عنوان

ساخت اپيتليوم شبه بيضوي بر روي ماتريکس خارج سلولي مشتق شده از بافت بیضه در شرايط آزمايشگاهي جهت تکثیر و تمایز سلول های بنیادی اسپرماتوگونی در حضور فاکتور های القاء کننده و مهار کننده تمایز سلولی

Number

پ۲۶۵۹۹

.Language of Text, Soundtrack etc

per

Title Proper

ساخت اپيتليوم شبه بيضوي بر روي ماتريکس خارج سلولي مشتق شده از بافت بیضه در شرايط آزمايشگاهي جهت تکثیر و تمایز سلول های بنیادی اسپرماتوگونی در حضور فاکتور های القاء کننده و مهار کننده تمایز سلولی

First Statement of Responsibility

امیر حسام اسکافی نوغانی

Name of Publisher, Distributor, etc.

دامپزشکی

Date of Publication, Distribution, etc.

۱۴۰۱

Specific Material Designation and Extent of Item

۷۶ص.

Accompanying Material

سی دی

Dissertation or thesis details and type of degree

دکتری

Discipline of degree

دامپزشکی گرايش فنآوری تولید مثل دامپزشکی

Date of degree

۱۴۰۱/۰۲/۰۷

Text of Note

ان متیل دی آسپارتات (NMDA) فرآیند اسپرم‌زایی را از طریق تحریک بیوسنتز هورمون‌های استروئیدی تعدیل می‌کند. هدف از این مطالعه بررسی اثر آگونیست ها و آنتاگونیست های گیرنده های NMDA بر روی تکثیر و تمایز سلول های بنیادی اسپرماتوگوني (SSCs) در هنگام کشت بر روی داربست سلولی هیدروژل ماتریکس بیضه سلول زدایی شده (DTM) Derived Tissue Matrix بود. سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی های موش‌های نر NMRI با هضم آنزیمی جدا و به مدت دو هفته کشت داده شدند. سپس هویت سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی ها توسط آنتی بادی های ضد Plzf از طریق ایمونوهیستوشیمی (IHC) تایید شد. ظرفیت تکثیر سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی با کشت آنها بر روی لایه ای از DTM تهیه شده از بیضه موش، و همچنین دو بعدی (2D) با محیط های مختلف ارزیابی شد. پس از دو هفته از شروع کشت تکثیر در محیط سه بعدی و دو بعدی، تقسیمات پیش میوز در سطوح mRNA و پروتئین به ترتیب با روش‌های qRT-PCR و فلوسیتومتری ارزیابی شد. در طراحی آزمایش چهار گروه شامل: گروه 1: کشت دو بعدی D-Serine، گروه 2: سه بعدی D-Serine، گروه 3: دوبعدی MK801 و گروه 4: سه بعدی MK801 طراحی شد. نتایج نشان داد که میزان تکثیر سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی ها در کشت سه بعدی با 50 میلی مولار گلوتامیک اسید (GA) و 20 میلی مولار D-Serine پس از درمان 14 روزه تفاوت معنی‌داری با سایر گروه‌ها داشت. سطح بیان mRNA ژن Plzf در کشت های سه بعدی با 20 میلی مولار D-Serine و 50 میلی مولار اسید گلوتامیک به طور قابل توجهی بالاتر از گروه کنترل 3 بعدی بود (001/0P<). آنالیز فلوسایتومتری نشان داد که مقدار Plzf در گروه‌های کشت دوبعدی سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی با 20 میلی‌مولار MK-801 به طور قابل‌توجهی در مقایسه با گروه کنترل دوبعدی کمتر بود (001/0P<). نتایج نشان داد که زنده‌مانی سلولی در گروه کشت سه بعدی D-Serine پس از 48 ساعت کاهش معنی‌داری و در محیط کشت سه بعدی MK801 پس از 24 و 48 ساعت نسبت به گروه شاهد کاهش یافت. تکثیر سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی ها پس از دو، چهار و هشت هفته به طور قابل توجهی در کشت سه بعدی D-Serine افزایش یافت و در گروه های کشت دوبعدی MK801 و سه بعدی MK801 پس از چهار و هشت هفته کاهش یافت. نتایج Real-time PCR نشان داد که بیان Plzf در تقسیمات پیش میوزی تنها در کشت سه بعدی D-Serine در مقایسه با گروه های کنترل پس از چهار هفته به طور قابل توجهی افزایش یافت، همچنین بیان ژن میوتیک (Sycp3) در کشت دو بعدی D-Serine و گروه کشت سه بعدی D-Serine در مقایسه با گروه کنترل دو بعدی افزایش یافت. بعد از چهار و هشت هفته و سطح ژن post-meiotic (Tnp1) در گروه کشت سه بعدی D-Serine به طور قابل توجهی بالاتر از سایر گروه ها بود. نتایج فلوسایتومتری نشان داد که بیان پروتئین Plzf (بعد از چهار و هشت هفته)، Sycp3 (بعد از هشت هفته)، و Tnp1 (پس از هشت هفته) در گروه‌های تیمار شده با D-Serine به طور معنی‌داری نسبت به گروه‌های کنترل 2 بعدی افزایش یافت. با این حال، تغییر معنی‌داری در بیان ژن نشانگرهای مرتبط با اسپرم‌زایی در محیط‌های کشت MK801 مشاهده نشد و کاهش معنی‌داری در بیان پروتئین Plzf پس از هشت هفته و Sycp3 پس از چهار و هشت هفته مشاهده شد. با توجه به نتایج این مطالعه به نظر می رسد، افزودن آگونیست های NMDARs (D-Serine) می تواند برای تنظیم تمایز سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی ها در سیستم کشت سه بعدی استفاده شود. این مطالعه نشان داد که ماتریکس سلول‌زدایی شده بیضه همراه با D-Serine و اسید گلوتامیک می‌تواند یک محیط کشت قابل قبول برای حمایت از سلول‌ها در نظر گرفته شود و جایگاه مناسبی برای تکثیر سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی ها فراهم کند.

