عنوان

مطالعه لیگان‌های دو گونه از لینوم‌های آذربایجان شرقی و بهینه‌سازی تولید این ترکیبات در شرایط درون شیشه‌ای

شماره

‭۱۷۵۱۱پ‬

زبان متن نوشتاري يا گفتاري و مانند آن

per

عنوان اصلي

مطالعه لیگان‌های دو گونه از لینوم‌های آذربایجان شرقی و بهینه‌سازی تولید این ترکیبات در شرایط درون شیشه‌ای

نام نخستين پديدآور

/خدیجه زارع جند

نام ناشر، پخش کننده و غيره

: تبریز

تاریخ نشرو بخش و غیره

، ‮‭۱۳۹۳‬

نام توليد کننده

، میرزائی

متن يادداشت

چاپی

جزئيات پايان نامه و نوع درجه آن

دکتری

نظم درجات

علوم گیاهی( گرایش فیزیولوژی)

زمان اعطا مدرک

‮‭۱۳۹۳/۰۲/۲۲‬

کسي که مدرک را اعطا کرده

تبریز

متن يادداشت

جنس لینوم متعلق به خانواده لیناسه با داشتن ‮‭۲۳۰‬ گونه در نواحی معتدل دنیا گسترش یافته است .گیاهان جنس لینوم یکی از اساسی ترین گیاهان در طب سنتی به شمار می آیند .در این پژوهش برخی از جنبه های فیتوشیمیایی، کشت بافت، سوسپانسیون سلولی و مولکولی دو گونه از جنس لینوم بومی استان آذربایجان شرقی یعنی ‮‭Linum glaucum‬ و ‮‭Linum mucronatum‬ مورد بررسی قرار گرفت .در مطالعات فیتوشیمیایی، به منظور جداسازی متابولیت های ثانویه، اندام هوایی گیاه با دستگاه سوکسیله و به ترتیب با حلال های‮‭n‬ - هگزان، دی کلرومتان و متانول عصاره گیری شد .هر سه نوع عصاره با روش های کروماتوگرافی با لایه نازک ‮‭(TLC)‬ مورد تجزیه قرار گرفتند .عصاره های‮‭n‬ - هگزانی و دی کلرومتانی با استفاده از ‮‭VLC‬ یا کروماتوگرافی ستونی و ‮‭TLC‬ پره پاراتیو و عصاره متانولی با استفاده از دستگاه ‮‭HPLC‬ و به کمک ستون ‮‭ODS‬ خالص سازی شدند .ترکیبات به دست آمده از هر کدام از عصاره ها با استفاده از روش های طیف سنجی مثل‮‭UV‬ ،‮‭۱HNMR‬ و ‮‭۱۳CNMR‬ تعیین ساختمان شدند .با توجه به اهمیت دارویی این گونه های گیاهی، روش های تولید آزمایشگاهی آن با استفاده از کشت بافت و سوسپانسیون سلولی مورد توجه قرار گرفته اند .به منظور تهیه کالوس جهت کشت سوسپانسیون، ابتدا ریزنمونه ها) ریشه، کوتیلدون و هیپوکوتیل (طی دو آزمایش اولیه در محیط کشت ‮‭MS‬ حاوی انواع اکسین ها‮‭(۲, ۴‬ - ‮‭D‬، ‮‭NAA‬ و‮‭IAA)‬ ، سیتوکینین ها ‮‭(Kinetin‬ و ‮‭BAP)‬ کشت شدند .بعد از یافتن بهترین اکسین و سیتوکینین، آزمایش نهایی شامل ترکیبی از غلظت های مختلف اکسین و سیتوکینین بهینه طراحی و کشت شد .کالوس ها بعد از ‮‭۳‬ مرحله واکشت برای شروع کشت سوسپانسیون مهیا شدند .پس از سه مرحله واکشت کشت ها تحت تیمارهای محرک سالیسیلیک اسید ‮‭(۱۰ , ۲۰‬ ( ‮‭M‬و متیل جاسمونات ‮‭M) (۱۰۰ , ۲۰۰‬قرار گرفتند .بعد از گذشت ‮‭۴۸‬ تا ‮‭۷۲‬ ساعت، ماده موثره همه کشت ها با متانول استخراج شد .مقادیر پودوفیلوتوکسین با استفاده از ‮‭HPLC‬ و به کمک ستون ‮‭C۸‬ اندازه گیری شدند .به منظور بررسی تنوع سوماکلونال در کالوس ها، از هر کدام از سه ریزنمونه در ‮‭۷‬ تیمار مربوط به آزمایش نهایی، استخراج ‮‭DNA‬ آغازگر ‮‭ISSR‬ مورد استفاده قادر به تکثیر قطعات ‮‭DNA‬ بودند .نتایج حاصل از روش های مختلف شناسایی نشان داد که ترکیبات اصلی گونه ‮‭L. glaucum‬ علاوه بر پودوفیلوتوکسین، نوعی لیگنان دی گلیکوزیله تحت عنوان سکوایزولاریسیرزینول دی گلیکوزیل و فلاونوئید گلیکوزیله جدیدی با نام‮‭۵‬ ،‮‭۷‬ ، ‮‭۸‬ و‮‭۴‬ - تترا هیدروکسی‮‭۳‬ - متوکسی‮‭۴‬ - روتینوزیل فلاون می باشد .همچنین در گونه ‮‭L. mucronatum‬ ترکیبات لیگنانی پودوفیلوتوکسین و نوعی لیگنان جدید‮‭۶‬ - متوکسی آلفا پلتاتین به همراه مقداری ناخالصی از‮‭۳‬ - دودسیل سیکلوهگزانون از عصاره دی کلرومتانی جداسازی و شناسایی شدند .از عصاره متانولی این گونه دو فلاونوئید گلیکوزیل‮‭)- C- ۶‬ بتا-‮‭D‬ - گلوکوپیرانو ‮‭۶) O- (۱‬ - بتا‮‭D‬ - گلوکو پیرانوزیل) آپی ژنین) موکروناتوزید ‮‭I)‬ و‮‭O- ۷‬ - متیل( -‮‭O- '۴‬ -بتا-دی- آرابینوفورانویل‮‭O-۶)- (۱‬- بتا-‮‭D‬ - گلوکورونوپیرانوزید) آپی ژنین) موکروناتوزید ‮‭II)‬ استخراج و شناسایی گردید .در مطالعات کشت بافت بهترین محیط القاء کالوس از ریزنمونه هیپوکوتیل در محیط کشت ‮‭MS‬ حاوی ‮‭۱‬ میلی گرم در لیتر‮‭۲,۴‬ - ‮‭D‬و ‮‭۱‬ میلی گرم در لیتر کینتین حاصل شد .در مطالعات سوسپانسیون سلولی، در مجموع تیمار‮‭۲۰۰ M‬ متیل جاسمونات نسبت به بقیه تیمارها بیشترین میزان تولید پودوفیلوتوکسین را القا کرد .در بررسی های میکروسکوپی سلول های موجود در محیط کشت سوسپانسیون، اتوفلورسانس موضعی مشاهده گردید .در محیط های کشتی که تولید پودوفیلوتوکسین در آنها با افزودن الیسیتور تحریک شده بود شدت اتوفلورسانس بالا و در محیط های شاهد این شدت بطور مشخص پائین بود .الگوی نواری آغازگرها نیز نشان داد که الگوی نواری نمونه های مربوط به تیمارها و ریزنمونه های مختلف، متفاوت بودند

