عنوان

شناسایی و همسانه سازی نواحی جناحین ناقل‌های پلاستیدی از گیاه آفتابگردان

شماره

‭۱۱۲۸۳پ‬

زبان متن نوشتاري يا گفتاري و مانند آن

per

عنوان اصلي

شناسایی و همسانه سازی نواحی جناحین ناقل‌های پلاستیدی از گیاه آفتابگردان

نام نخستين پديدآور

/هادی قره‌خانی

نام ناشر، پخش کننده و غيره

: دانشکده کشاورزی

نام خاص و کميت اثر

‮‭۷۰‬ص‬

متن يادداشت

چاپی

جزئيات پايان نامه و نوع درجه آن

کارشناسی ارشد

نظم درجات

در رشته بیوتکنولوژی کشاورزی

زمان اعطا مدرک

‮‭۱۳۹۲/۰۶/۲۵‬

کسي که مدرک را اعطا کرده

تبریز

متن يادداشت

تراریختی پلاستیدها یکی از جذاب‌صترین عرصه‌صهای مهندسی ژنتیک گیاهی است .برخورداری از مزایایی همچون بیان فزاینده پروتئین‌صهای نوترکیب با هدف مهندسی صفات زراعی یا تولید پروتئین‌صهای انسانی تا سطح ‮‭۷۲‬ کل پروتئین برگ ، جلوگیری از فرار ژن به علت وراثت مادری ژنوم کلروپلاست در بیشتر گیاهان زراعی، فقدان خاموشی ژن و بیان چندین ژن به صورت همزمان از مهمترین دلایل گرایش پژوهشگران مهندسی ژنتیک به این عرصه می‌صباشد .طراحی و ساخت ناقل‌صهای ترانسپلاستومیک مهمترین قدم در انجام تراریختی پلاستیدی محسوب می‌صگردد .در این دسته از ناقل ها کاست‌صهای بیانی توسط دو قطعه به نام نواحی جناحین احاطه می‌صگردند، توالی نوکلئوتیدی این نواحی مشابه توالی قسمت‌صهای هدف در ژنوم کلروپلاست می‌صباشد .نقش این نواحی میسر نمودن وقوع پدیده نوترکیبی همتا ارزیابی می-گردد .که طی این واقعه کاست بیانی به صورت هدفمند در ناحیه مورد نظر قرار می‌صگیرد .اولین گام در جهت ساخت ناقل پلاستیدی شناسایی و سپس همسانه‌صسازی این نواحی می‌صباشد .با بررسی ژنوم کلروپلاست آفتابگردان و همچنین مطالعات گزارش شده دو ناحیه‮‭rps۷ - ndhB‬و‮‭accD- rbcL‬انتخاب گردید .جهت همسانه-سازی این نواحی ابتدا ‮‭DNA‬ کل آفتابگردان به روش ‮‭CTAB‬ از برگ‌صهای آن استخراج گردیده و سپس توسط آغازگرهای اختصاصی این نواحی تکثیر گردید .قطعات هدف سپس در ناقل همسانه‌صسازی‮‭۱۹ - pTG‬قرار گرفته و به روش شوک حرارتی به سلول‌صهای مستعد تراریخت گردید .کلنی‌صهای سفید ظاهر شده با تکنیک کلنی ‮‭PCR‬ مطالعه گردیده و کلنی‌صهای مثبت برای کشت مایع جهت استخراج پلاسمید و آزمون‌صهای بعدی انتخاب گردیدند .پلاسمیدصهای استخراجی با آنریم‌صهای مناسب هضم شده و صحت انجام کار تائید گردید .در نهایت از کلنی‌صهای مثبت کشت مایع گردیده و پلاسمیدصهای استخراجی توسط کیت به شرکت ‮‭Macrogen‬ کره جنوبی به منظور توالی‌صیابی ارسال گردیدند .در نهایت صحت انجام کار توسط مطالعات بیوانفورماتیکی ثابت گردید

متن يادداشت

19 cloning vector. For heat shock transformation ligation reaction mixtures were added to the competent cells of E.coli.The presence of inserts in white colonies were examined by PCR colony and PCR positives colonies used for liquid culture inoculation for plasmid extraction. Plasmids were digested with restriction enzymes and presence of inserts was confirmed. The recommend plasmids were sent to Macrogen company for sequencing. Bioinformatic studies showed that the flanking regions were successfully cloned. Our experiments on both cloned fragments revealed the chloroplast genome is very stable. In both fragments the promoter and terminator regions were demonstrated for future research-Plastid genetic engineering is emerging as an alternative new technology in plant biotechnology. Because it provides readily obtainable high protein levels, the feasibility of expressing multiple proteins from polycistronic mRNAs and gene containment through the lack of pollen transmission. Integration of transgenes into the chloroplast genome is based on two homologous recombination events between flanking regions in plastidial vectors and plastid genome. Chloroplast transformation vectors designing with flanking regions on either side of the expression cassettes. Identification and cloning the flanking regions is the first step in construction of chloroplast vectors. Two fragments (rbcL/accD, ndhB/rps7) was selected from sunflower amplifying genome as flanking regions. Total DNA was extracted from fresh leaves of sunflower using CTAB method. Specific primers were designed and used for isolate flanking regions. Then PCR products were extracted using gel purification kit and ligated into the pTG

مستند نام اشخاص تاييد نشده

قره‌خانی، هادی

مستند نام اشخاص تاييد نشده

باغبان کهنه‌روز، بهرام، استاد راهنما

مستند نام اشخاص تاييد نشده

قلی زاده، اشرف، استاد مشاور

يادداشت عمومي

سیاه و سفید

وضعیت فهرست نویسی

نمایه‌سازی قبلی