ارزیابی کارایی باکتریهای اندوفیت علفهای هرز رایج منطقه خلعتپوشان در کنترل بیماری شانکر باکتریایی درختان میوه هستهدار
Efficiency assessment of endophytic bacteria isolated from native weeds of Khalatposhan area in biological control of bacterial canker disease of stone-fruit trees
/نیکو جوادی دودران
: کشاورزی
، ۱۳۹۷
، میرزائی
۸۴ص
چاپی - الکترونیکی
کارشناسی ارشد
گیاهپزشکی - بیماریشناسی گیاهی
۱۳۹۷/۱۱/۱۵
تبریز
درختان میوهی هستهدار دارای اهمیت اقتصادی فراوانی هستند .در ایران این نوع درختان میوه در استانهای مختلف بهخصوص استانهای سردسیر شمالغرب کشت میشوند .یکی از بیماریهای مهمی که این نوع درختان را تهدید میکند بیماری شانکر باکتریایی میباشد .باکتریهای موجود در گروه Pseudomonas syringae pv. syringae مجموعهی ناهمگنی را تشکیل داده و دارای طیف وسیعی از باکتریهای بیماریزا با دامنهی میزبانی متنوع میباشد .شانکر باکتریایی که توسط پاتووارهای Pseudomonas syringae ایجاد میشود از معضلات اصلی تولید هستهداران در سراسر جهان به شمار میرود .خسارت دقیق این بیماری را نمیتوان برآورد کرد اما معمولا در باغهای جوان موجب نابودی درختان به میزان ۱۰ الی ۷۵ درصد میشود .یکی از استراتژیهای مدیریت این بیماری کنترل بیولوژیکی آن با استفاده از میکروارگانیسمهای آنتاگونیست است .در این پژوهش، تاثیر باکتریهای اندوفیت جدا شده از بعضی از علفهای هرز رایج در ایستگاه تحقیقات کشاورزی و دامپروری خلعتپوشان وابسته به دانشگاه تبریز در بازدارندگی از فعالیت باکتری Pseudomonas syringae pv. syringae مورد ارزیابی قرار گرفت .به دلیل اینکه تاکنون در هیچ تحقیقی جداسازی باکتریهای اندوفیت از علفهای هرز مورد بررسی قرار نگرفته بود در این مطالعه این باکتریها از علفهای هرز جداسازی گردید .برای این منظور نمونهبرداری از علفهای هرز منطقهی خلعتپوشان انجام گرفت .ابتدا این نمونههای گیاهی ضدعفونی شده و سپس مورد کشت قرار گرفتند .بعد از گذشت سه هفته باکتریهای رشد کرده تک کلون و خالص سازی شدند و از این جدایههای باکتریایی خالص شده، سوسپانسیون تهیه و ذخیرهسازی شد .برای بررسی خاصیت آنتاگونیستی نمونههای رشد کرده، آزمون کلروفرم صورت گرفت و نمونههای باکتریایی که خاصیت آنتاگونیستی علیه باکتری Pss داشتند مشخص شدند .از بین ۱۱۲ جدایهی باکتریایی، ۳۴ جدایه دارای خاصیت بازدارندگی علیه Pss بودند .در نهایت سه جدایه که قدرت بازدارندگی بالاتری داشتند برای بررسی بیشتر انتخاب شدند .شناسایی این سه جدایهی باکتریایی با توالییابی ژن۱۶s rDNA انجام گرفت .نتایج حاصل از توالییابی مشخص کرد که این باکتریهای اندوفیت با احتمال ۹۹ درصد در NCBI متعلق به باکتریهایBacillus simplex ،Bacillus mycodies ، Arthrobacter sp.JLX۱۲هستند .بررسی مکانیسمهای موثر در خاصیت آنتاگونیستی روی این سه گونهی باکتریایی نیز انجام گرفت که در بررسی میزان تولید اکسین، باکتری Bacillus simplex با تولید ۷۶/۱۸۱ میلیگرم بر لیتر بیشترین مقدار تولید این هورمون را نسبت به سایر گونهها داشت .در بررسی میزان تولید سیدروفور، هیچکدام از باکتریها قادر به تولید آن نبودند و در بررسی میزان تولید سیانید هیدروژن فقط باکتری Bacillus mycoides به مقدار کم قادر به تولید بود .در نهایت تستهای بیوشیمیایی شامل تست گرم، آزمون) OF تست هوازی و بیهوازی(، هیدرولیز نشاسته، کاتالاز و سیترات انجام گرفت که نتایج این آزمونها درستی جواب توالییابی را به اثبات رساند
stone fruit trees have a great economic importance. In Iran, these kinds of fruit trees are cultivated in different provinces, especially favourable temperations provinces of the northwest. One of the major diseases that threatens these types of trees is bacterial canker disease. The bacteria in the Pss group form a heterogeneous set that has a wide range of pathogenic bacteria with a wide variety of hosts. The bacterial canker that is induced by Ps-Pathoors is one of the main problems of the production of stone fruit trees carriers around the world. The exact damage of this disease cannot be estimated, but usually in young gardens, the destruction of trees is 10 to 75 percent. One of the strategies for managing this disease is biological control using antagonistic microorganisms. In this study, the effect of endophytic bacteria isolated from some weeds in inhibiting the activity of Pseudomonas syringae pv. syringae was evaluated. Due to the fact that no isolates of endophyte from weeds have been studied in this study, the bacteria were isolated from weeds. For this purpose, sampling of weeds in Khalat-Poushan was carried out. First, the plant samples were disinfected and then cultured. After three weeks, single bacteria were cultured and purified from bacterial isolates, suspensions were and stored. The antagonistic properties of the cultured samples were analyzed by chloroform test and bacterial specimens with antagonistic properties against the Pss bacteria were determined. Of the 112 isolates, 34 isolates possessed inhibitory properties against Pss. Finally, three isolates with more inhibitory power were selected for further investigation. Identification of these three bacterial isolates was performed by sequencing of 16s rDNA gene. The results of sequencing revealed that these endophyte bacteria with 99 probability in NCBI belonged to Bacillus simplex bacteria, Bacillus mycodies, Arthrobacter sp.JLX12. A review of the effective mechanisms of antagonistic property was also carried out on these three bacterial species, In the study of the production of auxin Bacillus simplex bacteria with the highest (181.76) mg /l. In the study of the production of siderophore, none of the bacteria was able to produce it. In the study of the production of hydrogen cyanide only bacteria Bacillus mycoides were able to produce a low amount. Finally, biochemical tests including gram test, OF (aerobic and anaerobic test), starch hydrolysis, catalase and citrate were performed. The results of these tests proved the correctness of the sequencing response
Efficiency assessment of endophytic bacteria isolated from native weeds of Khalatposhan area in biological control of bacterial canker disease of stone-fruit trees