عنوان
پدید آورنده
موضوع
رده
کتابخانه
محل استقرار
شماره کتابشناسی ملی
شماره
۹۳۸۵۲پ
زبان اثر
زبان متن نوشتاري يا گفتاري و مانند آن
فارسی
زبان اثر اصلي
فارسی
عنوان و نام پديدآور
عنوان اصلي
استفاده از جهش زایی تصادفی در بهبود پایداری دمایی کلسترول اکسیداز به منظور سنجش سطوح کلسترول تام سرمی
نام عام مواد
[پایان نامه]
نام نخستين پديدآور
علی اکبر فضایلی
وضعیت نشر و پخش و غیره
نام ناشر، پخش کننده و غيره
دانشگاه علوم پزشکی تهران، دانشکده پزشکی
تاریخ نشرو بخش و غیره
۱۳۹۷
مشخصات ظاهری
نام خاص و کميت اثر
۹۱ص.
ساير جزييات
جدول نمودار
مواد همراه اثر
سی دی
یادداشتهای مربوط به پایان نامه ها
جزئيات پايان نامه و نوع درجه آن
دکتری تخصصی(PHD)
نظم درجات
بیوشیمی بالینی
یادداشتهای مربوط به خلاصه یا چکیده
متن يادداشت
مقدمه: کلسترول اکسیداز یک آنزیم باکتریایی است که امروزه کاربرد گسترده‌ای در تشخیص و درمان پیدا کرده است. کلسترول اکسیداز پس از گلوکز اکسیداز پرکاربردترین آنزیم در زمینه تشخیص می‌باشد. آنزیم‌های مختلفی با ویژگی‌های متفاوت از گونه‌های باکتریایی گوناگون استخراج شده‌اند. برخی از آنزیم‌هایی که ویژگی‌های مناسبی دارند در روش‌هاي سنجش سطوح کلسترول سرمی مورد استفاده قرار می‌گیرند. با این وجود، بهبود هرچه بیشتر کارآیی آنزیم فوق همواره یکی از دغدغه‌های اصلی بوده است. هدف از اجرای این مطالعه بهبود پایداری دمایی آنزیم می باشد. آنزیم‌های نوترکیب حاصل از نظر پایداری دمایی، و سایر ویژگی‌های آنزیمی ارزیابی شده و در نهایت کارآمدترین آنها برای سنجش سطوح کلسترول سرمی مورد استفاده قرار گرفته و با روش متداول مورد مقایسه قرار خواهند گرفت.روش کار: توالی نوکلئوتیدی کد کننده کلسترول اکسیداز از دوسویه استرپتومیسس و کروموباکتریوم داخل پلاسمید طراحی و کلون شد. جهش‌های تصادفی به منظور ایجاد انواعی با پایداری دمایی بالاتر به روش PCR مستعد خطا ایجاد و جهش یافته‌ها با پایداری دمایی بالاتر انتخاب و در حجم بالا بصورت نوترکیب بیان گردید. کلسترول به عنوان سوبسترا برای تعیین فعالیت آنزیم استفاده و پارامترهاي کينتيكي آنزيم‌های وحشی و جهش یافته‌های مربوطه محاسبه گردید. پايداري طولانی مدت آنزيم‌های وحشي و جهش يافته‌هاي آن در دماهای C°20-، C° 4 و C° 25 مورد ارزیابی قرار گرفته و pH بهینه ونیز دمای بهینه فعالیت آنها تعیین شدند. مطالعات دورنگ‌نمايي دوراني ناحيه دور ماورای بنفش به‌منظور بررسی ساختمان دوم آنزیم‌ها در حالت محلول انجام شد. در ادامه کارآیی آنزیم‌های فوق در سنجش سطوح تام کلسترول سرمی مورد ارزیابی قرار گرفته و پارامترهای مربروطه شامل دقت روش، درستی و خطی بودن تعیین گردید.