بررسی miRNA های موثر بر بیان ژن (BIRC5) Survivin و بررسی بیان رونوشت های آن در سلول های تک هسته ای خون محیطی (PBMC) بیماران آرتریت روماتوئید (RA)
[پایان نامه]
حمیدرضا ابراهیمیان غازانی
دانشگاه علوم پزشکی تهران، دانشکده پزشکی
۱۳۹۷
۸۹ص.
جدول نمودار
سی دی
کارشناسی ارشد
ایمنی شناسی پزشکی
مقدمه: آرتریت روماتوئید یک بیماری التهابی مزمن می باشد که التهاب و تخریب مفاصل را به دنبال دارد. مولکول های miRNA می توانند از طریق تنظیم بیان ژن های درگیر در پاسخ های التهابی در پاتوژنز بیماری موثر باشند.Survivin یک پروتئین داخل سلولی و یکی از اعضای خانواده پروتئین-های مهارکننده آپوپتوز (IAPs) می باشد که علاوه بر مهار آپوپتوز در روند تقسیم سلولی نیز مشارکت دارد. در این مطالعه برای اولین بار مولکول های miRNA به عنوان مکانیسم تنظیمکننده بیان ژن Survivin در سلول های تک هسته ای خون محیطی (PBMC) بیماران اندازه گرفته شده و ارتباط آن را با بیان ژن Survivin سنجیده شد. علاوه بر این، بررسی رونوشت های پیرایش ژن Survivin در بیماران آرتریت روماتوئید می تواند عملکردهای این رونوشت ها را در بیماران توضیح داده و به عنوان هدف اختصاصی برای بهبود بیماران مورد مطالعه قرار بگیرد.مواد و روشها: تعداد 50 بیمار مبتلا به آرتریت روماتوئید که بیماری آن ها بر طبق معیارهایACR فعال تشخیص داده شده است و تعداد 50 فرد سالم نیز به عنوان گروه کنترل انتخاب گردید. از هر کدام از بیماران 15 سیسی خون گیری شده و در لوله های حاوی ضد انعقاد EDTA ریخته شد. سلول های PBMC را با استفاده از فایکول جدا کرده و آزمایشات بعدی روی سلول های PBMC انجام گردید. با استفاده از تکنیکReal-Time PCR و روش SYBR GREEN، میزان بیان رونوشت های Survivin-WT، Survivin-2B و Survivin-ΔEx3 و Total-Survivin (TS) (شامل بیان همزمان تمام رونوشتها) در دو گروه بیمار و کنترل بررسی گردید. بیان microRNAهای miRNA-542-3p، miRNA-218-5p، miRNA-34a-5p، miRNA-708-5p، miRNA-335-5p، miRNA203a-3p،miRNA485-5p ،miRNA16-5p و miRNA150-5p با استفاده از کیت miScript SYBR® Green PCR Kit و تکنيک Real-time PCR سنجيده شد. همچنین از بیان U6snRNA به عنوان کنترل و نرمال¬سازی داده ها استفاده گردید.نتایج: بیان رونوشت های متفاوت ژن Survivinشامل: Survivin-WT، Survivin-2B و Survivin-ΔEx3 تفاوت معنیداری را نشان دادند. رونوشت Survivin-WT به صورت معنی داری کاهش بیان را نشان داد (FC= 0.64, P= 0.0002) در حالی که بیان دو رونوشت دیگر شامل Survivin-2B و Survivin-ΔEx3 افزایش معنی¬داری را نشان دادند که میزان تغییر بیان نسبت به گروه کنترل و معنی¬دار بودن به ترتیب (FC= 1.57, P= 0.005) و (FC= 1.93, P= 0.009) می باشد. miR-335-5p (FC= 4.89, P= 1E-13)، miR-485-5p (FC= 3.48, P= 2E-8)، miR-16-5p (FC= 2.86, P= 9E-16)، miR-150-5p (FC= 1.98, P= 7E-10)، miR-34a-5p (FC= 1.79, P= 6E-8) و miR-203a-3p (FC= 1.35, P= 0.035) بصورت معنی¬داری افزایش بیان را نشان دادند درحالی که ارتباطی بین بیانmiRNA ها و ژن Survivin مشاهده نگردید.بحث و نتیجهگیری: در این مطالعه افزایش بیان معنی¬دار رونوشت¬های Survivin 2B و survivn-ΔEx3 و کاهش بیان معنی¬دار رونوشت Survivin-WT در سلول¬های PBMC بیماران آرتریت روماتوئید گزارش گردید در حالی که بیان کلی ژن Survivin تفاوت معنی¬داری را نشان نداد. این تفاوت بیان می تواند منجر به افزایش تکثیر سلولی و مقاومت سلول های ایمنی در برابر آپوپتوز شده و باعث شروع بیماری های خودایمنی از جمله آرتریت روماتوئید گردد. همچنین افزایش معنی¬داری در بیان miR-335-5p، miR-485-5p، miR-16-5p، miR-34a-5p، miR-150-5 و miR-203a-3p در سلول های PBMC بیماران آرتریت روماتوئید مشاهده گردید که میتوانند در ارتباط با تنظیم ژنهای دیگر در روند بیماری موثر باشند. بررسی بیان ژن Survivin در بیماران خودایمنی از جمله بیماری آرتریت روماتوئید همواره در مراحل ابتدایی بوده و نیاز به مطالعات بیشتری با توجه به زمینه مصرف دارو و نوع سلول مورد مطالعه می باشد تا بتوان نتایج بهتری را در درک پاتوژنز بیماری آرتریت روماتوئید گزارش کرد.