عنوان

آنالیز سلول‌های K562 ناک-این شده EGFP به ژن Gγ-گلوبین که دارای جهش ndHPFH مختل‌کننده جایگاه اتصال فاکتور ZBTB7A می‌باشند.

Number

۳۶۲۸پ

.Language of Text, Soundtrack etc

فارسی

Title Proper

آنالیز سلول‌های K562 ناک-این شده EGFP به ژن Gγ-گلوبین که دارای جهش ndHPFH مختل‌کننده جایگاه اتصال فاکتور ZBTB7A می‌باشند.

General Material Designation

[پایان نامه]

Parallel Title Proper

Analysis of K562 GFP knock-in cells harboring non-deletional HPHF-type mutation in Gγ-globin which disturbs ZBTB7A binding site

First Statement of Responsibility

مریم ملکی طهرانی

Name of Publisher, Distributor, etc.

علوم توان بخشی و سلامت اجتماعیUniversity of Social Walfare and Rehabilitation

Date of Publication, Distribution, etc.

۱۴۰۱

Specific Material Designation and Extent of Item

۱۲۴ص.

Text of Note

پیوست

Dissertation or thesis details and type of degree

19

Discipline of degree

5

Date of degree

۱۴۰۱/۱۲/۱۵

Text of Note

مقدمه:هموگلوبینوپاتی‌ها، نظير بتا-تالاسمی، شایع‌ترین اختلالات تک ژنی در ايران و جهان می‌باشند که به دليل جهش‌هایی در ژن بتا-گلوبين ایجاد می‌شوند. یکی از امیدهای درمان برای این بیماری استفاده از شرایط ژنتیکی ویژه‌ای است که تحت عنوان پايداري ارثی هموگلوبين جنينی (HPFH) شناخته می‌شود. در طی تکامل ژن گاما-گلوبين خاموش می‌شود. در مواردی در اثر جهش در پروموتر گاما-گلوبين، بيان گاما-گلوبين جنينی در بزرگسالی ادامه پیدا می‌کند که به این شرایط پايداري ارثی هموگلوبين جنينی (HPFH) می‌گویند. مطالعات نشان داده است که فعالیت مجدد این ژن می‌تواند در کاهش علائم بیماری بتا-تالاسمی نقش به سزایی داشته باشد.هدف:در این مطالعه هدف اصلی ناک-این یک کاست حاوی EGFP به همراه جهش ndHPFH Gγ -196 C→T در ناحيه پروموتر Gγ در ژن‌های گاما-گلوبین سلول‌های K562 از طریق CRISPR/Cas9 به‌منظور بررسی تأثیر آن بر ميزان فلئورسنس EGFP و درنتیجه ارزیابی تأثیر این جهش در افزایش سطح گاما-گلوبین و دستیابی به یک دیدگاه در مورد عملکرد فاکتور ZBTB7A در دوران جنینی می‌باشد. یافته‌ها: کاست‌های EGFP به‌طور اختصاصی وارد ژن Gγ شده‌اند. بيان EGFP در جمعيت سلول هدف و کلون‌های ايزوله شده مشاهده شد. سطوح فلورسانس سلول‌ها پس از ايجاد جهش196 C→T – تغییر مشهودی پيدا نکرد که می‌تواند نشان‌دهنده نقش متفاوت فاکتور ZBTB7A در سلول‌های تمایزیافته جنینی باشد. کلمات کلیدي: CRISPR / Cas9، آناليز عملکردي ،القاي گاما-گلوبين، ناک-اين،ZBTB7A

Text of Note

The non-deletional hereditary persistence of fetal hemoglobin (ndHPFH) mutations, located in the promoters of the human γ-globin genes (Gγ and Aγ), lead to upregulated γ-globin and fetal hemoglobin (HbF) expression levels in adults—a trait that may ameliorate the severity of the hemoglobin disorders. One group of these ndHPFH maturations disturbs the Zinc Finger and BTB Domain Containing 7A (ZBTB7A) transcription factor binding sites. Since ZBTB7A is a γ-Gobin transcriptional repressor, disturbing its binding sites leads to an increase in γ-Gobin expression. In this study, -196 G→C HPFH mutation which targets the ZBTB7A binding site, was created in the left homology arm (i.e., Gγ-promoters) of separate enhanced green fluorescent protein (EGFP) with Neomycin resistance gene (NeoR) cassette. Subsequently, the EGFP cassettes were inserted into the γ-globin gene(s) of K562 cells via the CRISPR/Cas9 system. The EGFP fluorescence levels were then measured in the ensuing cell populations. Here, the -196C>T mutation does not lead to a different EGFP expression as compared to knock-in cells harboring a wild-type Gγ-promoter. This finding is consistent with prior research done using the K562 cell line, which suggests that the mutation may have differing effects on γ-globin expression in adult and fetal cell lines since ZBTB7A has a different role depending on the cells’ developmental stage. Keywords: CRISPR / Cas9, Functional Analysis, γ-globin Induction, Knock-In, ZBTB7A

CRISPR / Cas9

ملکی طهرانی، مریم

Maleki tehrani, Maryam

نجم آبادی، حسین

بنان، مهدی

Country

ایران

Agency

دانشگاه علوم توان بخشی و سلامت اجتماعی

Date of Transaction

20230823

D

TF

279226

a

Y