عنوان
پدید آورنده
موضوع
رده
کتابخانه
محل استقرار
شماره کتابشناسی ملی
شماره
۳۰۷۸پ
زبان اثر
زبان متن نوشتاري يا گفتاري و مانند آن
فارسی
عنوان و نام پديدآور
عنوان اصلي
ساخت و آنالیز ناک-این GFP در رده سلولی K562 حامل جهش های HPFH-type از نوع غیر حذفی
نام عام مواد
[پایان نامه]
عنوان اصلي به زبان ديگر
Construction and analysis of K562 GFP knock-in cells harboring non-deletional HPHF-type mutations
وضعیت نشر و پخش و غیره
نام ناشر، پخش کننده و غيره
علوم بهزیستی و توانبخشی University of Social Welfare and Rehabilitation
تاریخ نشرو بخش و غیره
۱۳۹۹
مشخصات ظاهری
نام خاص و کميت اثر
۱۴۵ص.
یادداشتهای مربوط به پایان نامه ها
جزئيات پايان نامه و نوع درجه آن
دکترا
نظم درجات
ژنتیک پزشکیMedical Genetics
زمان اعطا مدرک
۱۳۹۹/۰۲/۲۹
یادداشتهای مربوط به خلاصه یا چکیده
متن يادداشت
هموگلوبینوپاتی ها، نظیر بتا-تالاسمی، از متداول ترین اختلالات ارثی در ایران و جهان هستند که به دلیل اختلال جهش هایی در ژن بتا-گلوبین رخ می دهند. فعال سازی مجدد ژن گاما گلوبین که درطی فرایند تکامل خاموش شده است، سطح هموگلوبین جنینی را بالا می برد و علائم بتا تالاسمی را بهبود می بخشد. تداوم بیان گاما گلوبین جنینی در بزرگسالی به طور طبیعی در یک شرایط ژنتیکی تحت عنوان پایداری ارثی هموگلوبین جنینی (HPFH) رخ می دهد. جهش نقطه ای در پروموتر گاما گلوبین جنینی می تواند باعث HPFH شود. هدف مطالعه حاضر ناک-این یک کاست EGFP در ژن های گاما-گلوبین سلول های K562 از طریق CRISPR / Cas9، و ارزیابی بیان و القاء هدفمند ترانس ژن EGFP بواسطه هیدروکسی اوره (HU) و در ادامه ایجاد جهش های HPFH، -175 T→C، −195 C→G و A→G -113 در ناحیه پروموتر و بررسی تاثیر آنها بر میزان فلئورسنس EGFP بود. در نهایت هدف کلی مطالعه ارائه یک پلت فرم بالقوه برای آزمایش اثر عملکرد ترکیبی از جهش ها یا ایجاد جهش هایی غیر طبیعی در کاست به منظور افزایش بیان گاما-گلوبین است.کاست های EGFP به طور اختصاصی وارد ژن Gγ شده اند. بیان EGFP در جمعیت سلول هدف و کلون های ایزوله شده مشاهده شد. علاوه بر این، رونوشت EGFP و سطوح فلورسانس پس از تیمار با HU به طور قابل توجهی القا شد. در فاز دوم مطالعه و پس از ایجاد جهش های HPFH، -175 T→C، −195 C→G و A→G -113 در ناحیه پروموتر، سطوح فلورسانس در سلول های حاوی جهش -175 T→C افزایش پیدا کرد، درحالی که در رده های سلولی دارای دو جهش دیگر میزان فلئورسنس کاهش یافت.این سیستم برای مطالعات در مقیاس ژنوم عناصر تنظیمی عمل کننده سیس که در بیان گاما-گلوبین یا القاء توسط HU دخالت دارند، به راحتی قابل استفاده است. از سوی دیگر به نظر می رسد جهش -175 T→C نسبت به دو جهش دیگر گزینه درمانی بهتری است.كلمات كليدي: CRISPR / Cas9، آنالیز عملکردی، القای گاما گلوبین، ناک-این
متن يادداشت
Hemoglobinopathies, such as beta-thalassemia, are of the most common hereditary disorders in Iran and around the world which result from mutations in the adult β-globin gene. Reactivating the developmentally silenced fetal γ-globin gene elevates fetal hemoglobin levels and ameliorates symptoms of beta-thalassemia. The continued expression of fetal γ-globin into adulthood occurs naturally in a genetic condition termed hereditary persistence of fetal hemoglobin (HPFH). Point mutations in the fetal γ-globin proximal promoter can cause HPFH.The aim of the present study was To knock-in an EGFP cassette into the c globin genes of K562 cells via CRISPR/Cas9, and to assess expression and hydroxyurea (HU)-mediated induction of the targeted EGFP transgene. Subsequently -175 T→C, -113 A→G and -195 G→C HPFH mutations were introduced into cells using CRISPR/Cas9 and the fluorescence level in cells was evaluated. The EGFP cassettes were specifically knocked into the Gγ gene. EGFP expression was detected in the targeted cell population and isolated clones. Furthermore, EGFP transcript and fluorescence levels were significantly induced following HU treatment. Fluorescence levels of cells increased after the introduction of -175 T → C mutation, whereas fluorescence decreased in the cell lines with the other two mutations.This system is readily utilizable for genome scale studies of cis-acting regulatory elements which are implicated in γ-globin expression or HU mediated induction. On the other hand, it seems that the -175 T → C HPFH mutation is a better therapeutic option that the other two mutations.Keywords: CRISPR / Cas9, Functional Analysis, γ-globin Induction, Knock-In
موضوع (اسم عام یاعبارت اسمی عام)
موضوع مستند نشده
آنالیز عملکردی
موضوع مستند نشده
Functional Analysis
نام شخص به منزله سر شناسه - (مسئولیت معنوی درجه اول )
مستند نام اشخاص تاييد نشده
جعفری تکاب،حسین
مستند نام اشخاص تاييد نشده
Jafari Takab ،Hossein
نام شخص - ( مسئولیت معنوی درجه دوم )
مستند نام اشخاص تاييد نشده
بنان، مهدی
مبدا اصلی
کشور
ایران
سازمان
دانشگاه علوم توان بخشی و سلامت اجتماعی
تاريخ عمليات
20201221
دسترسی و محل الکترونیکی
تاريخ و ساعت مذاکره و دسترسي
3078t.pdf
وضعیت انتشار
فرمت انتشار
چاپی-الکترونیکی
اطلاعات رکورد کتابشناسی
نوع ماده
TF
کد کاربرگه
92029
اطلاعات دسترسی رکورد
سطح دسترسي
a
تكميل شده
Y
