عنوان

بررسی اثر سرکوب ژن NRF2 توسط RNA کوچک مداخله‌گر(siRNA) بر القاء آپوپتوز و مهار رشد و مهاجرت سلول‌های سرطانی کبد

Number

پ۲۶۲۴۰

.Language of Text, Soundtrack etc

per

Title Proper

بررسی اثر سرکوب ژن NRF2 توسط RNA کوچک مداخله‌گر(siRNA) بر القاء آپوپتوز و مهار رشد و مهاجرت سلول‌های سرطانی کبد

First Statement of Responsibility

محدثه مقصودی

Name of Publisher, Distributor, etc.

علوم طبیعی

Date of Publication, Distribution, etc.

۱۴۰۰

Specific Material Designation and Extent of Item

۱۰۵ص.

Accompanying Material

سی دی

Dissertation or thesis details and type of degree

کارشناسی ارشد

Discipline of degree

ژنتیک

Date of degree

۱۴۰۰/۱۱/۲۰

Text of Note

مقدمه: کارسینوم هپاتوسلولار(hepatocellular carcinoma; HCC) ، رایج‌ترین شکل سرطان اولیه کبد است به طوری‌که از هر ۴ سرطانی که از کبد منشأ می‌گیرد، ۳ مورد از این نوع می‌باشند. سالانه حدود یک میلیون نفر به این بیماری مبتلا می‌شوند و میزان بروز، با میزان مرگ ناشی از آن تقریبا برابر است. HCCدر مراحل اولیه به طور بالقوه از طریق برداشتن به روش جراحی، قطع عضو یا پیوند کبد قابل درمان است اما به دلیل این‌که در اکثر موارد، در مراحل پیشرفته‌تری تشخیص داده می‌شوند، گزینه‌های درمانی برای بیماران از دسترس خارج می‌شود و حتی اگر در مراحل اولیه تشخیص داده شود پس از درمان، بیماری دوباره عود می‌کند. فاکتور شبه هسته‌ای 2 مشتق از اریتروئید ۲ (NRF2)، یک فاکتور رونویسی و تنظیم‌کننده کلیدی سیستم‏های دفاعی بدن در مقابله با استرس اکسیداتیو است. مطالعات نشان داده‌است که افزایش بیان NRF2 با پیشرفت انواع سرطان‌ها از جمله کارسینوم هپاتوسلولار، ارتباط مثبت دارد. مطالعات اخیر نشان داده¬اند که جایگزینی siRNA، با توجه به ظرفیت آن در خاموش کردن ژن¬های هدف، یک روش درمانی امیدوار کننده برای درمان سرطان می¬باشد. هدف از این مطالعه، بررسی اثر ترکیبی استفاده از siRNAی اختصاصی NRF2 و داروی پاکلی‌تاکسل بر¬ القاء آپوپتوز، مهار رشد و مهاجرت در کارسینوم هپاتوسلولار رده‌ی سلولی HepG-2 می‌باشد. مواد و روش‌ها: در ابتدای کار، با استفاده از بررسی‌های بیوانفورماتیکی، سلول¬های HepG-2 برای ادامه تحقیقات انتخاب گردید. سپس سلول¬ها در محیط کشت کامل، کشت داده شدند تا به تراکم 70% برسند. سپس سلول¬ها با NRF2-siRNA ترانسفکت شدند و تحت تیمار با داروی پاکلی‌تاکسل به صورت جداگانه و به صورت ترکیبی قرار گرفتند. میزان زیستایی سلول¬ها توسط تست MTT، القاء آپوپتوز به وسیله‌ی رنگ¬آمیزی Annexin V-FITC/PT و بررسی میزان مهاجرت سلول¬ها توسط تست wound healing assay ارزیابی گردید. در نهایت سطح بیان ژن¬های مرتبط با آپوپتوز و مهاجرت، در گروه¬های مختلف، با استفاده از qRT-PCR اندازه¬گیری شد. آنالیزهای آماری نیز با استفاده از نرم افزار GraphPad Prism 6 انجام گرفت. نتایج: نتایج حاصل از این مطالعه نشان داد که در سلول¬های کارسینوم هپاتوسلولار به دنبال استفاده ترکیبی از siRNA اختصاصی NRF2به همراه داروی پاکلی‌تاکسل منجر به کاهش بیان ژنNRF2 ، افزایش میزان حساسیت سلول¬های HepG-2 به دارو، مهار مهاجرت سلولی و القاء آپوپتوز گردید. علاوه‌براین، استفاده ازsiRNA اختصاصی NRF2 در ترکیب با داروی پاکلی‌تاکسل باعث افزایش بیان ژن¬های Bax، Caspase-3 و Caspase-9 و کاهش بیان ژن‌های Bcl-2 ، MMP-2 و MMP-9 شد. نتیجه‌گیری: نتایج این مطالعه نشان می¬دهد که سرکوب ژن NRF2توسط siRNAی اختصاصی NRF2باعث مهار مهاجرت سلولی و القاء آپوپتوز می¬شود. هم چنین باعث حساس‌سازی سلول¬های HepG-2 به داروی پاکلی‌تاکسل و کاهش دوز مؤثر دارو می¬گردد. بنابراین سرکوب NRF2در ترکیب با داروی پاکلی‌تاکسل می¬تواند یک رویكرد درمانی جدید در درمان هپاتوسلولارکارسینوما باشد.

