عنوان

بازسازی بافت بیضه گوسفندان آزواسپرمی شده با استفاده از پیوند اتولوگ سلول¬های بنیادی مزانشیمی مشتق از بافت چربی

شماره

پ۲۹۸۵۶

زبان متن نوشتاري يا گفتاري و مانند آن

per

عنوان اصلي

بازسازی بافت بیضه گوسفندان آزواسپرمی شده با استفاده از پیوند اتولوگ سلول¬های بنیادی مزانشیمی مشتق از بافت چربی

نام نخستين پديدآور

معصومه محبّی

نام ناشر، پخش کننده و غيره

کشاورزی

تاریخ نشرو بخش و غیره

۱۴۰۱

نام خاص و کميت اثر

۱۲۷ص.

مواد همراه اثر

سی دی

جزئيات پايان نامه و نوع درجه آن

دکتری

نظم درجات

فیزیولوژی دام

زمان اعطا مدرک

۱۴۰۱/۱۱/۱۸

متن يادداشت

سلول‌های بنیادی، سلول‌هایی هستند که توانایی تبدیل و تمایز به انواع مختلف سلول‌های دیگر را دارند و از آن‌ها می‌توان در تولید سلول‌ها و بافت‌های دیگر استفاده کرد. خاصیت ذاتی خودنوسازی،‌ تکثیر و تمایز به بافت‌های بالغ براساس ریزمحیط اطراف خود در سلول‌های بنیادی مزانشیمی باعث شده است که استفاده از این سلول‌ها در سلول درمانی و طب بازساختی بسیار مورد توجه باشد. بافت چربی بافتی قابل دسترس،‌ فراوان و مکان معتبر برای جداسازی سلول‌های بنیادی بالغ در مهندسی بافت و طب بازساختی می‌باشد.در این پژوهش، سلول‌های بنیادی از بافت چربی شش گوسفند 6-3 ماهه ایستگاه تحقیقاتی خلعت پوشان دانشگاه تبریز استخراج و کشت داده شد و سپس ماهیت آن‌ها به کمک مورفولوژی و فلوسیتومتری و بیان ژن تایید شد. یک بره به عنوان کنترل نگه‌داری شد. مطالعات میکروسکوپ الکترونی روبشی نیز برای سلول¬های بنیادی مزانشیمی مشتق از بافت چربی (oAD-MSC: ovine Adipose tissue Derived Mesenchymal Stem Cells) انجام شد. سلول‌ها بعد از کشت به بافت بیضه‌ی گوسفندان آزواسپرمی شده پیوند زده شدند. ایجاد آزواسپرمی در 6 بره‌ی نر قزل صورت گرفت و یک بره به عنوان کنترل نگه‌داری شد. قبل از انتقال سلول‌ها به بیضه‌ها، نمونه بافتی تهیه شد تا آزواسپرمی القایی تایید شود. آزواسپرمی در هر دو بیضه‌ی یک حیوان ایجاد شده ولی انتقال سلول‌ها فقط در یک بیضه صورت گرفت و بیضه‌ی دیگر به عنوان شاهد مورد بررسی قرار گرفت. پیوند سلول‌ها به رته¬تستیس دام گیرنده‌ تحت شرایط بی‌هوشی و آسپتیک انجام گرفت. حیوانات در حالت خوابیده‌ی جانبی قرار داده شده و کیسه‌ی بیضه، مغبنی و ناحیه‌ی پری‌آنال برای انتقال آماده شد. سلول‌ها به رته‌تستیس پیوند زده شدند و بعد از پیوند سلول‌ها، حیوانات ریکاوری شدند. بافت بیضه‌ی گوسفندان مورد مطالعه بعد از القای آزواسپرمی و بعد از پیوند با استفاده از بافت‌شناسی بررسی شد.در این مطالعه سلول¬های بنیادی مزانشیمی گوسفندی مشتق از بافت چربی جداسازی و شناسایی شد. سلول¬ها بعد از چسبیدن به فلاسک در میکروسکوپ معکوس دوکی شکل مشاهده شدند. نمونه¬ی کشت داده شده به کمک میکروسکوپ الکترونی روبشی عکس¬برداری شد. با استفاده از SEM سطح بیرونی سلول¬های مزانشیمی قابل مشاهده بود. بنابراین در این مطالعه پاهای کاذب هر سلول و گسترش آن¬ها به سلول دیگر به وضوح مشاهده گردید. مطالعات ما با استفاده از فلوسیتومتری نشان داد که این سلول¬ها برای مارکرهای سطحی CD90 و CD44 و CD309 مثبت بوده و برای CD31 منفی بودند. نتایج RT-PCR نشان داد که این سلول¬ها برای مارکرهای سطحی CD90 و CD44 مثبت و برای مارکرهای سطحی CD31 و CD34 منفی بودند. استفاده از تاموکسی¬فن به مدت چهل روز به طور قابل ملاحظه¬ای باعث کاهش اسپرماتوژنز شده و باعث تغییرات هورومونی می¬شود. سطح سرمی تستوسترون، FSH به طور مشخص بعد از پیوند سلول¬های oAD-MSC افزایش یافت ولی مقدار LH تغییر معنی¬داری نشان نداد. مطالعات بافت¬شناسی در گروه دریافت کننده تاموکسی¬فن به طور مشخص نشان دهنده¬ی تخریب شدید بافت پوششی لوله¬های اسپرم¬ساز و دژنراسیون سلول¬های رده اسپرماتوژنز و سلول¬های سرتولی همراه با جداشدگی سلول¬ها از غشای پایه لوله اسپرم¬ساز و همچنین دژنراسیون سلول¬های لایدیگ و پرخونی عروق و ادم در بافت بینابینی بیضه را نشان داد، در صورتی که در گروه دریافت کننده¬ی تاموکسی¬فن+سلول¬های بنیادی، بازسازی ساختار بافت بیضه و تکثیر فعال سلول¬های رده اسپرماتوژنز در بافت پوششی زایا به خوبی قابل مشاهده بود و تمامی سلول¬های رده اسپرماتوژنز به طور فعال در بافت پوششی زایا قابل مشاهده بودند.در این مطالعه امکان پیوند سلول¬های oAD-MSC در مدل¬های حیوانی نابارورشده با استفاده از تاموکسی¬فن نشان داده شد و این تکنیک برای بازگشت باروری در گونه¬های تحت درمان با روش¬های تهاجمی کاربردی می¬باشد

