بررسی اثر ضد سرطانی سلولهای بنیادی مزانشیمی مشتق از بافت چربی حامل miR4731 بر روی رده های سلول گلیو ماپی U-87 و U-251
[پایان نامه]
امیر اله وردی
دانشگاه علوم پزشکی تهران، دانشکده پزشکی
۱۳۹۸
۱۴۱ص.
جدول،نمودار
سی دی
دکتری تخصصی(PHD)
علوم سلولی کاربردی
۲۰
گلیوبلاستوما مولتیفرم شایعترین تومور مغزی بدخیم اولیه در بزرگسالان بوده و دارای وخیم ترین پیش آگهی می باشد. روش درمان استاندارد این بیماری شامل برداشتن تومور و به دنبال آن پرتودرمانی و شیمی درمانی است. MicroRNA ها ابزارهای درمانی بالقوه در گلیوبلاستوما مولتیفرم هستند، اما مشکل انتقال آنها به سلولهای تومور مانع استفاده گسترده آنها شده است. در این مطالعه اثر سلول های بنیادی مزانشیمی انسانی مشتق از بافت چربی برای انتقال miR-4731 بر سلول های سلولهای گلیومایی U-251 و U-87 بررسی شد. روش کار به اینصورت بود که ابتدا به ارزیابی بیان miR-4731 در گلیوبلاستوما با استفاده از داده های پایگاه GEO پرداخته شد. اهداف مستقیم miR-4731 در مسیر EGFR تیروزین کیناز با استفاده از روش های بیوانفورمایتک شناسایی گردید. سپس وکتور miR-4731-pCDH کلون گردید و به همراه وکتور های pspax و pmd2 به منظور تولید ذرات لنتی ویروس حامل miR-4731 در سلولهای هک-293 ترانسفکت شدند. بررسی اثر miR-4731 بر روی ژن EGFR به روش لوسیفراز دوگانه تائید شد. ترانسداکشن سلولهای گلیومایی U-251 و U-87 انجام شد. میزان بیان ژنهای هدف miR-4731 که عبارت بودند از: ;NRAS ، HRAS ، RAF-1 ، MEK2 (MAP2K1) ، ERK-1 (MAPK3) ) ، ERK-2 (MAPK1) ، AKT-1، AKT-2، SHC-3 با استفاده از روش RT-qPCR بررسی شد. همچنین میزان مهاجرت سلولی، آپپتوز و چرخه سلولی در سلول های گلیومایی ترانسداکت شده بررسی شد. سپس سلول های بنیادی مزانشیمی مشتق از بافت چربی انسانی جداسازی و تایید هویت شدند. در ادامه سلول های مذکور با وکتور لنتی ویروسی حامل miR-4731 ترانس داکت شدند و هم کشتی مستقیم و غیر مستقیم آنها با سلول های گلیومایی انجام شد. یافته های هم کشتی نشان توقف چرخه سلولی در مرحله G1 و القای آپپتوز در سلول های گلیومایی بود. بیان ژن های هدف در مسیر EGFR نیز کاهش یافت. یافته های ما نشان داد که سلول های بنیادی مزانشیمی بیان کننده miR-4731 از عملکرد ضد توموری مطلوبی برخوردار بوده و می تواند در آینده برای درمان گلیوبلاستوما مورد استفاده قرار گیرند.