عنوان

همسانه‌سازی نواحی جناحین ناقل‌های پلاستیدی توت فرنگی (.‮‭Fragaria sp‬)

Number

‭۱۳۰۳۹پ‬

.Language of Text, Soundtrack etc

per

Title Proper

همسانه‌سازی نواحی جناحین ناقل‌های پلاستیدی توت فرنگی (.‮‭Fragaria sp‬)

First Statement of Responsibility

/مصطفی خزایی

Name of Publisher, Distributor, etc.

: پردیس بین المللی ارس

Text of Note

چاپی

Dissertation or thesis details and type of degree

کارشناسی ارشد

Discipline of degree

رشته :بیوتکنولوژی کشاورزی

Date of degree

‮‭۱۳۹۳/۰۶/۲۵‬

Body granting the degree

تبریز

Text of Note

مهندسی ژنتیک پلاستیدی در جهت تولید فراورده‌های جدید در کروموپلاست توت فرنگی و بهبود کیفیت محصول، نیازمند ناقل های اختصاصی می‌باشد .در این فن آوری تراریختی، طراحی و ساخت ناقل اختصاصی به منظور دستکاری ژنوم پلاستیدی و تولید فراوردهای جدید به عنوان اولین گام، مورد توجه محققین واقع می‌گردد .اختصاصی بودن این ناقل‌ها به خاطر وجود توالی‌های مشابه با ژنوم پلاستیدی گیاه مورد هدف بوده که امکان وقوع نوترکیبی‌همتا بین ژنوم پلاستیدی و ناقل را فراهم می‌سازد .برای رسیدن به این هدف ابتدا توالی ‮‭DNA‬پلاستیدی توت فرنگی به منظور تعیین مکان ورود ژن( های) انتقالی مورد مطالعه قرار گرفت و با کمک نرم‌افزارهای‮‭Blast -Primer‬و ‮‭Oligo Analyzer‬ طراحی آغازگرهای اختصاصی از ناحیه مورد نظر انجام پذیرفت .بعد از استخراج ژنوم کل از گیاه توت فرنگی، تکثیر قطعه مورد هدف با کمک آغازگرهای اختصاصی طی واکنش زنجیره ای پلی مراز انجام گردید، صحت واکنش از نظر طول قطعه توسط الکتروفورز بررسی شد .بعد از تخلیص باند از ژل آگارز و تعیین مقدار غلظت قطعه‮‭DNA‬ ، مراحل همسانه سازی ‮‭T/A‬ انجام پذیرفت و عملیات تراریختی باکتریایی به طریق شوک حرارتی دنبال شد .نتیجه تراریختی باکتریایی که به صورت کلنی‌های سفید در محیط نیمه جامد در حضور آنتی بیوتیک، ‮‭IPTG‬ و‮‭gal- X‬دیده می‌شود از طریق کلنی ‮‭PCR‬ بررسی گردید .از کلنی‌های ‮‭PCR‬ مثبت کشت مایع شبانه باکتریایی انجام و اقدام به استخراج پلاسمید شد .پلاسمید جداسازی شده پس از تایید آنزیمی طول قطعه همسانه‌سازی شده و مکان‌های برشی تعبیه شده در آن، جهت توالی‌یابی به شرکت ‮‭Bioneer‬ ارسال گردید و نتایج حاصل از طریق نرم‌افزارهای بیوانفورماتیکی مورد بررسی قرار گرفت .میزان تشابه نتایج توالی‌یابی شده با توالی مرجع ‮‭۱۰۰‬و ‮‭۹۹‬ و تغییرات نوکلئوتیدی در نواحی همسانه‌سازی شده مربوط به تغییرات جایگزینی بود

Text of Note

Plastid genetic engineering to produce the new products and improve product quality of the chromoplast strawberries, require specific vectors. In this transgenic technology vector as a first step is of interest of researchers. The specificity of these plastid vector is due to the presence of similar sequences in genome of the target plant that provide the possibility of homologous recombination between plastid genome and vector. To determine the location of the gene of interest, sequences of strawberry plasmid DNA was studied. The specific primers were designed using Primer-Blast and Oligo Analyzer softwares. After extracting the total genomic of DNA strawberry, amplification of target fragments was performed by polymerase chain reaction. the validity of the amplification reaction of the fragments was checked by 0.8 agarose gel electrophoresis. After the gel band purification and quantification of DNA concentration, T/A cloning procedures were followed and the bacterial transformation was performed by heat shock. Thus transformed bacteria appeared in white colonies on semisolid medium at the presence of antibiotics, IPTG and x-gal. The white colonies were analyzed by colony PCR. Overnight liquid cultures of a positive colony were performed and plasmid extraction was done. Isolated plasmids were digested for confirmation of the presence of desined fragments and was sent for sequencing to the Bioneer Co. the results were analyzed by bioinformatics software. the homology blast of sequencing results with the source reference of this work showed above 100 and 99 similarity and the remaining 1 was due to some deletion and addition.

خزایی، مصطفی

باغبان، بهرام، استاد راهنما

نوروزی، مجید، استاد مشاور

Public note

سیاه و سفید

نمایه‌سازی قبلی