همسانه سازی نواحی جناحین ناقلهای پلاستیدی اسفناج(.Spinacia oleracea L)
نام نخستين پديدآور
/محمدرضا طراغیس
وضعیت نشر و پخش و غیره
نام ناشر، پخش کننده و غيره
: دانشکده کشاورزی
تاریخ نشرو بخش و غیره
، ۹۴
یادداشتهای مربوط به نشر، بخش و غیره
متن يادداشت
چاپی
یادداشتهای مربوط به پایان نامه ها
جزئيات پايان نامه و نوع درجه آن
کارشناسی ارشد
نظم درجات
بیوتکنولوژی کشاورزی
زمان اعطا مدرک
۱۳۹۳/۱۱/۲۵
کسي که مدرک را اعطا کرده
دانشگاه تبریز
یادداشتهای مربوط به خلاصه یا چکیده
متن يادداشت
دستکاری ژنتیکی در اندامکهای پلاستیدی گیاهان برای اهدف گوناگون دارای اهمیت خاصی است .از مهمترین این اهداف میتوان به ایجاد صفات جدید زراعی و باغی، مقاومت در برابر تنشهای زیستی و غیر زیستی، تولید پروتئینهای نوترکیب از طریق سیستم اپران و مهندسی متابولیت اشاره کرد .تولید ناقلهای اختصاصی اولین گام مهندسی پلاستیدی بشمار میآید .اختصاصی بودن این ناقلها به خاطر وجود قطعات ژنوم کلروپلاستی در این ناقلهاست .این قطعات بنام نواحی جناحین معروفند که برای رخداد نوترکیبی همتا مورد نیاز هستند .در این تحقیق با توجه به گزارشهای مکرر از گیاهان دیگر ناحیهndhB - rps۷از گیاه اسفناج انتخاب گردید .برای همسانهسازی این نواحی از روش PCR استفاده شد .بدین منظور آغازگرهای اختصاصی این ناحیه توسط نرمافزار Primerblast طراحی شد .برای همسانهسازی این نواحی DNA کل از برگهای جوان گیاه اسفناج با روش CTAB استخراج گردید، سپس ناحیه ndhB - rps۷از ژنوم کل استخراج شده تکثیر و در وکتور۱۹ - pTGبه روش T/A همسانهسازی شد .در این روش از شوک حرارتی سلولهای مستعد باکتریهای Ecoli استفاده گردید .برای تأیید کلونیهای تراریخته فرضی از تکنیک کلونی PCR استفاده شد .از کلونیهای مثبت اقدام به کشت نموده و استخراج پلاسمید گردید که درستی پلاسمیدهای استخراج شده با آنزیم برشی EcoRI تأیید شد در نهایت از کلونی مثبت، پلاسمیدهای نوترکیب استخراج شده و برای توالییابی به شرکت Macrogen در کشور کرهجنوبی ارسال گردید .با مطالعات بیوانفورماتیکی معلوم شد قطعه همسانهسازی شده مربوط به ناحیه ndhB - rps۷از اسفناج بوده و از تشابه ۹۶ برخوردار میصباشد فلذا میتوان از این قطعه برای ساخت ناقل اختصاصی اسفناج استفاده نمود
متن يادداشت
Genetic manipulation in plastid organelle of plants has got special importance for various aims. One of the major aims is generating new agricultural and horticultural traits, resistance against biotic and abiotic stresses, producing recombinant protein and metabolic engineering by operon system. Producing particular vector is a first step in plastid engineering. This speciality is depends on cloning of fragments from chloroplast genome in these vectors. These parts are known flanking region that are needed for homologous recombination event. In this study, regarding to repeated reports from other plants, rps7-ndhB region was chosen from spinach. PCR method was used for cloning in these regions. This reason, particular primers of these region was designed by Primer Blast soft ware, and for cloning of these region, total DNA was extracted from new young leaves of spinach by CTAB method, then rps7 -ndhB region from extracted total genome was amplified and cloned in pTG-19 by T/A cloning. In this method, heat shock of compelant bacterium Ecoli is used. Cloning PCR technique was used for confirmation of assumed transformant clones. Positive clones were used as liquid culture, and plasmids were extracted and validity of extracted plasmids confirmed with EcoRI enzyme. Finally, thispositive clones of recombinant extracted plasmids are sent to Macrogen Company in South Korea for sequencing. Exact bioinformatic studies illustrated that cloned part was belonged to rps7 -ndhB of spinach with 96 homology and therefore this part is used for generating spinach specific vector
نام شخص به منزله سر شناسه - (مسئولیت معنوی درجه اول )