مقایسهی بیان mRNA ژن Nrf۲ در شیر گاوهای دچار ورم پستان با شیر گاوهای سالم
/فرزانه خرسند
: دامپزشکی
، ۱۳۹۵
، راشدی
چاپی
کارشناسی ارشد
دکتری حرفه ای دامپزشکیDVM))
۱۳۹۵/۰۴/۲۱
تبریز
ورم پستان یا التهاب غدهی پستان یکی از جمله مهمترین و موثرترین بیماریهای گاو شیری از نظر اقتصادی میباشد .علاوه بر ضررهای اقتصادی ناشی از کاهش کمیت و کیفیت تولید شیر، تاثیر منفی در سلامت حیوان و انتقال عوامل عفونی از طریق غذا به انسان، دلایل اصلی برای انجام مطالعات فشرده در این زمینه در طی دهه گذشته میباشند .باکتری کلیفرم گرممنفی مثل اشریشیاکلی اغلب باعث پاسخ التهابی حاد و سنگین و علائم بالینی شدیدی در غدهی پستان گاو میشود .بر عکس، عفونت با سایر اجرام مثل استافیلوکوکوساورئوس و استرپتوکوکوساوبریس گرممثبت علائم بالینی متوسط یا نه چندان شدیدی را بروز میدهند که اغلب تحت بالینی هستند .ورم پستان باعث افزایش تشکیل رادیکالهای آزاد در شیر شده و باعث استرس اکسیداتیو بویژه در طی اوایل دورهی شیرواری در گاوهای شیری میشود .گاوهای مبتلا به ورم پستان کاهش چشمگیری در فعالیت سوپر اکسید دیسموتاز و کاتالاز، کاهش در غلظت گلوتاتیون و افزایش در پراکسیدهای چربی اریتروسیتی نشان میدهند .یکی از ژنهایی که در سیستم دفاع آنتیاکسیدانی پستان در زمان بروز عفونت در پستان نقش فعالی دارد ژن Nrf۲ میباشد .مسیر پاسخ آنتیاکسیدان Nrf۲ یکی از مکانیسمهای آنتیاکسیدان اصلی سلول در برابر اثرات مخرب استرس اکسیداتیو میباشد .هدف مطالعه حاضر بررسی میزان بیان مطلق mRNA ژن Nrf۲ در شیر گاوهای مبتلا به ورم پستان بالینی در مقایسه با گاوهای سالم بود .برای این منظور نمونههای شیر از بیست گاو (۱۵ بیمار و ۵ سالم (اخذ و کشت باکتریایی انجام شد .پس از مطالعات متداول میکروسکوپ نوری به دنبال ثبوت نمونههای شیر و رنگآمیزی گرم و سایر تستهای تشخیصی لازم، استخراج RNA از آنها، و سپس ساخت cDNA صورت گرفت .در نهایت ارزیابی میزان بیان دقیق mRNA ژن Nrf۲ در شیر گاوهای سالم و بیمار توسط Absolute Real time PCR انجام شد .نتایج حاصل از این بررسی نشان داد که ورم پستان ناشی از باکتری استافیلوکوکوساورئوس و اشرشیاکلای منجر به افزایش بیان ژن Nrf۲ در شیر گاوهای دچار ورم پستان نسبت به گاوهای سالم میگردد .این اثر در ورم پستان ناشی از اشرشیاکلای نسبت به ورم پستان ناشی از استافیلوکوکوس بیشتر است .همچنین، بیان mRNA ژن مذکور در شیر گاوهای دچار ورم پستان ناشی از اشرشیاکلای بیش از بیان آن در شیر گاوهای دچار ورم پستان ناشی از استافیلوکوکوساورئوس میباشد
Mastitis or mammary gland inflammation is economically one of the most important and effective diseases of dairy cattle. It is adverse effect on animal health and infectious agent transmission to humen through food consumption, in addition to economical loss, has caused the researches to have vast studies in this issue during the last decades. Gram negative coliform bacteria such as Escherichia coli often cause acute inflammatory response and severe clinical signs in cattle mammary gland. In contrast, infections caused by other agents such as Staphylococcus aureus and Staphylococcus uberis represent mild or at least not too intense clinical signs which are mostly subclinical. Mastitis causes an increase in free radical formation in milk and oxidative stress, especially through early lactatgin dairy cattle. Cows with mastitis represent an impressive decrease in superoxide-desmutase activity, gluthation concentration, and an increase in erythrocytic lipid peroxides. Nrf2 is one of the genes playing an active role in mammary gland antioxidant response system. Nrf2 antioxidant response pathway is one of the cell main antioxidant mechanisms against destructive effects of oxidative stress. This study has aimed the evaluation of absolute quantification of Nrf2 mRNA expression in milk samples from cows with clinical mastitis in comparison to healthy cows. For this purpose, milk sampling of 20 dairy cattle (including 15 cows with mastitis and 5 healthy ones) and their bacterial culture were performed. After common light microscopy evaluation, milk samples fixation and gram staining and bacterial cultures, RNAs from milk samples were extracted andcDNAs were synthetized. At last, Nrf2 mRNA expression quantification was evaluated by Absolute Real time PCR. The results indicated that mastitis caused by Staphylococcus aureus and Escherichia coli leads to up-regulation of Nrf2 gene expression in milk in comparison to healthy cows, although there was not statisticaly significance. The Escherichia coli-caused mastitis is more up-regulated compared to Staphylococcus aureus-caused mastitis. In addition, Nrf2 mRNA expression in milk produced by cows with Escherichia coli-caused mastitis was more than the expression of the same gene in milk produced by cows with Staphylococcus aureus-caused mastitis