عنوان

بررسی تمايز سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی انسان در سیستم كشت سه بعدی ارگانوئید با استفاده از ماتريژل و هم كشتی با سلولهای سرتولی

شماره

۹۸۹۳۵پ

زبان متن نوشتاري يا گفتاري و مانند آن

فارسی

عنوان اصلي

بررسی تمايز سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی انسان در سیستم كشت سه بعدی ارگانوئید با استفاده از ماتريژل و هم كشتی با سلولهای سرتولی

نام عام مواد

[پایان نامه]

نام نخستين پديدآور

آق بی بی نیک محضر

نام ناشر، پخش کننده و غيره

دانشگاه علوم پزشکی تهران، دانشکده پزشکی

تاریخ نشرو بخش و غیره

۱۴۰۱

نام خاص و کميت اثر

۱۲۱ص

جزئيات پايان نامه و نوع درجه آن

دکتری تخصصی(PhD)

نظم درجات

بیولوژی تولید مثل

زمان اعطا مدرک

۱۴۰۱/۱۲/۰۳

امتياز متن

۲۰

متن يادداشت

مقدمه: ارگانوئیدهای بیضه مي تواند برای درمان ناباروری و مطالعه رشد بیضه و تمایز سلول های بنیادیاسپرماتوگونیال ( )SSCsدر حیطه بیولوژی تولید مثل مورد استفاده قرار گیرد. از آنحایي که تولید ارگانوئید ازسلول های اولیه بافت انسان به دلیل رشد محدود بسیار چالش برانگیز است، اکثر مطالعات در این زمینه از سللاین یا نمونه های حیواني استفاده کرده اند. در مطالعه حاضر، ما سلولهای اولیه بیضه انسان را سیستم ارگانوئیدکشت داده و اثرات SCFبر تمایز سلول های بنیادی اسپرماتوگونیال و آپوپتوز در این ارگانوئیدها در سطح ،mRNAپروتئین بررسي کردیم.مواد و روشها: نمونه بافت بیضه از 3بیمار مرگ مغزی به آزمایشگاه کشت سلول انتقال داده شد، و به مدت 3هفته کشت داده شدند. بیان ژن های اختصاصي سلول های زایای انساني، -α6 ، PLZF ،OCT4 ،VASAاینتگرینو ژن اختصاصي سلول سرتولي Vimentinبا RT-PCRپس از دو مرحله هضم آنزیمي ارزیابي شد. تكنیکفلوسیتومتری برای مارکر PLZFو ایمونوسیتوشیمي با استفاده از مارکرهای PLZF ،GFRa1به منظور تاییدحضور SSCها به کار برده شد. سپس کشت ارگانوئیدها با استفاده از سلول های اولیه بیضه انسان صورت گرفت.ارگانوئیدها به مدت 6هفته در محیط های تمایز حاوی SCFو RAکشت داده شدند. پس از این مدت بیانژنهای میوزی، پس میوزی و ژنهای آپوپتوزی به وسیله real time-PCRمورد ارزیابي قرار گرفت. همچنین ازتكنیک ایمونوهیستوشیمي ( )IHCبرای بررسي پروتنین PRM2استفاده گردید. ویژگي های مورفولوژیكيارگانوئیدهای حاصل به وسیله میكروسكوپ الكتروني گذاره ) (TEMو میكروسكوپ نوری مورد بررسي قرار گرفت.یافتهها: آنالیز RT-PCRوجود SSCها را در سوسپانسیون سلولي بیضه پس از دو مرحله هضم آنزیمي تایید کرد.نتایج فلوسایتومتری افزایش قابل توجهي در بیان مارکر PLZFپس از کشت SSCsبه مدت سه هفته نشان داد.همچنین ارزیابي کلني های SSCبا استفاده از تكنیک ایمونوسیتوشیمي بیان مارکرهای GFRa1و PLZFرا پساز سه هفته کشت دو بعدی تایید کرد. نتایج real time-PCRنشان داد که SCFباعث افزایش بیان ژنهایمیوزی، پس میوز و ضد آپوپتوزی و کاهش بیان ژنهای پیش آپوپتوزی مي شود. تجزیه و تحلیل IHCنشان دادکه ارگانوئیدها PRM2را در سطح پروتئین در حضور SCFبیان مي کنند. با توجه به ارزیابي های مورفولوژیكي،مشخص شد که ارگانوئیدها ساختارهای کروی فشرده هستند. سلول های لایه بیروني دوکي شكل و در دو تا سهلایه در کنار یكدیگر قرار گرفتند. سلولهای سرتولي و SSCها در ارزیابيهای TEMشناسایي شدند. اگرچه،طسلولهای اسپرماتید، احتمالاً به دلیل کوتاه بودن زمان تمایز نسبت به دوره تمایز استاندارد ( 02روز در مقابل 60روز) یافت نشد.نتیجه گیری: ارگانوئیدهای بیضه انسان ساختار و عملكرد بیضه را تا حدودی بازسازی مي کنند. از ارگانوئیدهایبیضه مي توان جهت مطالعه برهمكنش های سلولي، رشد و تمایز سلول های زاینده و غربالگری داروها و بررسيسمیت آنها استفاد کرد

موضوع مستند نشده

سلولهای بیضه ای اولیه

موضوع مستند نشده

ماتریژل

موضوع مستند نشده

سلولهای سرتولی

موضوع مستند نشده

ارگانوئید بیضه

موضوع مستند نشده

تمایز SSCها

موضوع مستند نشده

SCF آپوپتوز

موضوع مستند نشده

سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی

کد نقش

، پدیدآور

مستند نام اشخاص تاييد نشده

نیک محضر، آق بی بی

کد نقش

، استاد راهنما

کد نقش

، استاد راهنما

کد نقش

، استاد مشاور

کد نقش

، استاد مشاور

مستند نام اشخاص تاييد نشده

عباسی، مهدی

مستند نام اشخاص تاييد نشده

صدیقی گیلانی، محمدعلی

مستند نام اشخاص تاييد نشده

کروجی، مرتضی

مستند نام اشخاص تاييد نشده

جهانشاهی، مهرداد

عنصر شناسه اي

دانشگاه علوم پزشکی تهران، دانشکده پزشکی

کشور

ایران

تاريخ عمليات

20230228

شماره بازیابی

۲۶۰۰۷ف

شماره فيلد فرمت مبدا

دانشگاه علوم پزشکی تهران، کتابخانه دانشکده پزشکی

فرمت انتشار

p

نوع ماده

TF

کد کاربرگه

92029

سطح دسترسي

a

تكميل شده

Y