شناسایی همزمان چهار پاتوژن شایع باکتریایی (استافیلوکوکوس آرئوس، پسودوموناس آئروژینوزا، کلبسیلا پنومونیه و اشرشیا کلای) در نمونه های تنفسی بیماران مشکوک به پنومونی بیمارستانی با استفاده از روش Multiplex High-Resolution Melting Analysis و مقایسه آن با روش کشت
[پایان نامه]
جابر قربانی کهریز سنگی
دانشگاه علوم پزشکی تهران، دانشکده پزشکی
۱۳۹۸
۹۸ص
جدول،نمودار
سی دی
کارشناسی ارشد
میکروب شنماسی پزشکی
۱۹
شناسایی همزمان چهار پاتوژن شایع باکتریایی (استافیلوکوکوس آرئوس، پسودوموناس آئروژینوزا، کلبسیلا پنومونیه و اشرشیا کلای) در نمونه های تنفسی بیماران مشکوک به پنومونی بیمارستانی با استفاده از روش Multiplex High-Resolution Melting Analysis و مقایسه آن با روش کشتمقدمه: پنومونی شایع ترین علت مرگ در بیمارانی است که دچار عفونت بیمارستانی می شوند. این بیماری مسئول 50%-24 مرگ و میر در این بیماران می باشد. از سوی دیگر پنومونی بیمارستانی موجب بستری شدن بیماران به مدت طولانی در بیمارستان شده و متعاقب آن باعث تحمیل هزینه های سنگین به بیماران و سیستم درمانی- بهداشتی جامعه می گردد.روش انجام کار: تعداد 96 نمونه برونکوآلوئولار لاواژ (Broncho-alveolar lavage: BAL) از بیماران بستری در بیمارستان های امام خمینی، پارس و شرکت نفت و مشکوک به پنومونی جمع آوری شد. نمونه ها بر روی محیط های بلاد آگار، شکلات آگار و مک کانکی آگار کشت داده شد. شناسایی جدایه ها توسط تست های بیوشیمیایی و ملکولی (Multiplex High Resolution Melting analysis: HRM) انجام شد. به منظور طراحی پرایمر برای انجام HRM، نواحی Conserved از طریق بلاست کردن کل ژنوم سویه های استاندارد مربوط به گونه های استافیلوکوکوس آرئوس، کلبسیلا پنومونیه، پسودوموناس آئروژینوزا و اشرشیا کلای یافت شد. سپس با استفاده از نرم افزار Primer3 راحی پرایمر انجام شد. نتایج: در روش کشت باکتری ها در 54 مورد (56%) از نمونه های BAL جدا شدند. شایع ترین باکتری های جدا شده به ترتیب شامل اسینتوباکتر بومانی با 22 مورد (22.9%)، کلبسیلا پنومونیه با 17 مورد(17.7%)، پسودوموناس آئروژینوزا با 9 مورد(9.4%)، استافیلوکوکوس آرئوس با 9 مورد(9.4%) و اشرشیاکلای با 4 مورد(4.2%) بودند (7 نمونه دارای دو باکتری بودند). موارد مثبت که توسط Multiplex HRM ثبت شد 61(63.5%) نمونه بود . شایع ترین باکتری های جدا شده به ترتیب اسینتوباکتربومانی با 25 مورد(26%)، کلبسیلا پنومونیه با 25 مورد (26%)، پسودوموناس ائروژینوزا با 11 مورد(11.46%)، استافیلوکوکوس آرئوس با 9 مورد(9.37%) و اشرشیا کلای با 6 مورد (%6.25) مثبت گزارش شد. در بین این نمونه ها 11 نمونه (11.5%) هر کدام دارای دو پاتوژن و 2 نمونه (2.1%) دارای 3 باکتری بود. در این مطالعه حساسیت و اختصاصیت روش HRM به ترتیب 100 % و 70% بود. نتیجه گیری: روش HRM می تواند روش مناسبی جهت شناسایی پاتوژن های شایع در پنومونی بیمارستانی باشد که از اختصاصیت و حساسیت بالایی برخوردار است. همچنین این روش با صرف زمان و هزینه کمتر قابلیت شناسایی بیش از یک پاتوژن را در نمونه های بالینی داراست.