عنوان

بررسی اثرسرکوب بیان lncRNA- DLGAP1-AS2 بر روی رشد سلولی, مهاجرت‌ سلولی و آپوپتوز در سلول‌های سرطانی‌کولورکتال

Number

پ۲۷۳۰۵

.Language of Text, Soundtrack etc

per

Title Proper

بررسی اثرسرکوب بیان lncRNA- DLGAP1-AS2 بر روی رشد سلولی, مهاجرت‌ سلولی و آپوپتوز در سلول‌های سرطانی‌کولورکتال

First Statement of Responsibility

لیلا نریمانزاده

Name of Publisher, Distributor, etc.

علوم طبیعی

Date of Publication, Distribution, etc.

۱۴۰۱

Specific Material Designation and Extent of Item

۸۵ص.

Accompanying Material

سی دی

Dissertation or thesis details and type of degree

کارشناسی ارشد

Discipline of degree

زیست شناسی گرایش ژنتیک

Date of degree

۱۴۰۱/۰۶/۲۹

Text of Note

سرطان از جمله بیماری¬های شایع است که تا کنون افراد زیادی را سرتاسر جهان درگیر خود نموده است. سرطان کولورکتال سومین سرطان شایع در مردان و دومین سرطان شایع در زنان است و تخمین زده می‌شود دومین علت شایع مرگ و میر ناشی از سرطان است. علیرغم پیشرفت¬های درمانی، سرطان کولورکتال همچنان یکی از علل مهم مرگ ¬و ¬میر با میزان بروز بالا در سرتاسر جهان است و به دلیل محدود بودن روش¬های درمانی و عوارض جانبی درمان-هایی مانند شیمی درمانی، آشنایی با مکانیسم‌های درمانی جدید و هدف¬های مولکولی جدید با تاثیرگذاری بالا و عوارض کمتر بسیار تاثیرگذار خواهد بود. lncRNAها یک گروه هتروژن هستند, بیش از200 نوکلئوتید طول دارند و نقش مهمی در بازسازی کروماتین, تنظیم بیان ژن, رونویسی و پس از رونویسی ایفا می-کنند. lncRNAها نقش غیرقابل جایگزینی در شروع, پیشرفت و متاستاز تومور دارند و دارای پروفایل منحصر به فرد در سرطان-های مختلف انسانی هستند. و همچنین استفاده از خاموش¬سازی به واسطهsiRNA ها یک رویکرد درمانی بالقوه موثر برای درمان طیف وسیعی از سرطان¬ها است.هدف ما در این مطالعه بررسی نقش lncRNA DL GAP1-AS2در سلول-های سرطان کولورکتال و مهار آن با استفاده از siRNA-DLGAP1-AS2 و اثر آن برروی رشد سلولی ,مهاجرت‌ سلولی و آپوپتوز در رده سلولیHCT-116 سرطان کولورکتال می¬باشد.روش کار: برای این منظور ابتدا سلو¬ل¬های سرطانیHCT-116 در محیط کشت RPMI 1640 حاوی10% FBS در دمای °C 37و %5 CO2 کشت داده شد. پس از تیمار سلول¬ها با دوز مناسبی از siRNA-DLGAP1-AS2 از تکنیک qRT-PCRبرای بررسی میزان کاهش بیان ژن DLGAP1-AS2 استفاده گردید. برای بررسی اثر siRNA-DLGAP1-AS2 بر روی تکثیر و زنده¬مانی سلول¬های تیمار شده از تست MTT استفاده شد و به منظور تاثیر آن بر روی القای آپوپوتوز در این سلول¬ها از کیت/ PI annexin V و دستگاه فلوسایتومتری استفاده گردید. از تکینیکWound healing assay به منظور بررسی توانایی مهاجرت سلول¬های سرطانیHCT-116 بعد از ترنسفکشن استفاده گردید. و برای بررسی بیان ژن¬هایBCL2 ,BAX YAP1,MMP9 ,MMP2 و CD44از تکنیک qRT-PCR استفاده شد.یافته¬ها: طبق نتایج به دست آمده با استفاده از تست خراش که به منظور بررسی مهار مهاجرت سلولی با تکینیک Wound healing assay انجام گردید, مشخص ¬شد که گروه ترنسفکت شده با siRNA-DLGAP1-AS2 تا حد زیادی مانع از مهاجرت سلول¬ها می¬شود. همچنین بررسی میزان زنده¬مانی سلول ها به کمک تست MTT و همچنین میزان القاء آپوپتوز سلول¬ها با استفاده از annexin V-FITC ، نشان داد که در گروه ترنسفکت شده با siRNA-DLGAP1-AS2 میزان زنده¬مانی سلول ها بطور معنی¬داری کاهش یافته است و همچنین میزان القاء آپوپتوز سلول¬ها بطور معنی داری افزایش یافته است. و نتایج حاصل تکنیک qRT- PCR نشان داد که میزان بیان ژن¬های دخیل در فرایند سلولی تغییرات بیان معناداری در این مسیر داشتند به طور مثال بیان ژن YAP1که در فرایند تکثیرسلولی دخیل است در این مسیر کاهش معناداری داشته است و بیان ژن¬های MMP9,MMP2 بعد از ترنسفکت سلول¬ها با siRNA-DLGAP1-AS2 کاهش بیان معناداری داشته است. نتیجه¬گیری: براساس نتایج این مطالعه می¬توان نتیجه گرفت که اثر مهارکنندگی siRNA-DLGAP1-AS2 می¬تواند در آینده پس از انجام مطالعات کامل در این حوزه به¬ همراه سایر روش¬های درمانی بعنوان یک هدف درمانی کارآمد در درمان سرطان کلورکتال مورد استفاده قرار بگیرد.

