عنوان

اثر افزودن مهارکننده Rho کینازی (Y-27632) به رقیق کننده منی گاو بر کیفیت اسپرم پس از انجماد-یخگشایی و تکوین برون تنی رویان

Number

پ۲۹۹۰۱

.Language of Text, Soundtrack etc

per

Title Proper

اثر افزودن مهارکننده Rho کینازی (Y-27632) به رقیق کننده منی گاو بر کیفیت اسپرم پس از انجماد-یخگشایی و تکوین برون تنی رویان

First Statement of Responsibility

مینا بهنام

Name of Publisher, Distributor, etc.

دامپزشکی

Date of Publication, Distribution, etc.

۱۴۰۲

Specific Material Designation and Extent of Item

۷۳ص.

Accompanying Material

سی دی

Dissertation or thesis details and type of degree

دکتری

Discipline of degree

فناوری تولیدمثل در دامپزشکی

Date of degree

۱۴۰۲/۰۶/۰۴

Text of Note

در این مطالعه، فرض شد که افزودن غلظت مناسب (Y-27632) یک مهارکننده ROCK به رقیق¬کننده انجماد از آپوپتوز ناشی از انجماد جلوگیری می کند و رشد رویانی را پس از لقاح آزمایشگاهی (IVF) بهبود می بخشد. نمونه های منی از پنج گاو نر بارور سیمنتال با استفاده از مهبل مصنوعی دو باردرهفته به مدت چهارهفته جمع آوری شد. نمونه‌های انتخابی ادغام و با رقیق‌کننده Tris-egg-yolk-glycerol (TEYG) حاوی غلظت‌های مختلف Y-27632 (0، 10، 20، 30 و 40 میکرومولار) رقیق شدند و سپس در نیتروژن مایع منجمد شدند. پس از ذوب، تجزیه و تحلیل مایع منی به کمک کامپیوتر (CASA)، یکپارچگی غشای پلاسمایی، و سالم بودن آکروزوم از نظر ناهنجاری‌های مورفولوژیکی، تولید درون سلولی گونه‌های فعال اکسیژن (ROS)، شکست DNA، خروج فسفاتیدیل سرین (PS) و مرتبط با آپوپتوز مورد ارزیابی قرار گرفتند. بیان ژن در نهایت، از گروه‌های اسپرم‌های منجمد و ذوب شده برای IVF تخمک گاوی استفاده شد.نتایج نشان می دهد که رقیق¬کننده انجماد مایع منی در غلظت 20 میکرومولار Y-27632 به طور موثری تحرک کل (TM)، سرعت منحنی (VCL) و همچنین غشای پلاسمایی و یکپارچگی آکروزوم را در مقایسه با گروه کنترل بهبود می بخشد (05/0p<). سطوح ROS داخل¬سلولی درنمونه¬های تیمارشده با 30 میکرومولار Y-27632 به طور قابل توجهی (05/0p<) کمترازنمونه شاهد بود. علاوه براین، مکمل¬سازی مایع منی با 20 میکرومولار Y-27632 منجر به زنده¬مانی بیشتر اسپرم در مقایسه با گروه کنترل شد (05/0p<). با توجه به نتایج qRT-PCR، سطح بیان ژن‌های Bax و Caspase-9 در نمونه‌های تیمار شده با 30 میکرومولار Y-27632 به طور قابل‌توجهی کاهش یافت، در حالی که بیان Bcl2 نسبت به شاهد افزایش یافت (05/0p<). نتایج IVF نشان داد که تیمار اسپرم منجمد ذوب شده با 20 میکرومولار Y-27632 باعث افزایش میزان بلاستوسیست در مقایسه با گروه کنترل شد (05/0p<). در نتیجه، افزودن 20 میکرومولار Y-27632 به رقیق¬کننده انجماد می تواند عملکرد و ظرفیت لقاح اسپرم منجمد را به دلیل خواص آنتی اکسیدانی و ضد آپوپتوز آن بهبود بخشد.

Text of Note

In this study, it was hypothesized that the addition of an appropriate concentration of Y-27632 (a ROCK inhibitor) to the freezing extender prevents cryopreservation-induced apoptosis and improves embryonic development after in vitro fertilization (IVF). Semen samples were collected from five fertile Simmental bulls using an artificial vagina twice a week for 4 weeks. Selected samples were pooled and diluted with Tris-egg-yolk-glycerol (TEYG) extender containing different concentrations of Y-27632 (0, 10, 20, 30, and 40 μM) and then frozen in liquid nitrogen. After thawing, computer-assisted semen analysis (CASA), plasma membrane integrity, and acrosome intactness were evaluated in terms of morphological abnormalities, intracellular generation of reactive oxygen species (ROS), DNA fragmentation, phosphatidylserine (PS) externalization, and apoptotic-related gene expression. Finally, groups of frozen and thawed spermatozoa were used for bovine oocyte IVF. The results show that the semen extender at a concentration of 20 μM Y-27632 effectively improved total motility (TM), curvilinear velocity (VCL), as well as the plasma membrane and acrosome integrity compared to the control group (p < 0.05). Intracellular ROS levels were significantly (p < 0.05) lower in samples treated with 30 μM Y-27632 compared to the control specimen. Furthermore, supplementation of the semen extender with 20 μM Y-27632 resulted in more viable spermatozoa compared with the control group (p < 0.05). According to qRT-PCR results, the expression levels of BAX and CASPASE-9 genes in samples treated with 30 μM Y-27632 were significantly downregulated, while the expression of BCL2 was increased compared to the control (p < 0.05). The results of IVF demonstrated that the treatment of frozen–thawed spermatozoa with 20 μM Y-27632 increased blastocyst rates compared to the control group (p < 0.05). In conclusion, the addition of 20 μM Y-27632 into the freezing extender can improve the functionality and the fertilizing capacity of frozen spermatozoa due to its antioxidative and anti-apoptoticproperties.

Variant Title

The effect of adding Rho kinase inhibitor (Y-27632) to bovine semen diluent on sperm quality after freezing-thawing and in vitro development of embryos

Entry Element

‏بهنام،

Part of Name Other than Entry Element

مینا

Relator Code

تهیه کننده

Entry Element

اسدپور،

Entry Element

رضایی توپراق قلعه،

Entry Element

حملی،

Part of Name Other than Entry Element

رضا

Part of Name Other than Entry Element

توحید

Part of Name Other than Entry Element

حسین

Dates

استاد راهنما

Dates

استاد مشاور

Dates

استاد مشاور

Entry Element

‏ تبریز