بررسی ویروتایپ های مختلف و مقاومت های بتالاکتامازی در Escherichia coli ST131 جدا شده از نمونه های خون
[پایان نامه]
محمد طاها ابراهیمی
دانشگاه علوم پزشکی تهران، دانشکده پزشکی
۱۳۹۹
۱۱۴ص.
جدول،نمودار
سی دی
کارشناسی ارشد
میکروب شناسی پزشکی
۱۷/۳۵
زمینه وهدف :سالیانه از کشورهای مختلف گزارشات متعددی از شیوع عفونت های ناشی از اشرشیاکلای سکانس تایپ 131 مقاوم به انواع داروهای ضد میکروبی صورت می گیرد و از سال 2008 تا کنون، این کلون به عنوان موفق ترین کلون اشرشیا کلای شناخته شده است. از خصوصیات مهم این کلون انتشار جهانی، مقاومت گسترده به بسیاری از آنتی بیوتیک ها، قابلیت بالا در ایجاد جهش و پلی مورفیسم های مختلف، قدرت بیماریزایی بالا و توانایی انتقال فاکتورهای ویرولاس به سایر باکتری ها می باشد. این صفات می تواند سبب بروز مقاومت های بیشتر و شیوع وسیع تر این کلون در آینده گردد. در ایران مطالعات محدودی در مورد شیوع و خصوصیات این کلون صورت گرفته و تا کنون هیچ مطالعه ای فقط بر روی ایزوله های جدا شده این سکانس تایپ از نمونه های خونی انجام نشده است . به همین دلیل بررسی شیوع و خصوصیات این کلون در کشور برای گروه های کنترل عفونت و درمان دارای اهمیت می باشد.روش بررسی :جدایه های اشرشیاکلای بدست آمده از نمونه های خونی جمع آوری شده از آزمایشگاه بیمارستان های وابسته به دانشگاه مورد شناسایی قرار گرفته و الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی آن ها با روش دیسک دیفیوژن آگار تعیین گردید. با استفاده از روش های فنوتیپی گروه های مختلف تولید کننده آنزیم های بتالاکتاماز وسیع اطیف، متالوبتالاکتامازها، Amp c و کارباپنماز شناسایی شدند. سپس گروه های فیلوژنی مختلف (A,B1,B2,D) در میان این گروه ها با روش مولکولی PCR تعیین گردید. و در میان گروه فیلوژنی B2 ،اشرشیاکلای سکانس تایپ 131 نیز با انجام آزمایش PCR تعیین گردید و در نهایت حضور ژن های ویرولانس ( (FimH,KPMSTII,OMPو مقاومت آنتی بیوتیکی ( (OXA48,CTXM15,CMY2با روش PCR ردیابی گردید و نهایتا این خصوصیات در گروه های (ST131 و non ST131 ) مورد مقایسه قرار گرفت و گروه بندی ویروتایپی اشرشیاکلای سکانس تایپ ۱۳۱انجام گرفت.نتایج: در اشرشیاکلای های جداشده از نمونه های خون بیشترین مقاومت نسبت به آنتی بیوتیک های نالیدیسکیک اسید( 82 ٪ )،سیپروفلوکساسین) 79 ٪ ) و سفتریاکسون) 77 ٪ ( مشاهده شد. و همچنین آنتی بیوتیک های خانواده کارباپنم مانند مروپنم ،ارتاپنم و ایمی پنم به ترتیب با 6 ،9 و 11 درصد دارای کمترین میزان مقاومت بودند. در انجام تست های غربالگری جهت بررسی مقاومت های آنتی بیوتیکی و ارتباط آن با احتمال حضور آنزیم های(ESBL ,Ampc و کارباپنمازها) که در ایجاد مقاومت آنتی بیوتیکی نقش دارند ، آنتی بیوتیک های سفالوسپورین ، سفوتاکسیم و سفتازیدیم و خانواده کارباپنم ها از قبیل ارتاپنم ، مروپنم و امی پنم مورد استفاده قرار گرفتند.که مقاومت نسبت به آنتی بیوتیک ها نشاندهنده تایید تست های غرباگری می باشد به طوری که با انجام این تست ها، 41 ٪ نمونه ها دارای آنزیم Amp-C و 72٪بتالاکتامازهای وسیع الطیف ESBL و 28٪ آنها کارباپنماز مثبت تشخیص داده شده اند، که بعد از این مرحله با انجام تست های تاییدی فنوتیپی 24٪ از نمونه هایی که با تست غربالگری مثبت شده اند، 66٪ از ESBL ها و 21٪ از کارباپنماز ها مورد تایید قرار گرفتند.جهت بررسی بیشتر نمونه ها و آگاهی از گروه بندی فیلوژنی و ایزوله ها گروه بندی شده اند. که 43 درصد ایزوله ها متعلق به گروه فیلوژنی B2 بودند و کمترین فراوانی نیز مربوط به گروه فیلوژنی B1 می باشد.از کل اشرشیاکلای های مورد بررسی ۱۶ درصد اشرشیاکلای سکانس تایپ ۱۳۱ بودند این در حالیست که در میان گروه فیلوژنی B2 تعداد 68 درصد ایزوله ها به سکانس تایپ 131 تعلق داشتند که 65 ٪ آن ها سروتیپO25 و 35 ٪آن ها سروتیپ O16 بودند . به کمک بررسی حضور ژن های ویرولانس مختلف باکتری های اشرشیاکلای سکانس تایپ ۱۳۱ ، گروه های ویروتایپی مختلف تعیین گردید. ویروتیپ گروه A با 35 ٪ بیشترین فراوانی را داشت. فاکتورهای ویرولانس مختلف در باکتری های اشرشیاکلای مورد بررسی قرار گرفت که در 95 ٪این ایزوله ها الگوی ژنوتیپی Afa, Iron,sat,fimh, مشاهده گردید. 90 ٪ این باکتری های این کلون ،ESBL مثبت، 85 ٪آن ها دارای آنزیم CTX-M15 و 100 ٪ آن ها دارای مقاومت چندگانه بودند. بررسی حضور ژن های فاکتورهای ویرولانس ،و مقاومت در باکتری های اشرشیاکلای سکانس تایپ ۱۳۱ نشان داد که 55 ٪ آن ها دارای ژن Afa ،70٪ Iron ، 70 ٪sat ، 15 ٪ ibeA 30 ٪ omp ،20 ٪ oxA ، 35 ٪ cmy2 ، ٪65 FimH و 85 ٪ KPMSTII می باشند. نتیجه گیری : با توجه به فراوانی سکانس تایپ 131 در این مطالعه و الگوی مقاومت آنتی بیوتیکی این سکانس تایپ که تقریبا نسبت به تمام گروه های آنتی بیوتیکی، مقاومت وجود دارد و تنها بعضی از آنتی بیوتیک های کارباپنم موثر هستند ،تسریع در امر اصلاح الگوی مصرفی آنتی بیوتیک ها باید لحاظ گردد و عامل هشدار دهنده دیگر نیز حضور ژن های ویرولانس متعدد در این سویه می باشد که قابلیت بالایی در انتقال بین سایر باکتری ها دارد و علاوه بر نظارت بیشتر دراین زمینه برای کادر درمانی و تشخیصی ، توصیه می شود در مطالعات آتی به بررسی سایر سکانس تایپ ها نیز پرداخته شود.