Text of Note

Introduction: Hepatocellular carcinoma (HCC) is the most common form of primary liver cancer, accounting for 3 out of 4 liver cancers. About one million people get cancer each year, and the incidence is about the same as the death rate. HCC can be treated in the early stages with surgical resection, amputation, or liver transplantation, but it is often diagnosed in advanced stages and limits treatment options for patients. Studies have shown that increased NRF2 expression is positively associated with the progression of a variety of cancers, including hepatocellular carcinoma. Recent studies have shown that siRNA replacement is a promising cancer treatment, given its capacity to turn off target genes. This study aimed to evaluate the combined effect of NRF2-specific siRNA and paclitaxel to induce apoptosis, growth inhibition, and migration in the HepG-2 cell line.methods: First, according to the results of previous studies, HepG-2 cells were selected for further research. Then, the cells were cultured in Complete Cell Culture Medium to reach 70% confluency. In the next step, the cells were transfected with NRF2-siRNA and treated with paclitaxel. Cell viability by MTT assay, induction of apoptosis by Annexin V-FITC / PT staining, and cell migration was investigated by wound healing assay. Finally, the expression level of genes related to apoptosis and migration was measured in different groups using qRT-PCR. Statistical analysis was performed using GraphPad Prism 6 software.Results: The results of this study showed that in hepatocellular carcinoma cells, the combined use of NRF2-specific siRNA with paclitaxel reduced the expression of the NRF2 gene. Also, the combined use of NRF2-specific siRNA with paclitaxel increased the sensitivity of HepG-2 cells to the drug, inhibited cell migration, and induced apoptosis. In addition, the use of NRF2-specific siRNA in combination with paclitaxel increased the expression of Bax, Caspase-3, and Caspase-9 genes and decreased the expression of Bcl-2, MMP-2, and MMP-9 genes.Conclusion: The results of this study show that suppression of the NRF2 gene by NRF2 specific siRNA inhibits cell migration and induces apoptosis. It also sensitizes HepG-2 cells to paclitaxel and reduces the effective dose of the drug. Therefore, suppression of NRF2 in combination with paclitaxel could be a new therapeutic approach in the treatment of hepatocellular carcinoma.

Variant Title

The effect of Nrf2 knock down with siRNA on the apoptosis induction, proliferation and migration inhibition of the hepatocellular carcinoma cell line

Entry Element

‏مقصودی،

Part of Name Other than Entry Element

‏ محدثه

Relator Code

تهيه کننده

Entry Element

‏خلج کندری،

Entry Element

برادران،

Part of Name Other than Entry Element

‏محمد

Part of Name Other than Entry Element

‏ بهزاد

Dates

استاد راهنما

Dates

استاد مشاور

Entry Element

‏ تبریز