بررسی فراوانی ژن های مقاومت به آمینوگلیکوزیدها به روش PCR در انتروکوک های جداشده از سواب رکتال بیماران بستری در بخش ICU از بیمارستان شهید بهشتی کاشان ۱۳۹۲-۱۳۹۳
NOTES PERTAINING TO PUBLICATION, DISTRIBUTION, ETC.
Text of Note
الکترونیکی - لوح فشرده
SUMMARY OR ABSTRACT
Text of Note
سابقه و هدف : انتروکوک ها که کمتر از یک درصد از میکروفلور قابل کشت روده ای را تشکیل می دهند ، به دلیل قابلیت کسب شاخص های آنتی بیوتیکی از طریق پلاسمید ،ترانسپوزون و سایر عناصر ژنتیکی متحرک باعث تشکیل سویه های مقاوم به درمان می شوند.امروزه انتروکوک ها به عنوان یکی از مهمترین علل عفونت های بیمارستانی در سراسر جهان در نظر گرفته شده و به عنوان دومین عامل شایع ایجاد کننده باکتریمی در ICU طبقه بندی می شوند .هدف از این مطالعه تعیین فراوانی ژن های مقاومت به آمینوگلیکوزیدها به روش PCR در انتروکوک های جداشده از سواب رکتال بیماران بستری در بخش ICU از بیمارستان شهید بهشتی کاشان۱۳۹۲ - ۱۳۹۳ مواد و روش ها : این مطالعه یک مطالعه مقطعی بر روی نمونه های سواب رکتال بیماران بستری در ICU بیمارستان شهید بهشتی کاشان۱۳۹۳ - ۱۳۹۲می باشد ۲۱۰ .نمونه رکتال سواب از بیماران بستری در بخش های مختلف ICU از بیمارستان شهید بهشتی کاشان گرفته شد .نمونه ها بلافاصله در محیط انتقالی نمک ۵/۶ قرار داده شده و به آزمایشگاه انتقال داده شد .پس از دو ساعت انکوباسیون در انکوباتور ۳۷ درجه سانتیگراد، نمونه ها در محیط بایل اسکولین) شرکت merk) تلقیح شده و پس از ۲۴ ساعت انکوباسیون، کلنی های تجزیه کننده اسکولین برای انجام تست های تکمیلی مانند :رنگ آمیزی گرم،کاتالاز و رشد در محیط نمک ۵/۶ انتخاب شدند .در نهایت تعیین گونه ها با استفاده از روش Multiplex PCR و از طریق بررسی حضور ژن های (ddl(E.faecalisبا اندازه ای برابر با bp ۴۷۵ و ddl(E.faecium) با اندازه ای برابر با bp۱۰۹۱ انجام شد .برای تعیین حساسیت آنتی بیوتیکی از روش دیسک دیفیوژن بر اساس استاندارد CLSI استفاده گردید.سویه های با مقاومت سطح بالا به جنتامایسین (HLGR)( MIC>۵۰۰ g/ml) و سویه های با مقاومت سطح بالا به استرپتومایسین (MIC> ۱۰۰۰ (g/mL با روش میکرو براث دایلوشن تایید شدند .تمام موارد تایید شده با این روش از لحاظ وجود ژن های مقاومت به آمینوگلیکوزیدها شاملaph(۲)Ia-bp۲۲۰ aac(۶)Ie،(۲۷۹bp) aph(۲)Ib ،(۱۲۵bp) aph(۲)Ic ،(۶۴۲bp) aph(۲)Id ، (۸۱۴bp) ant(۶)Ia و bp) ant(۳)Ia ۲۸۴) به روش PCR مورد بررسی قرار گرفتند .یافته ها : از ۲۱۰ نمونه سواب رکتال گرفته شده از بیماران بستری در بخش های مختلف ICU از بیمارستان شهید بهشتی کاشان، انتروکوک از ۱۸۰ نمونه سواب رکتال جدا شد( (۷/۸۵،که ۱۰۸ ایزوله مربوط به انتروکوک فکالیس ( (۶۰و ۷۲ ایزوله مربوط به انتروکوک فاسیوم( (۴۰ می باشد، که از این میان ۴۳ ایزوله ( (۹/۲۳ مقاومت سطح بالا به جنتامایسین داشتند (HLGR ) ,(MIC>۵۰۰ g/ml) (۵/۶۰ انتروکوک فکالیس و ۲/۳۹ انتروکوک فاسیوم (و ۲۴ ایزوله ( (۳/۱۳ مقاومت سطح بالا به استرپتومایسین داشتند ),(MIC> ۱۰۰۰ g/mL)HLSR ۷/۴۱ انتروکوک فکالیس و ۳/۵۸انتروکوک فاسیوم . (به طور کلی در بین سویه های HLGR ۴/۷۴ موارد مربوط به مردان و ۶/۲۵ موارد مربوط به زنان بوده است و در میان سویه های HLSR ۳/۵۸ موارد مربوط به مردان و ۷/۴۱ موارد مربوط به زنان بوده است نتایج حاصل از بررسی های مولکولی نشان می دهد که ژنaph(۲)Ia - aac(۶)Ieبا فراوانی ۷/۷۶ در بین سویه های HLGR و پس از آن ژن ant (۶)Ia با فراوانی ۵/۱۲ در بین سویه های HLSRژن های اصلی ایجاد کننده مقاومت به آمینوگلیکوزیدها می باشند و هیچ یک از ژن های aph(۲)Ib ، aph(۲)Ic، aph(۲)Idو ant(۳)Ia در نمونه های مورد مطالعه یافت نشدند .بحث :نتایج حاصل از این مطالعه تنها با بررسی بر روی نمونه های مدفوعی بیماران بستری در ICU بدست آمده که نشان دهنده میزان بالایی از مقاومت سطح بالا نسبت به جنتامایسین و استرپتومایسین در میان ایزوله های انتروکوک می باشد و مهمترین ژن های ایجاد کننده این نوع از مقاومت هاaph(۲)Ia - aac(۶)Ieو ant(۶)Ia می باشد .با توجه به قابلیت انتروکوک برای کسب و انتشار عوامل ژنتیکی مقاومت، و شیوع بالای مقاومت سطح بالا به آمینوگلیکوزیدها در این اورگانیسم این چنین استنباط می شود که با مقاومت روز افزون آنتی بیوتیکی در انتروکوک ها مواجه هستیم، لذا انتخاب درمان مناسب بر اساس الگوی مقاومت آنتی بیوتیکی و استفاده محدود از آنتی بیوتیک های وسیع الطیف مانع از انتشار بیش از پیش سویه های مقاوم انتروکوک می شود .کلید واژه ها : انتروکوک ، مقاومت آنتی بیوتیکی ، مقاومت سطح بالا به آمینوگلیکوزیدها،HLSR ،aph(۲)Ia - HLGR aph(۲)Id , aph(۲)Ic, aph(۲)Ib, aac(۶)Ie