عنوان

شناسایی قارچ¬های اندوفیت یونجه با پتانسیل مهار زیستی در مزارع منتخب یونجه در استان آذربایجان شرقی

پ۲۸۹۶۲

per

شناسایی قارچ¬های اندوفیت یونجه با پتانسیل مهار زیستی در مزارع منتخب یونجه در استان آذربایجان شرقی

مهساعابد

گیاه‌پزشکی

۱۴۰۰

۱۱۰ص.

سی دی

کارشناسی ارشد

بیماری‌شناسی گیاهی

۱۴۰۰/۰۶/۰۸

چکیده یونجه با نام علمی Medicago sativa یک گیاه چند ساله و از خانواده بقولات می¬باشد و يکى از مهم‌ترين گياهان علوفه‌اى کشور محسوب می¬شود. این گیاه همانند سایر گیاهان با انواع میکروارگانسیم¬های بیماری¬زا و آفات مختلف مواجه است که خسارت جبران ناپذیری بر کشت، تولید و برداشت آن برجای می¬گذارد. متاسفانه به علت دسترسی آسان کشاورزان به سموم شیمیایی، مبارزه شیمیایی نسبت به سایر روش¬های مدیریتی افزایش یافته است. با توجه به مشکلات موجود برای مدیریت بیمارگرها و آفات گیاهی استفاده از روش‌های جایگزین از قبیل مهار زیستی با عوامل آنتاگونیست و یا تلفیق آن¬ها با روش‌های رایج برای مدیریت پایدار بیماری‌ها و آفات گیاهی قابل تامل می¬باشد. قارچ های اندوفیت يکي از مفیدترین راهکارهای کنترل زیستی شناخته شده و همه جازی هستند، در تمامی اندام های گیاه اعم از ریشه، ساقه، برگ، گل، غده، بذر ومیوه بدون ایجاد علایم و بیماری یافت می¬شوند و با تولید ترکيبات ضد قارچی، متابولیت¬ها، آنزیم ها، موجب القای یک مقاومت سیستمیک در میزبان می¬شود. این قارچ¬ها به عنوان بیمار¬گر حشرات علیه آفات نیز استفاده می¬شوند. در تحقیق حاضر به جداسازی و شناسایی اندوفیت¬های گیاه یونجه و پتانسیل کنترل زیستی آن¬ها در مقابل بیمارگرهای گیاهی و حشرات آفت پرداخته شده است. برای این منظور، قارچ‌های اندوفیت از بافت¬های ریشه و طوقه گیاهان یونجه جداسازی و خالص‌سازی شدند و هویت گونه‌های قارچی براساس ویژگی¬های ریخت¬شناختی و داده-های توالی ناحیه ITS و ژن TEF مورد بررسی و شناسایی قرارگرفتند. سيزده جدایه از گونه¬های Trichoderma harzianum، Clonostachys rosea، Acrostalagmus luteoalbus، Cladosporium limoniforme، Trichothecium roseum، Neocosmospora vasinfecta، Stachybotrys chartarum و Metarhizium robertsii جهت انجام آزمایشات زیست سنجی بر اساس فراوانی و پتانسیل کنترل زیستی آن¬ها که در منابع وجود دارد انتخاب شدند. پتانسیل کنترل زیستی جدایه‌های انتخاب شده ابتدا به روش غوطه¬ورسازی و تهیه سوسپانسیون با غلظت-های اسپوری 106×107،1× 1و 108×1اسپور بر میلی لیترعلیه لاروهای حشره مدل پروانه موم خوار (Galleria mellonella) وپروانه آرد (Ephestia kuehniella) با سه تکرار مورد ارزیابی و بررسی قرارگرفتند، سپس اثرات آنتاگونیستی آن¬ها علیه گونه قارچی Fusarium solani عامل بیماری پوسیدگی فوزاریومی ریشه یونجه با روش کشت متقابل در سه تکرار ارزیابی شدند و همچنین فعالیت آن¬ها در تولید آنزیم پروتئاز و کیتیناز طی دو آزمون مجزا بررسی شد. نتایج و آنالیز آماری در نرم افزار spss و مقایسه میانگین با استفاده از آزمون دانکن در سطح 5% انجام شد. نتایج بدست آمده نشان داد که جدایه¬های A2 C. limoniforme، S. chartarum، T. roseum، علیه پروانه آرد (Ephestia kuehniella) و T. harzianum، C. limoniforme A1، M. robrtsii، علیه پروانه موم خوار (Galleria mellonella) بیشترین درصد کشندگی را داشتند و جدایه¬های T. harzianum، C. limoniforme A1، و C. rosea¬ C3 با بیشترین قدرت بازدارندگی از رشد میسلیومی قارچ بیمارگر F. solani در شرایط آزمایشگاهی جلوگیری کردند. نتایج به دست آمده از آزمون¬های تولید آنزیم کیتیناز و پروتئاز نشان دادند C. rosea C1، C. rosea C2،C. limoniforme A2 و T. roseum در تولید آنزیم پروتئاز و جدایه های A. luteolbus و S. chartarum، در تولید آنزیم کیتیناز فعالیت بیشتری را داشتند. بعضی از گونه های قارچی شناسایی شده در این تحقیق برای نخستین بار از روی گیاه یونجه گزارش می¬شوند وگیاه یونجه به عنوان میزبان جدید برای این گونه ها می-تواند معرفی شود.