Text of Note

Abstract: Cancer is one of the common diseases that has affected many people all over the world. Colorectal cancer is the third most common cancer in men and the second most common cancer in women and is estimated to be the second most common cause of cancer death. Despite the advances in treatment, colorectal cancer is still one of the important causes of death with a high incidence rate all over the world, and due to the limited treatment methods and side effects of treatments such as chemotherapy, familiarity with new treatment mechanisms and new molecular targets with high effectiveness and less side effects will be very effective. lncRNAs are a heterogeneous group, they are more than 200 nucleotides long and play an important role in chromatin remodeling, gene expression regulation, transcription and post-transcription. lncRNAs play an irreplaceable role in tumor initiation, progression and metastasis and have unique profiles in various human cancers. Also, the use of silencing by siRNAs is a potentially effective therapeutic approach to treat a wide range of cancers. Our aim in this study is to investigate the role of lncRNA DL GAP1-AS2 in colorectal cancer cells and its inhibition using siRNA-DLGAP1-AS2 and its effect on cell growth, cell migration and apoptosis in HCT-116 colorectal cancer cell line.Methods: For this purpose, HCT-116 cancer cells were cultured in RPMI 1640 culture medium containing 10% FBS at 37°C and 5% CO2. After treating the cells with an appropriate dose of siRNA-DLGAP1-AS2, qRT-PCR technique was used to check the reduction of DLGAP1-AS2 gene expression. MTT test was used to investigate the effect of siRNA-DLGAP1-AS2 on the proliferation and survival of treated cells, and in order to evaluate its effect on the induction of apoptosis in these cells, annexin V/PI kit and flow cytometry device were used. Wound healing assay technique was used to investigate the migration ability of HCT-116 cancer cells after transfection. qRT-PCR technique was used to check the expression of BCL2, BAX YAP1, MMP9, MMP2 and CD44 genes.Resuit: According to the results obtained using the scratch test, which was performed to investigate the inhibition of cell migration with the Wound healing assay technique, it was found that the group transfected with siRNA-DLGAP1-AS2 prevented cell migration to a large extent. It can be Also, checking the cell viability using the MTT test and also the cell apoptosis induction using annexin V-FITC showed that in the group transfected with siRNA-DLGAP1-AS2, the cell viability significantly has decreased and also the rate of induction of cell apoptosis has increased significantly. And the results of the qRT-PCR technique showed that the expression level of the genes involved in the cellular process had significant expression changes in this pathway, for example, the expression of the YAP1 gene, which is involved in the cellular proliferation process, has decreased significantly in this pathway, and the expression of the MMP9 genes MMP2 had a significant decrease in expression after transfecting cells with siRNA-DLGAP1-AS2. Conclusion: Based on the results of this study, it can be concluded that the inhibitory effect of siRNA-DLGAP1-AS2 can be used as an effective therapeutic target in the treatment of colorectal cancer in the future after conducting complete studies in this field along with other treatment methods.

Variant Title

investigating the effect of lncRNA DL GAP1-AS2 suppression on cell proliferation, apoptosis and migration in colorectal cancer

Entry Element

نریمانزاده،

Part of Name Other than Entry Element

لیلا

Relator Code

تهيه کننده

Entry Element

‏صفرعلیزاده،

Entry Element

مختارزاده،

Entry Element

برادران،

Part of Name Other than Entry Element

رضا

Part of Name Other than Entry Element

احد

Part of Name Other than Entry Element

بهزاد

Dates

استاد راهنما

Dates

استاد راهنما

Dates

تهيه کننده

Entry Element

تبریز