کشت سوسپانسیون گیاه دارویی ماریتیغال(Silybum marianum) ، بررسی میزان سیلیمارین تولیدی و تنوع سوماکلونال با استفاده از نشانگرهای ISSR
نام نخستين پديدآور
/آسیه فیروزی
وضعیت نشر و پخش و غیره
نام ناشر، پخش کننده و غيره
تبریز: دانشگاه تبریز
مشخصات ظاهری
نام خاص و کميت اثر
۱۳۰ ص، جدول، نمودار، عکس، لوح فشرده
یادداشتهای مربوط به نشر، بخش و غیره
متن يادداشت
چاپی
یادداشتهای مربوط به کتابنامه ، واژه نامه و نمایه های داخل اثر
متن يادداشت
واژه نامه بصورت زیرنویس
متن يادداشت
کتابنامه
یادداشتهای مربوط به پایان نامه ها
جزئيات پايان نامه و نوع درجه آن
کارشناسی ارشد
نظم درجات
مهندسی کشاورزی- بیوتکنولوژی
زمان اعطا مدرک
۱۳۸۷/۰۶/۲۵
کسي که مدرک را اعطا کرده
تبریز: دانشگاه تبریز
یادداشتهای مربوط به خلاصه یا چکیده
متن يادداشت
فلاونوئیدها گروه مهمی از متابولیتصهای ثانویه هستند که در پاسخ به سیگنالصهای محیطی یا رشدی سنتز آنها افزایش میصیابد و وظایف بسیاری را در گیاهان برعهده دارند .سیلیمارین یک فلاونوئید پلی-فنلی مشتق شده از ماریتیغال است .ماریتیغال (Silybum marianum) گیاه دارویی مهمی است که متابولیتصهای ثانویه آن مجموعا تحت عنوان سیلیمارین، از دیرباز در درمان خوراکی بیماریهای کبدی مانند هپاتیت و سرطان پروستات استفاده می شوند .با توجه به اهمیت دارویی این گونه گیاهی، روشصهای تولید آزمایشگاهی آن با استفاده از کشت یاخته و بافت مورد توجه قرارگرفتهصاند .به منظور تهیه کالوس جهت کشت سوسپانسیون، ابتدا ریزنمونهصها) کوتیلدون و هیپوکتیل (از سه ژنوتیپ ماریتیغال) رقم اصلاح شده مجارستان، اکوتیپصهای پارس آباد و بهشهر (در محیط کشت MS حاوی غلظتصهای هورمونی توفوردی (۱ میلیصگرم درلیتر(، کینتین (۱ میلیصگرم درلیتر (در مراحل اولیه و در واکشتصها در همان محیط با غلظتصهای هورمونی کینتین (۴/۰ میلیصگرم درلیتر (و پیکلورام (۳ میلیصگرم درلیتر (کشت شدند .کالوسصها بعد از چهار مرحله واکشت برای شروع کشت سوسپانسیون مهیا شدند .وزنصهای برابر از کالوسصهای هر ریزنمونه و ژنوتیپ به ظروف حاوی ۵۰ میلیصلیتر محیط کشت MS مایع شامل غلظتصهای هورمونی کینتین (۴/۰ میلیصگرم درلیتر (و پیکلورام (۳ میلیصگرم درلیتر (منتقل و هر دو هفته یکبار واکشت شدند .پس از سه مرحله واکشت، کشتصها در سه تکرار در قالب طرح فاکتوریل با طرح پایه بلوکصهای کامل تصادفی تحت تیمارهای محرک فنیل آلانین (۱/۰ میلی مولار(، متیل جاسمونات (۱۰۰ میکرومولار(، عصاره مخمر (۵۰ میکروگرم در میلیصلیتر (و ترکیبی از آنها قرار گرفتند .پس از گذشت ۷۲ ساعت، ماده مؤثره همه کشتصها با متانول استخراج شد .اجزای سیلیمارین حاصله با استفاده از دستگاه HPLC اندازهصگیری و به پنج جزء تاکسیصفولین، سیلیصدیانین، سیلیصکریستین، سیلیصبین و ایزوسیلیصبین تفکیک شد .نتایج تجزیه واریانس دادهصها نشان داد که اثر محرک، عامل معنیصدار بر همه اجزای سیلیمارین بود .تیمارهای متیل جاسمونات و فنیل آلانین اثر بیشتری نسبت به تیمار عصاره مخمر بر میزان سیلیمارین تولیدی در همه کشتصها داشتند .میزان ماده مؤثره در ریزنمونه هیپوکتیل در هر سه ژنوتیپ بیشتر از ریزنمونه کوتیلدون بود .در مجموع، ژنوتیپ مجارستان از سیلیمارین تولیدی بیشتری نسبت به دو ژنوتیپ دیگر برخوردار بود و ژنوتیپ بهشهر نظر سیلیمارین کمتری را تولید کرد .به منظور بررسی تنوع سوماکلونال در کشتصهای سوسپانسیونی، از هر کدام از کشتصها حداقل در سه واکشت و دو تکرار، استخراج DNA انجام گرفت .کلیه ۱۳ آغازگر ISSR مورد استفاده قادر به تکثیر قطعات DNA بودند .الگوی نواری آغازگرها نشان داد که الگوی نواری نمونهصهای مربوط به ژنوتیپصها و ریزنمونه-های مختلف در واکشتصها و حتی تکرارهای یک واکشت، متفاوت بودند .میانگین تعداد مکانصهای تکثیر شده، ۳/۷ مکان به ازای هر آغازگر و طول قطعات تکثیری۲۰۰ - ۳۰۰۰جفت باز بود.