نتایج: با انجام جهش‌های تصادفی به روش ep-PCR کتابخانه‌ای از ژن‌های کد کننده آنزیم کلسترول اکسیداز تهیه و در مرحله بعد و پس از غربال‌گری یک جهش یافته از هرکدام از کلسترول اکسیدازها که پایداری دمایی بیشتری نسبت به نوع وحشی آنزیم داشتند انتخاب شدند. در ادامه با مطالعه پارامترهای کینتیکی آنزیم‌ها مقدار Km برای هریک از انواع وحشی و جهش یافته آنزیم کلسترول اکسیداز با منشا استرپتومیسس به ترتیب Mµ 13 و Mµ 5/12 محاسبه شد. همچنین برای آنزیم‌های وحشی و جهش یافته از منشا کروموباکتریوم مقدار Km به ترتیب Mµ 31 و Mµ 28 محاسبه شد. با بررسی دمای بهینه برای فعالیت آنزیم‌ها مشاهده شد که برای آنزیم‌های با منشا استرپتومیسس دمای بهینه برابر با C°50 تا 60 و برای آنزیم‌هایی با منشا کروموباکتریوم بین C°60 تا 70 بوده است. با بررسی پایداری طولانی مدت آنزیم‌ها در دماهای مختلف مشخص شد که آنزیم با منشا کروموباکتریوم به طور کلی دارای پایداری دمایی بالاتری نسبت به آنزیم با منشا استرپتومیسس بوده است. با ارزیابی قابلیت اطمینان عملکرد کیت‌های سنجش کلسترول تام سرمی حاوی آنزیم‌های نوترکیب فوق مشخص شد که استفاده از آنها در سنجش کلسترول سرمی و نتایج حاصل از آن از نظر بالینی قابل پذیرش می‌باشد.نتیجه گیری: یافته های این مطالعه نشان داد که با استفاده از جهش‌زایی تصادفی می‌توان آنزیم‌های کلسترول اکسیدازی با پایداری دمایی بالاتر به منظور سنجش کلسترول تام سرمی تولید کرد.
موضوع (اسم عام یاعبارت اسمی عام)
موضوع مستند نشده
کلسترول اکسیداز
موضوع مستند نشده
پایداری دمایی
موضوع مستند نشده
PCR مستعد خطا
موضوع مستند نشده
جهش زایی تصادفی
موضوع مستند نشده
سطوح کلسترول تام سرمی
موضوع مستند نشده
سویه استرپتومیسس
موضوع مستند نشده
سویه کروموباکتریوم
موضوع مستند نشده
Cholesterol oxidase
موضوع مستند نشده
Enzyme activity
موضوع مستند نشده
Random mutagenesis
موضوع مستند نشده
Thermal stability
نام شخص به منزله سر شناسه - (مسئولیت معنوی درجه اول )
کد نقش
، پدیدآور
مستند نام اشخاص تاييد نشده
فضایلی، علی اکبر
نام شخص - ( مسئولیت معنوی درجه دوم )
کد نقش
، استاد راهنما
کد نقش
، استاد مشاور
مستند نام اشخاص تاييد نشده
امینیان، مهدی
مستند نام اشخاص تاييد نشده
گلستانی، ابوالفضل
شناسه افزوده (تنالگان)
عنصر شناسه اي
دانشگاه علوم پزشکی تهران، دانشکده پزشکی
مبدا اصلی
کشور
ایران
تاريخ عمليات
20230312
شماره دستیابی
شماره بازیابی
۱۷۷۹ف
داده هایی که از فرمت مبدا برگردانیده نشده است
شماره فيلد فرمت مبدا
دانشگاه علوم پزشکی تهران، کتابخانه دانشکده پزشکی
وضعیت انتشار
فرمت انتشار
p
اطلاعات رکورد کتابشناسی
نوع ماده
TF
کد کاربرگه
92029
اطلاعات دسترسی رکورد
سطح دسترسي
a
تكميل شده
Y
