پ۲۸۷۹۳
per
شناسایی پلی‌مورفیسم تک نوکلئوتیدی در ژن کاندیدا آریل آلکیل آمین (AA-NAT) با فحلی خارج از فصل در گوسفند رومانوف
سکینه ایمانی زاد
کشاورزی
۱۴۰۰
۷۲ص.
سی دی
کارشناسی ارشد
علوم دامی،گرايش ژنتیک و اصلاح نژاد دام
۱۴۰۰/۰۶/۲۸
گوسفند حیوانی با پلی استروس و تولیدمثل وابسته به فصل و فتوپریود است و همچنین از جمله دام‌های سبک است که در کشورهای مختلف تولیدات فزاینده و مشتری پسند را به همراه دارد. هر چند القاء تولیدمثل خارج از فصل از طرق مختلف توصیه شده است تمرکز بر روی نژادهایی که به طور طبیعی تولیدمثل خارج از فصل دارند از اهمیت بیشتری برخوردار است. در این راستا، شناسایی بیو مارکرهایی که بتواند گوسفندان با پتانسیل آنستروس کوتاه و فحلی خارج از فصل را تشخیص دهد در سال‌های اخیر مورد علاقه‌مندی قرار گرفته است. با این انگیزه، هدف از مطالعه حاضر بررسی پلی مورفیسم ژن ملاتونین در گوسفند رومانوف به روش PCR-RFLP می‌باشد. با پیشرفت کار و رسیدن به نتایج دلخواه نژاد قزل و دو رگ‌های آن نیز به تحقیق اضافه شد.این تحقیق، در مجتمع آزمایشگاهی ساختمان شماره 2 دانشکده کشاورزی و آزمایشگاه اصلاح دام کاربردی گروه علوم دامی دانشگاه تبریز واقع در جاده باسمنج انجام گرفت. در این مطالعه از تعداد 35 میش گوسفند رومانف خالص و 27 قزل و 15 دو رگ قزل-رومانوف که رومانوف‌ها متعلق به فارم آقای نفیسی مهر (تبریز) و نژادهای قزل و دو رگ‌ها مربوط به ایستگاه تحقیقاتی خلعت پوشان بود اقدام به خون‌گیری گردید. استخراج DNA و واکنش زنجیره پلیمراز و هضم آنزیمی و الکتروفورز و رنگ‌آمیزی و عکس‌برداری به روش متداول انجام شد. یک قطعه 1142 بازی از منطقه اگزون که حاوی جهش از نوع بد معنی یا (missense) و تغییر اسیدآمینه از نوع معنی‌دار (دو سایت برش و یک SNP) مورد هدف قرار گرفت. در این تکنیک PCR_RFLP سه ژنوتیپ و دو آلل به دست آمد. این قطعه bp1142 واقع در bp152(اگزون 1)، bp290 از (اینترون 1)،bp 155(کل اگزون 2)، bp 338 (اینترون2) درنهایت bp 207 از اگزون 3 می‌باشد. اندازه آلل‌های مورد انتظار با مقالات رفرنس همخوانی داشت. فراوانی ژنوتیپی و آللی با نرم‌افزار popgen محاسبه شد. آلل A دارای باندهای 516 و 371 و 255 و آلل G دارای باندهای 371 و 333 و 255 و 183 است. آلل G در نژادهای با تولیدمثل غیر فصلی بیشتر بود و این جهش باعث تبدیل Arg>Gly ساختمان helix-α به helix-β می‌شود و در واقع تولیدمثل غیر فصلی را بهبود می‌دهد. با مقایسه نتایج با مطالعات مشابه پیشین از بابت آلل مطلوب وابسته به تولیدمثل غیر فصلی معلوم شد که در گوسفند رومانف نیز آلل G در سطح فراوانی مطلوبی قرار دارد و همچنین با توجه به دو رگ گیری قزل با رومانوف در ایستگاه خلعت پوشان و پایین بودن فراوانی آلل G در قزل در دو رگ‌ها فراوانی حد واسط G نسبت به والدین مشاهده گردید که به نوعی تأیید دو رگ گیری می‌باشد. نتایج مطالعه ما با مطالعات پیشین همخوانی داشت. در نهایت وجود پلی مورفیسم در ژن ملاتونین می‌تواند ابزار کمکی برای تعریف مدل‌های مناسب برای حرکت به سمت تولید دام‌های با پتانسیل ژنتیکی طبیعی به فحلی خارج از فصل و افزایش بازدهی تولیدمثل شود.
Abstract: Sheep are spontaneously ovulating polystrous animals whith seasonal repordaction depend on photoperiod. Although induetion of estrous out of season has been recommended in various hormone therapy, it is more important to focus on genetically out- of- season breeds during repordaction. In this scientific puzzle, the identification of biomarkers thet can detect sheep with short estrus potential and out-of-season estrus has recently been of interest. With this motivation the aim of the present study was to investigate the melatonin gene polymorphism in Romanov sheep using PCR_RFLP method. During progress of the labwork and achieving the desired results, Ghezel sheep breed and its cross were additional subjected to the research. In this study, blood samples were taken from 35 Romanov sheep, 27 Ghezel and 15 two Ghezel-Romanov cross, which collected from Nafisi Mehr Farm (Tabriz) and Ghezel breeds and their cross with romonove belonged to Khalatpooshan Research station. In the next step, genomic DNA extraction, polymerase chain reaction, subsequentenzymatic digestion,electrophoresis,staining and imaging were performed by conventional methods. This candidate fragment is 1142 bp located at 152 bp (exon 1), 290 bp from (intron 1), 155 bp (total exon 2), 338 bp (intron 2) and finally 207 bp belong to exon three. The expected allele size was shown consistency with the pervious reference articles. Futhermore, genotypic and allelic frequencies were calculated by POPGEN software. Allele A has expressed PCR size 516, 371 and 255bp and allele G has bands 371, 333, 255 and 183 bp. Results demonstrated the G allele was higher in breeds with non-seasonal reproduction, and this mutation converts the Arg> Gly structure of helix-α to helix-β, thereby improving non-seasonal reproduction. Comparing the results with previous similar studies for optimal alleles related to non-seasonal reproduction, it was found that in Romanov sheep, G allele is at a desirable frequency level and also due to Ghezel cross Romanov expressed low frequency G allele in Ghezel was observed in crossed animal with the frequency of G intermediate level compared to parental population, therefore somehow confirmed crossbreeding process between two breed. Morover, the overall figure of obtained outputs of our study were consistent with previous studies. As concluion, the presence of polymorphisms in the melatonin gene could be an aid in defining appropriate models for moving toward producing animals with natural genetic potential to out-of-season estrus and increasing reproductive efficiency.
Screening of SNP marker within Aralkylamine N-Acetyltransferase(AA-NAT) candidate genes for estrus out of season among Romanov sheep
ایمانی زاد،
سکینه
تهیه کننده
جوانمرد،
شجاع غیاث،
رأفت،
آرش
جلیل
سید عباس
استاد راهنما
استاد راهنما
استاد مشاور
تبریز
