عنوان

ارزیابی مولکولی و بلوغ فولیکول‌های پره‌آنترال موش در سیستم کشت سه بُعدی با استفاده از هیدروژل کیتوزان در مقایسه با هیدروژل آلژینیت

شماره

۹۳۹۰۰پ

زبان متن نوشتاري يا گفتاري و مانند آن

فارسی

زبان اثر اصلي

فارسی

عنوان اصلي

ارزیابی مولکولی و بلوغ فولیکول‌های پره‌آنترال موش در سیستم کشت سه بُعدی با استفاده از هیدروژل کیتوزان در مقایسه با هیدروژل آلژینیت

نام عام مواد

[پایان نامه]

نام نخستين پديدآور

فاطمه حسنی

نام ناشر، پخش کننده و غيره

دانشگاه علوم پزشکی تهران، دانشکده پزشکی

تاریخ نشرو بخش و غیره

۱۳۹۷

نام خاص و کميت اثر

۱۰۴ص.

ساير جزييات

جدول نمودار

مواد همراه اثر

سی دی

جزئيات پايان نامه و نوع درجه آن

دکتری تخصصی(PHD)

نظم درجات

بیولوژی تولیدمثل

متن يادداشت

مقدمه: کشت فولیکول‌های منفرد به روش دو بُعدی و سه بُعدی، جایگزینی مناسب برای پیوند بافت تخمدان است. با وجود مطالعات گسترده طی سال‌های گذشته، هنوز روشی استاندارد و مورد توافق همه، برای کشت سه بُعدی فولیکول، حتی در مدل‌‌‌‌‌‌ های موشی نیز وجود ندارد. هدف از این مطالعه، بررسی بیومتریال جدید برای کشت سه بُعدی فولیکول‌های تخمدانی موش است که منجر به مدلی برای حمایت از انسجام فولیکول طی کشت آزمایشگاهی شود. مطالعه‌ی حاضر، اولین کاربرد هیدوژل کیتوزان را برای کشت سه بُعدی فولیکول‌های پره‌آنترال موش گزارش می‌کند. مواد و روش‌ها: این مطالعه در دو فاز طراحی شد. در فاز اول ابتدا هیدروژل کیتوزان در سه غلظت 5/0، یک و 5/1 درصد تهیه شد. سپس به منظور دستیابی به غلظت مناسب این هیدروژل، ارزیابی‌های ریخت شناسی شامل FTIR(Fourier Transform Infrared) و تصاویر میکروسکوپ الکترونی، ارزیابی های مکانیکی شامل ویسکوزیته، نرخ تجزیه‌پذیری، نرخ تورم، استحکام مکانیکی، آزمون MTT و زنده‌مانی بر روی این سه غلظت انجام شد. در فاز دوم پس از مشخص شدن غلظت مناسب هیدروژل کیتوزان ارزیابی‌های بیولوژیک در این غلظت انتخابی در مقایسه با آلژینیت انجام شد. برای انجام فاز دوم مطالعه از موش‌‌های سوری نژاد NMRI استفاده شد. فولیکول‌های پره‌آنترال انکپسوله شده در غلظت انتخابی هیدروژل کیتوزان و هیدروژل آلژینیت (غلظت 7/0 درصد) در محیط αMEM حاوی FSH, ITS و FBS پنج درصد، به‌مدت سیزده روز کشت داده شدند. در این مرحله نرخ تشکیل حفره آنتروم، قطر و زنده مانی فولیکول ها ارزیابی شد. سپس به‌منظور ازسرگیری میوز و بلوغ تخمک‌ها، hCG به محیط کشت اضافه شد. نرخ تخمک متافاز II و کیفیت تخمک‌های بالغ شده توسط رنگ‌آمیزی ایمینوسیتوشیمی بررسی شد. بیان ژن‌های فولیکوژنزیس Ggf9, Bmp15, Zp3, Cx37, Cx43, Bmp4 Bmp7 ، استروئیدوژنزیس Cyp19a1, Cyp11a1, Cyp17a1, FSH receptor (Fshr) و آپوپتوزیس Bax, Bcl2 , Casp3, P53،Bax/Bcl2 در فولیکول‌های آنترال حاصل از کشت سه بُعدی در هر دو گروه و با فولیکول‌های پره‌آنترال روز صفر به عنوان گروه کنترل با کمک تکنیک q-RT-PCR مقایسه شدند. همچنین ترشح هورمون‌های استروئیدی توسط کیت الیزا در هر دو گروه در روز صفر و سیزده با یکدیگر مقایسه شدند نتایج: نرخ تورمی بالاتر کیتوزان 5/0درصد در مقایسه با کیتوزان یک درصد و مقایسه‌ی تصاویر میکروسکوپ الکترونی نشان از قدرت مکانیکی ضعیف این هیدروژل داشت. کیتوزان یک درصد نسبت به 5/1 درصد دارای توزیع منافذ یکنواخت و نرخ تورمی بالاتری است. غلظت نیم درصد به‌دلیل ویسکوزیته پایین و غلظت 5/1 درصد نیز به‌دلیل ویسکوزیته‌ی بالا مناسب کشت فولیکول تخمدانی نبودند بنابراین غلظت انتخابی برای انجام فاز دوم مطالعه و مقایسه با هیدروژل آلژینیت کیتوزان یک درصد است نرخ زنده‌مانی فولیکول‌ها طی کشت آزمایشگاهی با حضور تخمک سالم ارزیابی شد. نرخ زنده‌مانی در کیتوزان یک درصد به‌طور ‌معناداری بیشتر از آلژینیت بود (p < 0.05). نرخ تشکیل حفره آنتروم در گروه کیتوزان نسبت به آلژینیت افزایش داشت، ولی اختلاف ‌معناداری را نشان نداد. قطر فولیکول‌ها در گروه کیتوزان یک درصد نسبت به آلژینیت در روزهای ششم و سیزدهم کشت ‌به‌طور ‌معناداری افزایش نشان داد(p < 0.05). تخمک ‌‌‌‌های حاصل از گروه آلژینیت نسبت به گروه کیتوزان نرخ GV بیشتر و GVBD کمتری را نشان دادند. نرخ MII در گروه کیتوزان بالاتر بود، ولی اختلاف ‌معناداری را نشان نداد. دوک میوزی نرمال و آرایش کروموزوم‌ها در گروه کیتوزان و کنترل بالاتر از گروه آلژینیت بود و اختلاف ‌معناداری را نشان داد(p < 0.05). توزیع نرمال گرانول های قشری در گروه کنترل بالاتر از گروههای آزمایشی بود و اختلاف معنی داری را نشان داد(p < 0.05). بیان ژن‌های فولیکوژنزیس، استروئیدوژنزیس و آپوپتوزیس در هر دو گروه کیتوزان و آلژینیت نسبت به گروه کنترل، الگوی بیان مشابهی را نشان دادند. بیان ژن‌های Cyp19a1 (5/1 برابر) و Lhcgr (8/1 برابر) در گروه کیتوزان ‌به‌طور ‌معناداری بالاتر از گروه آلژینیت بود (p < 0.05). بیان ژن Fshr در گروه کیتوزان نسبت به گروه آلژینیت، کاهش ‌معناداری را نشان داد (p < 0.05). ترشح استرادیول در گروه کیتوزان بالاتر از گروه آلژینیت بود و اختلاف ‌معناداری را نشان داد (p < 0.05) ولی ترشح پروژوسترون با وجود افزایش بیشتر در گروه کیتوزان اختلاف ‌معناداری را نشان نداد. نتیجه گیری: نتایج مطالعه‌ی حاضر نشان می‌دهد که کیتوزان هیدروژلی قابل قبول است و برای انکپسوله کردن فولیکول‌های تخمدانی، کشت سه بُعدی آن و تکوین بعدی فولیکول مناسب است.

