عنوان
پدید آورنده
موضوع
رده
کتابخانه
محل استقرار
شماره کتابشناسی ملی
شماره
۹۴۹۷۸پ
زبان اثر
زبان متن نوشتاري يا گفتاري و مانند آن
فارسی
زبان اثر اصلي
فارسی
عنوان و نام پديدآور
عنوان اصلي
مقایسه روش های تکثیر سلولی و انتقال ژن برای سلول T به منظور تولید سلول T کار آمد حاوی رسپتور کایمریک
نام عام مواد
[پایان نامه]
نام نخستين پديدآور
علیرضا رجب زاده
وضعیت نشر و پخش و غیره
نام ناشر، پخش کننده و غيره
دانشگاه علوم پزشکی تهران، دانشکده پزشکی
تاریخ نشرو بخش و غیره
۱۳۹۸
مشخصات ظاهری
نام خاص و کميت اثر
۱۵۸ص.
ساير جزييات
جدول،نمودار
مواد همراه اثر
سی دی
یادداشتهای مربوط به پایان نامه ها
جزئيات پايان نامه و نوع درجه آن
دکتری تخصصی(PHD)
نظم درجات
علوم سلولی کاربردی
امتياز متن
۲۰
یادداشتهای مربوط به خلاصه یا چکیده
متن يادداشت
سلول درمانی با سلول های ایمنی یک از امیدبخش ترین روش¬های درمانی حال حاضر محسوب می-شود به طوریکه در سال¬های اخیر درمان¬های مبتنی بر chimeric antigen receptor (CAR) T cell موفقیت¬های چشمگیری در درمان سرطان داشته¬اند. با وجود موفقیت¬های قابل توجه در درمان سرطان¬های خونی هنوز استفاده از CAR T cell therapy در درمان سرطان¬های جامد با چالش همراه است. ساختار مولکولی CAR از یک دومین شناسایی کننده آنتی¬ژن و به دنبال آن دومین-های سیگنالینگ تشکیل شده است. اغلب مطالعاتی که تاکنون انجام شده از scFvهای با منشا موشی به عنوان بخش شناسایی کننده آنتی¬ژن استفاده نموده¬اند که در چندین کارآزمایی بالینی منجر به حذف سلول¬های CAR T از بدن بیمار گردیده است. نانوبادی¬ها (VHH) آنتی¬بادی¬های تک¬دومین شتری بوده که به دلیل اندازه کوچک و همولوژی بالا با VH انسانی بسیار مورد توجه قرار گرفته¬اند. از اینرو در این مطالعه با هدف بهینه سازی روش¬ها و ساخت سلول انسانیِ CAR T کارآمد بر پایه VHH، سعی شده است سازه ژنی CAR حاوی VHH اختصاصی علیه آنتی¬ژن MUC1 طراحی و ساخته شده سپس مراحل مرتبط با ساخت وکتورهای ویروسی حاوی CAR و انتقال ژن CAR به سلول¬های اولیه T انسانی بهینه شوند.مواد و روش کار: در این مطالعه یک سازه نسل دومِ CAR جدید حاوی بخش شناسایی کننده آنتی¬ژن بر پایه VHH علیه MUC1 طراحی و ساخته شد. سپس پلاسمید نوترکیب حاوی سازه ژنی CAR ساخته و جهت بهینه¬سازیِ تولید ویروس با شرایط مختلف به سلول¬های Lenti-X 293T ترانسفکت شد. ترانسداکشن سلول¬های اولیه T انسانی نیز با وکتورهای ویروسی نوترکیب حاوی قطعه ژنی anti-MUC1 CAR بهینه سازی شد و سپس صحت و میزان بیان anti-MUC1 CAR بر سطح سلول¬های T بررسی شد. در نهایت نیز عملکرد سلول¬های مهندسی شده anti-MUC1 CAR T cell از نظر اختصاصیت در شناسایی سلول¬های سرطانی دارای MUC1، فعالیت توکسیستی آن¬ها و ترشح سایتوکاین¬های تحریکی ارزیابی شدند.یافته¬ها: نتایج حاصل از توالی¬یابی، آزمون هضم آنزیمی و colony-PCR، صحت توالی و انتقال قطعات ژنی anti-MUC1 CAR را تایید کرد. همچنین نتایج حاصل از بهینه سازی ترانسفکشن وکتور pLJM1 نشان داد بهترین شرایط برای انتقال این وکتور به سلول¬های Lenti-X 293T استفاده از روش PEI و با شرایط 6 ساعت انک.