متن يادداشت

The genus Linum (Linaceae) comprises of 230 species which are widely distributed throughout the world. In this investigation some phytochemical, tissue and cell suspension culture and molecular aspects of two species of Linum including L. glaucum and L. mucronatum, which are indigenous to East Azerbaijan Province were studied. In order to purify of secondary metabolites, aerial parts and roots of plants, were soxhlet extracted, with n- hexane, dichloromethane and methanol, successively. The n- hexan and dichloromethane extracts were analyzed by VLC and TLC techniques, respectively. The methanolic extracts were purified by HPLC using ODS column. The structures of the purified compounds were determined using spectroscopic methods (UV, 1HNMR and 13CNMR). According to the results of spectroscopic procedures, podophyllotoxin, secoisolariciresinol diglycoside and a flavonoid glycoside (5, 7, 8 and 4- tetra hydroxyl 3- methoxy 4- rotinosyl flavone) were identified from L. glaucum dichloromethane and methanol extracts. The podophyllotoxin and 6-MeO-- peltatin were found to be the major compounds in dichloromethane extract of L. mucronatum. The methanol extracts of L. mucronatum were found to contain flavonoids: 7-O-methyl[-4-O--L-arabinopyranosyl (16)-O--d-glucuronopyranoside] apigenin and 8-C-[-D-glucuronopyranosyl (16)-O--D-glucuronopyranoside] apigenin. According to our knowledge this is the first report of 6-MeO-- peltatin and flavonoids in L. mucronatum. In order to obtain calli for suspension culture, the explants were cultured in MS medium supplemented with different cytokinins (Kinetin and BAP) and auxins (2, 4-D, NAA and IAA), separately. Calli were subcultured three times in MS medium supplemented with 2,4-D, (1mg/l) and Kinetin (1 mg/l) and were used for suspension culture. After 3 subcultures, suspension cultures were treated with elicitors salicylic acid (10 and 20 M) and methyl jasmonate (100 and 200 M). After 48-72 hours, the podophyllotoxin was extracted with methanol. Further qualitative and quantitative determination was performed by HPLC on C8 column. The effect of methyl jasmonate (200 M) on podophyllotoxin production was higher compared with other elicitors. Auto florescence was observed in the cell culture and it was remarkable in the cells those subjected to elicitors. To assess somaclonal variation, genomic DNA was extracted from all callus treatments and explants in two subcultures. All the 4 ISSR primers were successfully produced amplified fragments in all samples. The result showed different amplification patterns between DNA samples from explants and different subculture

مستند نام اشخاص تاييد نشده

زارع جند، خدیجه

مستند نام اشخاص تاييد نشده

موافقی، علی، استاد راهنما

مستند نام اشخاص تاييد نشده

ناظمیه، حسین، استاد راهنما

مستند نام اشخاص تاييد نشده

محمدی، ابوالقاسم، استاد مشاور

يادداشت عمومي

سیاه و سفید

وضعیت فهرست نویسی

نمایه‌سازی قبلی