موضوع مستند نشده

کیتوزان

موضوع مستند نشده

آلژینیت

موضوع مستند نشده

هیدروژل

موضوع مستند نشده

فولیکول تخمدانی

موضوع مستند نشده

سیستم کشت سه بعدی

موضوع مستند نشده

پیوند بافت تخمدان

موضوع مستند نشده

بررسی بیومتریال

موضوع مستند نشده

FTIR (Fourier Transform Infrared)

موضوع مستند نشده

نژاد NMRI

موضوع مستند نشده

ایمینوسیتوشیمی

موضوع مستند نشده

بیان ژن Fshr

موضوع مستند نشده

3D (three-dimensional) system

موضوع مستند نشده

Chitosan

موضوع مستند نشده

Alginate

موضوع مستند نشده

Hydrogel

موضوع مستند نشده

Ovarian follicle

موضوع مستند نشده

3D culture

موضوع مستند نشده

biocompatibility

موضوع مستند نشده

Testing of novel biomaterials

موضوع مستند نشده

Immunocytochemistry

موضوع مستند نشده

orthotropic grafting

موضوع مستند نشده

Individual follicle culture

موضوع مستند نشده

دستیابی به غلظت مناسب

موضوع مستند نشده

ارزیابی‌های بیولوژیک

موضوع مستند نشده

کشت آزمایشگاهی

موضوع مستند نشده

culture model

موضوع مستند نشده

novel CS hydrogel

موضوع مستند نشده

۳-D culture

کد نقش

، پدیدآور

مستند نام اشخاص تاييد نشده

حسنی، فاطمه

کد نقش

، استاد راهنما

کد نقش

، استاد راهنما

کد نقش

، استاد مشاور

کد نقش

، استاد مشاور

مستند نام اشخاص تاييد نشده

حسن زاده، غلامرضا

مستند نام اشخاص تاييد نشده

رضازاده ولوجردی، مجتبی

مستند نام اشخاص تاييد نشده

ابراهیمی، بی تا

مستند نام اشخاص تاييد نشده

معینی، اشرف

عنصر شناسه اي

دانشگاه علوم پزشکی تهران، دانشکده پزشکی

کشور

ایران

تاريخ عمليات

20230503

شماره بازیابی

۱۷۹۲ف

شماره فيلد فرمت مبدا

دانشگاه علوم پزشکی تهران، کتابخانه دانشکده پزشکی

فرمت انتشار

p

نوع ماده

TF

کد کاربرگه

92029

سطح دسترسي

a

تكميل شده

Y