیلاسیون پروموتور ژن ‮‭MTHFR‬ در بافت بیضه و ناباروری را تأیید می کند .در مورد ژن ‮‭GSTM۱‬ تفاوت کمی بین گروه بیمار و کنترل مشاهده می شود که ا ز لحاظ آماری معنی دار نمی باشد و رابطه بین متیلاسیون پروموتور ژن ‮‭GSTM۱‬ و ناباروری را تأیید نمی کند

‮‭Infertility is a disease with different known and unknown factors. Approximately in ۵۰ of cases, male factors alone or in common with female factors are involved. The recent studies on infertility consider to abnormal epigenetic pattern specifically methylation which can alter gene expression .In this study the methylation pattern in promoter region of two genes, Methylene tetrahydrofolate reductase (MTHFR) and Glutathione- S-transferase M۱(GSTM۱), are assessed. Both of them are contribute in fertility pathway. MTHFR plays important roles in spermatogenesis by DNA, RNA and protein methylation as well as by contributing in nucleotide synthesis. GSTM۱ encodes a strong antioxidant. The most important role of which in spermatogenesis process is to protect maturing sperms of endogenous and exogenous oxidative factors. In addition, GSTM۱ can act as a binding protein to transfer hormones and sex steroids which are essential in spermatogenesis. Because of the important functions of these two genes in spermatogenesis it is suggest that abnormal alteration in methylation of regulatory regions of them may associate with infertility. There are different techniques to detect the methylation pattern. Metylation specific PCR is a fast, cheap and accurate technique which used in this study. This technique relies on alteration that sodium bisulfite induces in DNA sequences and cause difference between methylaetd and unmethylated cytosine by deamination of unmethylated cytosine to uracil. Then methylation pattern can be detected by using the specific methylated and unmethylated primers set in two separate PCR reactions. This study included ۵۰ peripheral blood specimens of non obstructive azoospermia idiopath men and ۵۰ specimens of fertile men as control. It also included ۳۲ tissue specimen of non obstructive azoospermia idiopath men and ۵ obstructive azoospermia specimen as control. The results for MTHFR gene in blood samples showed that ۳۰ of patient and ۱۸ of control groups have methylated allele in addition to unmethylated. In tissue samples ۵۳ of patients but none of control group shows methylaeted allele. In the case of GSTM۱ all of blood and tissue specimens show both methylated and unmethylated allele except for two sample of nonobstructive tissue group which had only methylation pattern. Our Results indicate that epigenetic aberrations of methylation status in CpG islands in MTHFR gene are correlated to male infertility but we couldn't detect any significant correlation in methylation status in CpG islands in GSTM۱ gene and infertility‬

MTHFR

GSTM1

infertility

methylation

non obstructive azoospermia

خزامی پور، نسترن

حسینپورفیضی، محمد علی، استاد راهنما

نوروزی نیا، مهرداد، استاد راهنما

بابایی، اسماعیل، استاد مشاور

نمایه‌سازی قبلی