Alfalfa with the scientific name of Medicago sativa is a perennial plant from the legume family and is one of the most important fodder plants in the country. This plant, like other plants, is exposed to various pathogenic microorganisms and various pests that leave irrecoverable damage to its cultivation, production and harvest. Unfortunately, due to the easy access of farmers to chemical pesticides, chemical control has increased compared to other management methods. Due to the existing problems for the management of pathogens and pests, the use of alternative methods such as bioavailability with antagonists or combining them with common methods for sustainable management of plant diseases and pests can be considered. Endophytic fungi are known to be beneficial and ubiquitous and are found in all plant organs including roots, stems, leaves, flowers, tubers, seeds and fruits without causing symptoms and disease. By producing antifungal agents, metabolites and Enzymes induces a systemic resistance in the hosts. These fungi are also used as entomopathogen against pests. The present study investigates the isolation and identification of alfalfa plants endophytes and their potential for biological control against plant pathogens and pests. For this purpose, endophytic fungi were isolated and purified from the root and crown tissues of alfalfa plants and the identity of fungal species was examined and identified based on morphological characteristics and sequence data of ITS region and TEF gene. There are 13 isolates of Trichoderma harzianum, Clonostachys rosea, Acrostalagmus luteoalbus, Cladosporium limoniforme, Trichothecium roseum, Neocosmospora vasinfecta, Stachybotrys chartarum and Metarhizium robertsii were potential for biocontrol of selected isolates by immersion and suspension with spore concentrations of 1×106 , 1×107 and 1×108 spor / ml against larvae of wax moth (Galleria mellonella) and butterfly (Ephestia kuehniella) Three replications were evaluated and then their antagonistic effects against Fusarium solani, the causative agent of Fusarium wilt rot, were evaluated by cross-culture in three replications and also their activity in the production of protease and chitinase enzymes in two separate tests. The results were analyzed statistically in SPSS software and the means were compared using Duncan's test at 5% level. The results showed that isolates A2 of C. limoniforme, S. chartarum, T. roseum, against butterflies Flour (Ephestia kuehniella) and T. harzianum, C. limoniforme A1, M. robrtsii, against wax moth (Galleria mellonella) had the highest lethality. Isolates of T. harzianum, C. limoniforme A1, and C. rosea C3 with the highest inhibition of mycelial growth of F. solani were determined in vitro. The results of chitinase and protease production tests showed that C. rosea C1, C. rosea C2, C. limoniforme A2 and T. roseum in protease production and A. luteolbus isolates and S. chartarum were more active in the production of chitinase. Most of the fungal species identified in this study are reported for the first time from alfalfa, and alfalfa can be introduced as a new host for these species.

Identification of endophytic fungi of alfalfa with biocontrol potential in selected alfalfa fields in East Azarbaijan province

‏عابد،

‏ مهسا

تهیه کننده

ارزنلو‏،

نرمانی،

‏مهدی

ابوالفضل‏

استاد راهنما

استاد مشاور

‏تبریز