جداسازی و شناسایی باکتریوفاژ لیتیک علیه باکتری کلبسیلا پنومونیه تولید کننده کارباپنماز از پساب شهری در سال ۱۴۰۰
General Material Designation
[پایاننامه]
First Statement of Responsibility
/مهرداد محمدی
.PUBLICATION, DISTRIBUTION, ETC
Place of Publication, Distribution, etc.
[بی جا]
Name of Publisher, Distributor, etc.
: پزشکی
Date of Publication, Distribution, etc.
، ۱۴۰۱
PHYSICAL DESCRIPTION
Specific Material Designation and Extent of Item
۲۴۳ص.
NOTES PERTAINING TO PUBLICATION, DISTRIBUTION, ETC.
Text of Note
چاپی - لوح فشرده
DISSERTATION (THESIS) NOTE
Dissertation or thesis details and type of degree
دکترای تخصصی
Discipline of degree
باکتری شناسی پزشکی
Body granting the degree
علوم پزشکی کاشان
SUMMARY OR ABSTRACT
Text of Note
مقدمه :کلبسیلا پنومونیه مقاوم به کارباپنم با توجه به فقدان گزینههای درمانی موجود، مشکلات مهم بالینی ایجاد کرده است .عوامل ضد باکتری جایگزین، مانند باکتریوفاژها، می توانند به عنوان یک ابزار ارزشمند برای درمان عفونت های ناشی از این باکتری های بسیار مقاوم استفاده شوند .هدف از این مطالعه جداسازی فاژ درمانی به ایزوله های بالینی کلبسیلا پنومونیه مقاوم به کارباپنم بود .مواد و روشها : در این مطالعه حاضر، یک باکتریوفاژ لیتیک بر علیه باکتری کلبسیلا پنومونیه تولید کننده کارباپنماز با توانایی ایجاد بیوفیلم بالا از پساب شهر جدا گردید .محدوده میزبانی این فاژ در برابر ۴۵ ایزوله کلبسیلا پنومونیه مقاوم به کارباپنم بالینی جمع آوری شده از بیمارستان آموزشی) شهید بهشتی (کاشان در سال ۱۴۰۰ تعیین گردید .پس از آزمایش تعیین حساسیت آنتی بیوتیکی و شناسایی ایزوله های کلبسیلا پنومونیه مقاوم به کارباپنم ، یک ایزوله کلبسیلا پنومونیه مقاوم به کارباپنم با مقاومت به کولیستین با قدرت بیوفیلم بالا به عنوان میزبان جداسازی فاژ انتخاب شد .پس از انجام جداسازی و خالص سازی فاژ، ارزیابی فنوتیپی و تعیین توالی کل ژنوم مورد ارزیابی قرار گرفت .آزمایش های پایداری به pH و دما برای فاژ انجام گرفت و سپس پروفایل پروتئین توسطPAGE - SDSتعیین شد .ژنوم آن توسط آنزیم های محدود کننده هضم گردید و تخمین اندازه ژنوم تقریبی صورت گرفت .آزمایش قدرت تخریب بیوفیلم فاژ در کنار آنتی بیوتیک کولیستین انجام شد .کل داده های توالی ژنوم توسط نرم افزارهای بیوانفورماتیک مانندPHASTER ،PHIRE ، GeniousPrime و EasyFig پردازش شدند .درخت فیلوژنتیک نهایی فاژ توسط MEGA۱۱ تهیه شد .یافته ها : در مطالعهصای که انجام شد تعداد ۴۵ جدایه کلبسیلا پنومونیه مقاوم به کارباپنم حاوی ژن هایblaKPC (n = ۴۳) ،blaNDM (n = ۳۰) ، و blaOXA۲۳ (n = ۲) بودند .از میان آنها، سه جدایه مقاوم به کولیستین بودند که یکی از آنها می تواند بیوفیلم با قدرت تولید کند .فاژM- vB_KshKPC، به عنوان یک جنس ازWebervirus ، عضوDrexlerviridae ، راسته Caudovirales طبقه بندی شد .این فاژ به عنوان یک فاژ DNA دو رشته ای خطی ۵۴۳۷۸ جفت باز با محتوای ۵۰.۰۸ G + C شناسایی شد که دارای دامنه میزبان نسبتا وسیع( (۹۷.۷ ، دوره نهفته کوتاه ۲۰ دقیقه و اندازه انفجار بالا ۲۶۰ PFU/cell بود .فاژ دارای توانایی پایداری در مقادیر مختلف۱۱) - pH (۳و دماهای۶۵ - (۴۵درجه سانتیگراد (می باشد .ژنومvB_KshKPC - Mشامل ۹۱ فریم خواندن باز است .هیچtRNA ، ژن حمل مقاومت آنتیبیوتیکی، ژن سم، ژنهای مرتبط با حدت یا خوشههای ژنی تشکیلدهنده لیزوژن در ژنوم فاژ شناسایی نشدند .تجزیه و تحلیل BLASTn نشان داد که فاژvB_KshKPC - Mدارای بیشترین شباهت توالی با کلبسیلا فاژ ۱۳ با پوشش ژنوم ۸۶ درصد است .آنالیزهای فیلوژنتیکی بر اساس کل ژنوم نشان داد که این فاژ رابطه نزدیکی با کلبسیلا فاژهای فاژ ۱۳ و vB_KpnD_PeteCarol دارد. vB_KshKPC- Mتوانایی مهار تشکیل بیوفیلم و تخریب بیوفیلم های بالغ را نشان داد .نتیجهگیری : نتایج مطالعه ما نشان داد که فاژ جدید جدا شدهvB_KshKPC - Mدارای دامنه میزبان نسبتا گسترده، خواص عالی، و فعالیت ضد باکتریایی و همچنین فعالیت آنتی بیوفیلم در برابر جدایههای کلبسیلا پنومونیه مقاوم به کارباپنم بالینی است که یک نامزد امیدوارکننده برای کاربردهای فاژ درمانی در آینده است .کلمات کلیدی : کلبسیلا پنومونیه، مقاومت به کارباپنم، باکتریوفاژ، فاژ درمانی