متن يادداشت
Flavonoids are the important group of secondary metabolites that synthesized in response to developmental and environmental signals and perform many functions in plants. Silymarin is a polyphenolic flavonoid derived from milk thistle. Milk thistle (Silybum marianum) is one of the important medicinal plants and its secondary metabolites known as silymarin that is used for oral treatment of toxic liver damage and for therapy of chronic inflammatory liver diseases and liver cirrhosis. Tissue and cell cultures are important in vitro techniques for industrial production of these metabolites. In order to obtain calli for suspension culture, the explants (cotyledon and hypocotyls) from three genotypes (Budakalaszi, Pars Abad and behshahr cultivars) were cultured in MS medium supplemented with "2, 4-D (1 mg/l) and Kinetin (1 mg/l)". Calli were subcultured four times in MS medium with Kinetin (0.4 mg/l) and Picloram (3 mg/l) and were used for suspension culture. Equal weights of calli from each explants of each genotype transferred to erlenmeyers contained 50 ml MS medium culture (without agar) with growth regulated Picloram (3 mg/l) and Kinetin (0.4 mg/l) and subcultured every 2 weeks. After 3 times of subculture, suspension cultures were treated with elicitors (phenyl alanine, methyl jasmonate, yeast extract, combinations of these elicitors and control) using a factorial experiment based on randomized complete block design with 3 replications. After 72 hours, the flavonoid components of cultured were extracted with methanol and determined by high performance liquid chromatography (HPLC) and separated into 5 components (Taxifolin, Silydianin, Silychristin, Silybin and Isosilybin. Analysis of variance revealed the significant effect of elicitor treatments on all components of silymarin. The effect of phenyl alanine and methyl jasmonate on production of silymarin in all cultures was higher compared with yeast extract. Amount of silymarin was higher in hypocotyls explants than cotyledon explants in the three genotypes. In total, Budakalaszi and Behshahr genotypes produced high and low levels of silymarin, respectively. To assess somaclonal variation, genomic DNA was extracted from suspension cultures in three subcultures and minimum two replications. All the 13 ISSR primers used successfully produced amplified fragments in the studied samples. The result showed different amplification patterns between DNA samples from explants of three genotypes in different subculture, even in different replication of each subculture. Average number of bands per primer was 7.3 bands and the length of amplified fragments ranged from 200 to 3000 bp.
موضوع (اسم عام یاعبارت اسمی عام)
موضوع مستند نشده
Milk thistle
موضوع مستند نشده
silymarin
موضوع مستند نشده
suspension culture
موضوع مستند نشده
elicitor
موضوع مستند نشده
somaclonal variation
نام شخص به منزله سر شناسه - (مسئولیت معنوی درجه اول )