عنوان

بررسی تکثیر سلول های بنیادی اسپرماتوگونی انسان بالغ در سیستم های کشت دو بعدی و سه بعدی پلاسمای غنی از پلاکت

شماره

۹۶۵۶۵پ

زبان متن نوشتاري يا گفتاري و مانند آن

فارسی

عنوان اصلي

بررسی تکثیر سلول های بنیادی اسپرماتوگونی انسان بالغ در سیستم های کشت دو بعدی و سه بعدی پلاسمای غنی از پلاکت

نام عام مواد

[پایان نامه]

نام نخستين پديدآور

فرناز خدیوی

نام ناشر، پخش کننده و غيره

دانشگاه علوم پزشکی تهران، دانشکده پزشکی

تاریخ نشرو بخش و غیره

۱۳۹۹

نام خاص و کميت اثر

۸۵ص.

ساير جزييات

جدول، نمودار

مواد همراه اثر

سی دی

جزئيات پايان نامه و نوع درجه آن

دکتری تخصصی(PHD)

نظم درجات

علوم تشریحی

متن يادداشت

بهبود روش های کشت سلول های اسپرماتوگونی منجر به مطالعه عمیق اسپرماتوژنز درشرایط آزمایشگاهی و درمان ناباروری مردان آزواسپرمی می گردد. تاکنون مطالعات گسترده ای برای ایجاد بستری مناسب به منظور کشت سلول های اسپرماتوگونی انجام شده است، که در مطالعه حاضر از سیستم های کشت دوبعدی و سه بعدی پلاسمای غنی از پلاکت (PRP) استفاده گردید. هدف از انجام این مطالعه هم کشتی سلول های اسپرماتوگونی انسانی با سلول های سرتولی در سیستم های کشت دوبعدی و سه بعدی پلاسمای غنی از پلاکت، جهت ارزیابی تکثیر و خودنوسازی سلول های اسپرماتوگونی بود.روش کار: نمونه بافت بیضه از بیماران مرگ مغزی تهیه شد. پس از هضم مکانیکی، هضم آنزیمی دو مرحله ای و تعیین درصد زنده مانی سلول ها، کشت سلولی به مدت 4 هفته در محیط کشت با القاگر تکثیری انجام شد. برای تعیین هویت سلول های حاصله، از تکنیک RT- PCR برای بیان ژن های VASA ,OCT4 و PLZF، تکنیک فلوسایتومتری با مارکر PLZF و روش ایمونوسیتوشیمی با استفاده از مارکرهای GFRa1،PLZF استفاده شد. برای تعیین عملکردی بودن سلول های اسپرماتوگونی، پیوند سلول ها به موش مدل گیرنده آزواسپرمی انجام شد. PRP تهیه گردید، دوزیمتری PRP درچهار دوز مختلف %10، %5، %5/2، %1 به کمک تکنیک MTT انجام شد. داربست سه بعدی PRP به کمک کلسیم کلرید Cacl2)) تهیه گشت. برای ارزیابی ساختار داربست و هم چنین کلونی زایی سلول ها روی داربست از تصاویرمیکروسکپ الکترونی استفاده شد. تست های هیدراتاسیون، تجزیه بیولوژیکی و عدم سمیت داربست نیز انجام شد. سلول ها در سه گروه کنترل، دوبعدیPRP و سه بعدی PRP به مدت 4 هفته در محیط کشت حاویGDNF, LIF, KSR و آنتی بیوتیک کشت داده شدند. درنهایت، بیان ژن های GFRa1 و c-KIT به کمک Real-time PCR مورد ارزیابی قرار گرفت، زنده مانی سلول ها به کمک تکنیک MTT و میانگین تعداد و قطر کلونی ها نیز بررسی شد. نتایج: یافته های RT- PCR افزایش معناداری در بیان مارکرهای سلول های اسپرماتوگونی و سرتولی مانند OCT4، VASA و Vimentin (p<0.01) را نشان داد. نتایج فلوسایتومتری نیز افزایش قابل توجهی در درصد سلول های PLZF مثبت گزارش کردند. کلونی های سلولی به کمک تکنیک ایمونوسیتوشیمی بیان مارکرهای GFRa1،PLZF را نشان دادند. پس از پیوند سلول ها به لوله های سمینی فروس موش آزواسپرمی، مهاجرت سلول های اسپرماتوگونی با موفقیت انجام شد. بررسی های MTT و تصاویر میکروسکپ الکترونی نشان دادند که داربست PRP، ساختاری غیرسمی و متخلخل (میانگین سایز منافذ داربست 77/6± 87/46 ) می باشد. نتایج Real-time PCR نشان دادند که بیان ژن های GFRa1 و c-KIT به طور معناداری (P <0.001) در گروه کشت سه بعدی PRP نسبت به سایر گرو ه ها افزایش یافت. نتایج اندازه گیری قطر و تعداد کلونی ها نیز نشان دادند که استفاده از PRP منجر به افزایش کلونی زایی در سلول های بنیادی اسپرماتوگونی می گردد (P <0.01). نتیجه گیری: استفاده از غلظت بهینه PRP در سیستم کشت دوبعدی، منجر به افزایش تکثیر سلول های اسپرماتوگونی گشت. فعال سازی PRP توسطCacl2 و تشکیل داربستPRP به عنوان یک بستر سه بعدی باعث افزایش قابل توجه کلونی زایی سلول های اسپرماتوگونی انسان گشت. پتانسیل پلاسمای غنی از پلاکت به حضور سیتوکین‎ها، فاکتورهای رشد پلاکت ها و ریزساختار سه بعدی داربست PRP نسبت داده می شود که از niche سلول های اسپرماتوگونی تقلید می کند .یافته های حاصله نتایج امیدوارکننده ای در استفاده از PRP برای درمان ناباروری افراد آزواسپرمی و حفظ باروری کودکان مبتلا به سرطان ارائه کردند.

موضوع مستند نشده

سلول های بنیادی اسپرماتوگونی انسان

موضوع مستند نشده

کشت دوبعدی

موضوع مستند نشده

کشت سه بعدی

موضوع مستند نشده

پلاسمای غنی از پلاکت

موضوع مستند نشده

اسپرماتوژنز

کد نقش

، پديدآور

مستند نام اشخاص تاييد نشده

خدیوی، فرناز

کد نقش

، استاد راهنما

کد نقش

، استاد مشاور

مستند نام اشخاص تاييد نشده

عباسی، مهدی

مستند نام اشخاص تاييد نشده

کروجی، مرتضی

عنصر شناسه اي

دانشگاه علوم پزشکی تهران، دانشکده پزشکی

کشور

ایران

تاريخ عمليات

20221207

شماره بازیابی

۲۱۲۶ف

شماره فيلد فرمت مبدا

دانشگاه علوم پزشکی تهران، کتابخانه دانشکده پزشکی

فرمت انتشار

p

نوع ماده

TF

کد کاربرگه

92029

سطح دسترسي

a

تكميل شده

Y