باسیون در نسبت 1:1 PEI:DNA است. نتایج ترانسداکشن سلول¬های T نشان داد که در گروه spinoculation+retronectin 452/4±19/63 درصد از سلول-های T گیرنده کایمریک را بیان کرده بودند در صورتیکه این میزان در گروه¬¬های spinoculation+polyberene، رترونکتین، پلی¬برن و spinoculation به ترتیب 442/4±6/34 درصد، 852/1±37/10 درصد، 795/0±23/10 درصد و 558/1±11/21 درصد بودند. هم¬کشتی سلول¬های مهندسی شده با سلول¬های رده سرطانی MUC1مثبت نشان داد که سلول¬های ترانسدیوس شده فعالیت توکسیستی (نرخ زند¬مانی) معنی¬داری (9.19±24.9 و 5.24±22.73 درصد) نسبت به هم¬کشتی این سلول¬ها با سلول¬های رده سرطانی MUC1 منفی (22.48±69.1 درصد) و یا سلو¬های ترانسدیوس نشده (3.18±85.01 درصد و 7.81±86.9 درصد) داشت. به علاوه در هم¬کشتی این سلول¬های مهندسی شده با سلول¬های سرطانیِ MUC1مثبت میزان ترشح سایتوکاین¬های تحریکیِ IL-2 (pg/mL 81.32±1388)، TNF-α (pg/mL 4.24±503) و IFN-ꝩ (pg/mL 5.65±253) نسبت به هم¬کشتی سلول¬های T دستورزی نشده با این سلول¬ها افزایش معنی داری را نشان داد. نتایج تکثیر سلول¬های T نیز نشان داد که این سلول¬ها در شرایط IU 100 IL-2 و نسبت (Cell:Bead) 1:3 بیدهای anti-CD23/CD28 منجر به افزایش 28 برابری سلول¬ها شده که نسبت به سایر گروه¬ها تفاوت معنی داری داشت.نتیجه¬گیری: با توجه به نتایج بدست آمده طراحی و ساخت سازه VHH-anti-MUC1 CAR، بهینه¬سازی تولید ویروس¬های نوترکیب حاوی این سازه و انتقال ژن به داخل سلول¬های اولیه T انسانی به خوبی انجام شد و با توجه به کارآیی موثر سازه CAR بر پایه anti-MUC1-VHH و سلول¬های T مهندسی شده حاوی آن، به نظر می¬رسد این سازه بتواند جایگزین بهتری برای CARهای بر پایه scFv در مطالعات حیوانی و کارآزمایی¬های بالینی باشد.
موضوع (اسم عام یاعبارت اسمی عام)
موضوع مستند نشده
گیرنده آنتی ژن کایمریک (CAR)
موضوع مستند نشده
سلول درمانی با سلول های ایمنی
موضوع مستند نشده
نانوبادی (VHH)
موضوع مستند نشده
ترانسداکشن
نام شخص به منزله سر شناسه - (مسئولیت معنوی درجه اول )
کد نقش
، پدیدآور
مستند نام اشخاص تاييد نشده
رجب زاده، علیرضا
نام شخص - ( مسئولیت معنوی درجه دوم )
کد نقش
، استاد راهنما
کد نقش
، استاد راهنما
کد نقش
، استاد مشاور
مستند نام اشخاص تاييد نشده
حمیدیه، امیر علی
مستند نام اشخاص تاييد نشده
رهبری زاده، فاطمه
مستند نام اشخاص تاييد نشده
کبیر سلطانی، مریم
شناسه افزوده (تنالگان)
عنصر شناسه اي
دانشگاه علوم پزشکی تهران، دانشکده پزشکی
مبدا اصلی
کشور
ایران
تاريخ عمليات
20230314
شماره دستیابی
شماره بازیابی
۱۸۸۴ف
داده هایی که از فرمت مبدا برگردانیده نشده است
شماره فيلد فرمت مبدا
دانشگاه علوم پزشکی تهران، کتابخانه دانشکده پزشکی
وضعیت انتشار
فرمت انتشار
p
اطلاعات رکورد کتابشناسی
نوع ماده
TF
کد کاربرگه
92029
اطلاعات دسترسی رکورد
سطح دسترسي
a
تكميل شده
Y