متن يادداشت

Purpose: The main purpose of this study is to provide advanced insights into regeneration of azoospermia animals by transplantation of oAD-MSCs. In this study we isolated and proliferated of adipose derived mesenchymal stem cells (AD-MSCs). AD-MSCs showed a fibroblast-like, spindle-shaped morphology after they attached to the culture flasks observing in inverted microscope. Explanted specimens were imaged with scanning electron microscopy (SEM). We characterized oAD-MSCs surface markers using antibodies in flowcytometry and RT-PCR and transplanted these cells to regenerate of testis of induced azoospermia sheep as AD-MSCs have great potential for cellular therapies to restore injured tissues. Methods: Seven sheep (3-6 month) in Khalatposhan reaserch gate of university of Tabriz was used for this study. Adipose tissue was obtained from tail and inguinal fat of six sheep and one sheep was control animal. Surface markers (CD44, CD90, CD309, CD31) evaluated by flow cytometry. RT-PCR was done for CD44, CD90, CD34, CD31 to identify of cells. Cells was prepared by glutaraldehyde for first fixation and tetroxide osmium for second fixation and dehydration with different percent of ethanol. Finally, cells coated with gold and observed in SEM. Animals received orally 666µg /kg tamoxifen to induce of azoospermia. Final concentration of 30×106 cells/ml was transplanted with the ultrasound-guided approaches into rete testis. Histological analysis was performed in 3 steps (control group, tamoxifen treatment group, cell therapy group) by castration and H&E technic. Blood was analyzed three time (control group, tamoxifen treatment group, cell therapy group) for white blood cells and sex hormones concentration (testosterone, FSH and LH hormone) and hematocrit and Erythrocyte Sedimentation Rate (ESR). Results: We showed that adipose derived mesenchymal stem cells (AD-MSCs) regenerate testis of induced azoospermia sheep by autologous transplantation and these cells were positive for CD44 and CD90 and CD309 markers and negative for CD31 markers by human and mouse antibodies. Cells was positive for CD90 and CD44 markers and negative for CD31 and CD 34 in RT-PCR technique. In SEM the outer surface of the mesenchymal cells could be observed; so, in this study, the pseudopods arising from each cell and extending through each other were clearly shown. The administration of tamoxifen for 40 days clearly decreased spermatogenesis and altered testicular and hormonal results. The blood serum levels of testosterone, FSH and LH of tamoxifen groups significantly decreased in comparison to those in the control groups. oAD-MSCs transplantation group for tamoxifen-treated animals significantly increased sex hormones levels and sperm parameters. WBCs were increased in tamoxifen-treated animals and then decrease for oAD-MSCs transplanted animals. ESR was not significant different in control group and tamoxifen-treated animals and oAD-MSCs transplanted animals.

عنوان گونه گون

Regeneration of testis of induced azoospermic sheep by autologous transplantation of adipose tissue derived mesenchymal stem cells

عنصر شناسه اي

‏محبّی،

ساير عناصر نام

معصومه

کد نقش

تهیه کننده

عنصر شناسه اي

‏مقدّم،

عنصر شناسه اي

قاسمی‌پناهی،

عنصر شناسه اي

‏نوری،

ساير عناصر نام

غلامعلی

ساير عناصر نام

بابک

ساير عناصر نام

محمّد

تاريخ

استاد راهنما

تاريخ

استاد مشاور

تاريخ

استاد مشاور

عنصر شناسه اي

‏تبریز