شماره کتابشناسی ملی
شماره
۲۷۸پ
زبان اثر
زبان متن نوشتاري يا گفتاري و مانند آن
per
عنوان و نام پديدآور
عنوان اصلي
ریز همسانه سازی ژن اینترلوکین- ۲ در وکتور بیان کننده پروکاریوتیک و مطالعه بیان آن درE.coli
نام نخستين پديدآور
/فرخ کریمی مندل بسر
وضعیت نشر و پخش و غیره
نام ناشر، پخش کننده و غيره
: کشاورزی
مشخصات ظاهری
نام خاص و کميت اثر
۹۴ص
يادداشت کلی
متن يادداشت
جدول، نمودار، عکس
یادداشتهای مربوط به نشر، بخش و غیره
متن يادداشت
چاپی
یادداشتهای مربوط به کتابنامه ، واژه نامه و نمایه های داخل اثر
متن يادداشت
واژه نامه بصورت زیرنویس
متن يادداشت
کتابنامه ص.: ۸۹-۹۴
یادداشتهای مربوط به پایان نامه ها
جزئيات پايان نامه و نوع درجه آن
کارشناسی ارشد
نظم درجات
مهندسی کشاورزی- بیوتکنولوژی
زمان اعطا مدرک
۱۳۸۳/۰۷/۲۵
کسي که مدرک را اعطا کرده
تبریز
یادداشتهای مربوط به خلاصه یا چکیده
متن يادداشت
اینترلوکین ۲ انسانی یک پروتئین تنظیم کننده سیستم ایمنی است که سطح وسیعی از تحریک پاسخهای ایمنی را باعث شده و دارای نقش مهمی در تحریک تکثیر و تمایز لنفوسیت های B و Tاست۲-. ILکاربردهای دارویی متعددی داشته، و در درمان سرطانها از قبیل سرطان خون و نقص سیستم ایمنی و همچنین در کارهای آزمایشگاهی استفاده می شود .به دلیل برخی محدودیتها در بدست آوردن این پروتئین از منابع طبیعی، به علت تولید لحظه ای و زودگذر hIL۲در اثر تحریک آنتی ژن و هزینه بالا، تولید این پروتئین به صورت نوترکیب درسیستم های ساده میکروبی از جمله E.coli و همچنین سیستم های تکامل یافته از جمله گیاهان، ترجیح داده می شود .با توجه به اینکه اینترلوکین ۲ انسانی نوترکیب در بازار به صورت داروئی وجود دارد، تلاش درجهت تولید بهینه این فرآورده با استفاده از E.Coli مناسب به نظر می رسد .به منظور مطالعه بیان hIL۲ انسانی تحت القاء شیمیایی، پلاسمید بیان کننده))+ pET۲۱a، انتخاب گردید cDNA .ناحیه رمزکننده اینترلوکین- ۲انسانی واقع در کاستpWHIL۲B۷.MA ، با استفاده از تکنیک PCR تکثیر وسپس درون وکتور فوق قرار گرفت .درنتیجه پلاسمید نوترکیبی جدیدی به نام pET۲۱hIL۲ که قابلیت بیان ژن hIL۲ را تحت کنترل پروموتور قوی T۷ در میزبان مناسب دارد، ساخته شد .پس از انجام مراحل همسانه سازی، آنالیز مولکولی پلاسمیدهای بدست آمده با روش PCR و برش آنزیمی (Restriction mapping) انجام گرفت .نتایج نشان داد که این پلاسمیدهای ساخته شده واجد cDNA کدکننده اینترلوکین- ۲انسانی (hIL۲) می باشند .پس از تأیید صحت همسانه‌سازی و تعیین توالی نوکلئوتیدی قطعات همسانه شده، بیان سیتوپلاسمی hIL۲ نوترکیب تحت القاء شیمیایی IPTG در سویه BL۲۱ از باکتری E.coli بررسی شد .بررسی وجود بیان ژن hIL۲ و تعیین میزان کمی پروتئین تولید شده، به ترتیب با استفاده از تکنیکهای SDS PAGE و ELISA انجام گردد. القاء باکتریهای نوترکیب و میزانhIL - ۲تولید شده توسط باکتریهای نوترکیب در غلظتهای مختلفIPTG، زمانهای مختلف انکوباسیون و OD های مختلف مورد بررسی قرار گرفت .بررسی میزان بیان نشان داد که در غلظتهای مختلفIPTG ، در زمانهای مختلف انکوباسیون و OD های مختلف، میزان بیان cDNA کدکننده hIL۲ متفاوت است .با توجه به نتایج حاصله از آزمایشات فوق مشخص گردید که بیشترین میزان تولید hIL۲ در غلظت IPTG = ۱mM وOD=۰.۵ و پس از ۲ ساعت از القاء توسط IPTG در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد می باشد.در نهایت نتیجه گیری گردید که با ساخت پلاسمید نوترکیبpET۲۱hIL۲ ، که توانائی بیانhIL - ۲در سلولهای .coli Eرا داشته و تهیه سلولهای تراریخته بیان کننده اینترلوکین- ۲انسانی۲)-(hIL، زمینه مناسب برای مطالعات بعدی به منظور تولید بهینه پروتئین نوترکیب فراهم می باشد
