عنوان

مهندسی رده سلولی MRC-5 به منظور تولید ویروس کشنده سرطان سرخک با تیتر بالا توسط افزایش بیان پایدار ژن اسفنگوزین کیناز ۱

شماره

۹۸۴۸۴پ

زبان متن نوشتاري يا گفتاري و مانند آن

فارسی

عنوان اصلي

مهندسی رده سلولی MRC-5 به منظور تولید ویروس کشنده سرطان سرخک با تیتر بالا توسط افزایش بیان پایدار ژن اسفنگوزین کیناز ۱

نام عام مواد

[پایان نامه]

نام نخستين پديدآور

ملیحه رستگارپناه

نام ناشر، پخش کننده و غيره

دانشگاه علوم پزشکی تهران، دانشکده پزشکی

تاریخ نشرو بخش و غیره

۱۴۰۱

نام خاص و کميت اثر

۱۶۱ص

جزئيات پايان نامه و نوع درجه آن

دکتری تخصصی(PhD)

نظم درجات

زیست فناوری پزشکی

زمان اعطا مدرک

۱۴۰۱/۰۷/۱۹

متن يادداشت

مقدمه: یکی از مشکلات پیش رو در زمان استفاده از ویروس سرخک برای درمان سرطان، تعداد ذرات ویروسی مورد نیاز است که این مقدار بیش از یک میلیون برابر مقادیر گزارش شده برای واکسیناسیون است. هدف از مطالعه حاضر طراحی و توسعه یک رده سلولی با قدرت تولید بالا برای تأمین مقادیر مورد نیاز ویروس سرخک در فرآیند درمان سرطان و شناسایی ژن های بالقوه و مسیرهای سیگنالی مرتبط با افزایش تیتر تولید ویروس سرخک با رویکرد سیستم بیولوژی می باشد.مواد و روش کار: در این مطالعه، سازه ژنی نوترکیب pIRES2-EGFP-SPHK1 با بکارگیری ژن اسفنگوزین کیناز 1 (SPHK1)، پلاسمید pIRES2-EGFP و تکنیک های مهندسی ژنتیک جهت انتقال به رده سلولی MRC-5 طراحی و سنتز شد. فرآیند غربالگری سلول های MRC-5 ترانسفکت شده با سازه ژنی نوترکیب که به صورت پایدار ژن SPHK1 را بیان می کنند با استفاده از آنتی بیوتیک G418 به منظور دستیابی و گسترش رده سلولی مونوکلونال انجام شد. ارزیابی شدت نور فلورسنت توسط تکنیک فلوسایتومتری و تعیین تیتر تولیدی ویروس سرخک با استفاده از روش TCID50، در سلول نوترکیب حاصل در مقایسه با سلول کنترل انجام شد. علاوه بر این، یک رویکرد سیستم بیولوژی با بهره گیری از تجزیه و تحلیل یکپارچه ی سه پروفایل بیان ژن به دست آمده از پایگاه داده ای GEO، آنالیز غنی سازی عملکردی (Gene Ontology و KEGG analysis) و به دنبال آن ساخت شبکه ی تعامل پروتئین-پروتئین (PPI) در نظر گرفته شد. در پایان برای تایید داده های in-silico، تکنیک Real-time PCR استفاده شد.یافته ها: بر اساس نتایج، دستیابی به رده سلولی مونوکلونال MRC-5 که به صورت پایدار ژن اسفنگوزین کیناز 1 را بیان می کند منجر به تغییر ظاهر کشیده و فیبروبلاستی آنها شده است. هم چنین تفاوت شدت رنگ GFP بین سلول های MRC-5 ترانسفکت شده با سازه ژنی نوترکیب و سلول های کنترل، با استفاده از نقاط FSC و SSC تایید کننده تغییر مورفولوژی این سلول ها می باشد. بیان ژن SPHK1 به صورت گذرا (transient) نیز در چهار رده سلولی MRC-5، Hek293، Veroو A549 که بر اساس مطالعات گذشته تولید کننده تیتر بالایی از ویروس سرخک هستند بررسی شد. با توجه به نتایج به دست آمده، CPE های تشکیل شده در چاهک های سلولی حاوی سازه ژنی نوترکیب که آلوده به ویروس سرخک سویه ی واکسنی شدند و متعاقبا تیترهای محاسبه شده تولیدات ویروس MV-EZ کاملا هم جهت با بازدهی انتقال ژن اسفنگوزین کیناز 1 در این سلول ها ارزیابی شده است. نتایج حاصل از آنالیزهای سیستم بیولوژی نشان دادند که ژن های کاندید RAC1، HSP90AA1، DNM1، LTBP1 و FSTL1 مرتبط با تولید تیتر بالای ویروس سرخک می باشند. قابل ذکر است که DEG های شناسایی شده در مسیرهای پبام رسان PI3K-Akt، هدایت آکسون، پروتئوگلیکان ها در سرطان، تنظیم اسکلت سلولی اکتین، چسبندگی کانونی و مسیر سیگنال دهی کلسیم بسیار غنی شده بودند. بیان نسبی (–∆∆Ct 2) ژن های کاندید در تست RT-qPCR، به طور کلی با تجزیه و تحلیل های سیستم بیولوژی سازگار بود.نتیجه گیری: نتایج مشاهده شده بیانگر این موضوع است که افزایش بیان ژن اسفنگوزین کیناز 1 در یک سیستم سلولی هم راستا با اهداف تعیین شده عمل کرده و منجر به بالا بردن تولیدات ویروسی در آن سیستم می شود. این ژن برای انواع رده های سلولی بسیار اختصاصی عمل کرده و افزایش بیان پایدار آن پیامدهای متفاوتی از جمله تنظیم دینامیک سلولی و تغییر در مورفولوژی آن در بر خواهد داشت. ژن‌های RAC1، HSP90AA1، DNM1، LTBP1 و FSTL1 در ترکیب با تکنیک‌های مهندسی ژنتیک، امکان طراحی مستقیم رده‌های سلولی با توان بالا در جهت تأمین مقادیر مورد نیاز برای فعالیت انکولیتیک MV را فراهم می نمایند.

موضوع مستند نشده

ویروس سرخک

موضوع مستند نشده

ویروس درمانی سرطان

موضوع مستند نشده

ژن اسفنگوزین کیناز 1

موضوع مستند نشده

سلول MRC-5

موضوع مستند نشده

سیستم بیولوژی

کد نقش

، پدیدآور

مستند نام اشخاص تاييد نشده

رستگارپناه، ملیحه

کد نقش

، استاد راهنما

کد نقش

، استاد راهنما

کد نقش

، استاد مشاور

کد نقش

، استاد مشاور

مستند نام اشخاص تاييد نشده

مظلومی، محمدعلی

مستند نام اشخاص تاييد نشده

آزادمنش، کیهان

مستند نام اشخاص تاييد نشده

نگاهداری، بابک

مستند نام اشخاص تاييد نشده

عسگری، یزدان

عنصر شناسه اي

دانشگاه علوم پزشکی تهران، دانشکده پزشکی

کشور

ایران

تاريخ عمليات

20221107

شماره بازیابی

۲۳۴۸ف

شماره فيلد فرمت مبدا

دانشگاه علوم پزشکی تهران، کتابخانه دانشکده پزشکی

فرمت انتشار

p

نوع ماده

TF

کد کاربرگه

92029

سطح دسترسي

a

تكميل شده

Y