Text of Note

AbstractN-methyl-D-aspartate (NMDA) modulates the spermatogenesis process through stimulating the steroid hormones biosynthesis. The aim of this study was to evaluate NMDA receptors agonists and antagonists on spermatogonial stem cells (SSCs) proliferation and differentiation on decellularization testicular matrix (DTM) hydrogel scaffold. Four treatment groups were planned: 2D+D-Serine, 3D+D-Serine, 2D+MK801, and 3D+MK801. Results showed that cell viability was significantly decreased after 48 hours in the 3D+D-Serine group, and after 24 and 48 hours in the 3D+MK801 group compared to the controls. The SSCs proliferation after two, four, and eight weeks was significantly increased in the 3D+D-Serine culture, while it was significantly reduced in 2D+MK801 and 3D+MK801 groups after four and eight weeks. Real-time PCR results demonstrated that pre-meiotic gene (Plzf) expression was significantly increased only in the 3D+D-Serine culture compared to the control groups after four weeks culture. The meiotic gene (Sycp3) expression was significantly increased in the 2D+D-Serine and 3D+D-Serine compared to 2D controls after four and eight weeks. The post-meiotic gene (Tnp1) level in the 3D+D-Serine was significantly higher than the other groups. Flow-cytometry results indicated that the protein expression of Plzf (after four and eight weeks), Sycp3 (after eight weeks), and Tnp1 (after eight weeks) in the D-Serine-treated groups was significantly increased compared with the 2D control groups. There were not any significant changes in the gene expression of spermatogenic-related markers in MK801 cluture media. However, a significant decrease in the protein expression of Plzf after eight weeks, and Sycp3 after four and eight weeks was observed. In conclusion, the addition of NMDARs agonists (D-Serine) could be used to regulate the differentiation of SSCs in the 3D culture system.

Variant Title

Construction of testis like tissue on Extra Cellular Matrix derived from testis tissue in vitro to support of spermatogonial stem cells proliferation and differentiation with Inducer and Inhibitor agents

Entry Element

‏اسکافی نوغانی‏،

Part of Name Other than Entry Element

امیر حسام ‏

Relator Code

تهيه کننده

Entry Element

‏اسدپور،‏

Entry Element

‏صابری وند،

Entry Element

‏مظاهری،

Entry Element

‏حمیدیان،

Part of Name Other than Entry Element

رضا ‏

Part of Name Other than Entry Element

عادل ‏

Part of Name Other than Entry Element

زهره ‏

Part of Name Other than Entry Element

غلامرضا ‏

Dates

استاد راهنما

Dates

استاد راهنما

Dates

استاد مشاور

Dates

استاد مشاور

Entry Element

‏تبریز