متن يادداشت
Human interleukin-2 is a regulatory protein of immune system which causes a wide spectrum of immune response stimulation and plays an important role in amplification and differentation of B and T lumphocytes. IL-2 has several pharmaceutical uses (inications) and is being used in caring cancers including blood cancer and deficieney of immune system and also in experimental works. Because of some limitation in obtaining this protein from natural sources and its temporary production stimulated by antigen and high expenses it is preferred to be produced as a recombinant protein in simple microbial systems such as E.coli and evolved systems such as plants. since that recombinant human interleukin-2 exist as a pharmaceutical product in markt is seem appropriates to preduce it using E.Coli.n order to study the expression of hIL-2 under chmical induction, the expression vector pET21a(+) was selected. the coding region of hIL-2 in the pWHIL-2B7MA was amplified using PCR techniques and then inserted in to the expression vector pET21a(+).Consequently a new recombinant plamid called pET21 hIL-2 constructed which has ability to express hIL-2 gene under the control of the strong T7 promoter.Molecular analysis of new construct was done by PCR method and restriction mapping. The results demonstrated that this plasmid contains coding cDNA of hIL-2. After confirming the validity of cloning and sequecing the cloned segments.The cytoplamic expression of the recombinant hIL-2 chemically induced by IPTG in Bl21 strain of E.coli was investigated. Verification of hIL-2 gene expression and quantification of the production protein, was accomplished through SDS-PAGE and ELISA techniques, respectively. Then, the rate of hIL-2 production in recombinant bacteria was studied using different concentration of IPTG, variation incubation times, and different OD'S. Verification of expression rate showed that in different concentration of IPTG, using different induction times and varions OD'S, the rate of expression of hIL-2 coding cDNA was different. The results of above mentioned experiments clarified that the highest amount of hIL-2 production was in IPTG concentration equal to 1mM with OD=0.5 and after two hours IPTG induction in 37'c.inally, it concluded that construction of the recombinant plasmid pET21 hIL-2 which expresses hIL-2 in E.coli and preparation transformed cells expressing hIL-2, provide appropriate background for the optimization of recombinant proteins production in the future studies.
نام شخص به منزله سر شناسه - (مسئولیت معنوی درجه اول )
مستند نام اشخاص تاييد نشده
کریمی مندل بسر، فرخ
نام شخص - ( مسئولیت معنوی درجه دوم )
مستند نام اشخاص تاييد نشده
باغبان کهنه روز، بهرام، استاد راهنما
مستند نام اشخاص تاييد نشده
سعید حجازی،محمد، استاد راهنما
مستند نام اشخاص تاييد نشده
ولیزاده، مصطفی، استاد مشاور
مستند نام اشخاص تاييد نشده
سخندان، نعمت، استاد مشاور
وضعیت فهرست نویسی
وضعیت فهرست نویسی
نمایه‌سازی قبلی
