جداسازی ژن ژرانیول سنتاز از گیاه مرزنجوش اروپایی (Origanum majorana) و ارزیابی رونوشت برداری آن در طی رشد
Isolation of Geraniol Synthase Gene in Origanum majorana and measurement of its transcription at during growth
/سولماز چرائی
: کشاورزی
، ۱۳۹۷
، میرزائی
۷۴ص
چاپی - الکترونیکی
کارشناسی ارشد
باغبانی
۱۳۹۷/۱۱/۱۷
تبریز
گیاهان منبع بسیاری از مواد آلی هستند که بهعنوان ترکیب دارویی مصرف میشوند .فراوردههای حاصل از متابولیسم ثانوی گیاهی جز گرانبهاترین ترکیبات شیمیایی گیاهی میباشند .دراینبین، ژرانیول یک مونوترپن تجاری است که در اسانسهای مختلف گیاهان معطر وجود دارد .این ماده به دلیل دارا بودن عطروطعم در صنایع مختلف ازجمله عطرسازی، لوازمآرایشی و بهداشتی و ساخت داروهای ضد سرطانی دارای کاربرد است .خانواده نعناعیان به دلیل تولید ترپنوئیدهای مختلف ازجمله نرول که ایزومر ژرانیول است، گزینه مناسبی برای وجود و شناسایی این ژن است .ازاینرو پس از بررسی هشت گیاه از گروه نعناعیان، گیاه مرزنجوش به دلیل پاسخگویی مثبت نسبت به پرایمرهای طراحیشده، بهعنوان گیاه موردمطالعه در این تحقیق انتخاب شد .ابتدا بذور این گیاه را در گلدان کشت کرده و پسازاینکه دانهالها بهاندازه کافی رشد کردند استخراج RNA از برگها انجام شد و پس از تهیه cDNA و طراحی پرایمر، با استفاده از واکنش زنجیره پلی مرازPCR)- (RT، ژن مربوطه تکثیر و توالی یابی شد علاوه براین، طی دو زمان مختلف از گیاهان در مرحله قبل از گلدهی و بعد از گلدهی، نمونهگیری از بوته انجامشده و پس از استخراج RNA مقدار بیان ژن ژرانیول سنتاز اندازهگیری شد و در کنار آن، اندازهگیری ژرانیول نیز صورت گرفت .بر اساس نتایج بهدستآمده مشخص گردید که ژرانیول سنتاز بهعنوان عامل بیانکننده ژرانیول در گیاه مرزنجوش اروپایی وجود دارد همچنین مقایسه دو زمان رشدی گیاهنشان داد که مقدار بیان ژن در مرحله قبل از گلدهی بیشتر از مرحله بعد از گلدهی بود .همچنین قسمت کد کننده ژن GES موردمطالعه در گیاه مرزنجوش با توالیهای موجود در بانک ژن Gen Bank به کمک برنامه BLAST مقایسه شدند .مقایسهها اثبات نمود که ژن GES مربوط به مرزنجوش اروپایی مورد آزمایش در وکتور موردمطالعه کلون شده است .توالیهای حاصل از خوانش روبهجلو و رو به عقب مورد ارزیابی قرارگرفته و پس از تعیین منطقه همپوشان در دو توالی، با استفاده از نرمافزار Gen runner دو قسمت مشترک حذف و الحاق توالیها به هم انجام شد و درنهایت توالی کامل ژن به دست آمد .با توجه به اینکه به نظر میرسد این توالی کاندیدای مناسب برای ژرانیول سنتاز باشد، اما به دلیل حذف اینترون و متفاوت بودن طول توالی بهدستآمده ، نیاز به مطالعات بیشتری هست
Plants are the source of many organic substances that are used as a drug combination. Results of the secondary metabolism of plants are the most valuable chemical plant compounds. Geranium is a commercial monotropic that is founded in various essential oils in the aromatic plants. This material due to its high perfume and taste applies in industries, including perfumery, cosmetics, and anti-cancer drugs synthesis. The Peppermint family is the best choice for identification of the gene with is related of the production of various terpenes, including Nerol, which is isomer Geraniol. Therefore, after a study of the Peppermint group, the Marjoram plant was selected as a case study due to its positive respect for designed primers. First, the seeds are cultivated in the pot, after the seeds had grown sufficiently, RNA is extracted from the leaves, and then cDNA prepared and primer design, that gene amplified with Reverse Transcript _ Polymerase Chain Reaction (RT PCR) method and sequencing. Besides, during two different times of plants in the pre-flowering and the post-flowering stages, sampling was performed, after extraction of RNA, Geraniol syntheses gene expression and also Geraniol measured. Based on the results recognized that Geraniol syntheses as a Geraniol expressive factor is in the European Marjoram plants. Also comparing the two plants growth time show that gene expiration in the pre-flowering is higher than the post-flowering stages. Also, the GES gene coding region studied in the Marjoram plants with sequences in the gene bank is comparative with BLAST software. Comparisons proved that the GES gene in the European Marjoram (origanum majorana) tested has been cloned in the study vector. The forward and reverse reading from sequence are investigated and after determining the overlap region in two sequences, two common part was removed using Gen runner software and sequences were joined together so total gene sequence obtained consequently. Given that seem this sequence will be as a candidate for Germanium synthase, but because of Intron remove and being different sequence length is a need to study more
Isolation of Geraniol Synthase Gene in Origanum majorana and measurement of its transcription at during growth