بهینه سازی کشت بافت و انتقال ژن به گوجه فرنگی با استفاده از آگروباکتریوم و ژن پیروفسفاتاز واکوئلی آرابیدوپسیس AVP۱))
First Statement of Responsibility
/علی اصغر صفری
.PUBLICATION, DISTRIBUTION, ETC
Name of Publisher, Distributor, etc.
تبریز :دانشگاه تبریز ،دانشکده ی کشاورزی
NOTES PERTAINING TO PUBLICATION, DISTRIBUTION, ETC.
Text of Note
چاپی
DISSERTATION (THESIS) NOTE
Dissertation or thesis details and type of degree
کارشناسی ارشد
Discipline of degree
بیوتکنولوژی
Date of degree
۱۳۹۱/۰۴/۱۵
Body granting the degree
تبریز :دانشگاه تبریز ،دانشکده ی کشاورزی
SUMMARY OR ABSTRACT
Text of Note
گوجهصفرنگی، گیاهی است که از جنبهصهای غذایی، اقتصادی و علمی از اهمیت بالایی برخوردار است .با توجه به حساسیت این گیاه زراعی نسبت به تنشصهای زیستی و غیر زیستی، بهینهصسازی روشصهای کشت بافت و اصلاح ژنتیکی این گیاه در جهت بهبود شرایط کمی و کیفی آن، مفید به نظر می رسد .برای این آزمایش سه رقم زراعی گوجهصفرنگی تحت کشت در آذربایجان شرقی شامل ارقام، چیف، اوربانا و ارومیه کم رنگ، انتخاب شدند .در این تحقیق برخی از عوامل مؤثر در باززایی و تراریختی گوجهصفرنگی از جمله ترکیب محیط کشت پایه و هورمونصها(BAP ،IAA ، NAA وKIN) ، نوع ریزنمونه) برگ لپه ای و هیپوکوتیل(، نژاد آگروباکتریوم(GV۳۱۰۱ ، LBA۴۴۰۴ وAGL۱) ، غلظتصهای مختلف آگروباکتریوم، مدت زمان پیش کشت و میزان استوسرینگون، مورد مطالعه قرار گرفتند .بر خلاف ریزنمونهصهای برگ لپه ای، ریزنمونهصهای هیپوکوتیل بازدهی پایینی را در باززایی نشان داد و گیاه تراریختهصای با استفاده از این ریزنمونه بدست نیامد .از بین تیمارهای هورمونی محیط کشت پایه MS حاوی ۵/۱ میلی گرم در لیتر BAP و ۱/۰ میلی گرم در لیتر IAA بهترین نتایج را برای باززایی نشان داد .از بین ارقام مورد مطالعه، رقم اوربانا بیشترین میزان باززایی را نشان داد .بیشترین میزان ساقهصزایی در محیط کشت MS تکمیل شده با ۱/۰ میلی گرم در لیتر BAP بهترین محیط ساقهصزایی انتخاب شد، همچنین محیط کشت MS حاوی ۲ میلی گرم در لیتر IBA محیط ریشهصزایی مناسب بود .در آزمایشصهای تراریختی، نژاد GV۳۱۰۱ آگروباکتریوم تومهصفسینس، بیشترین میزان گیاهان تراریخته بدست آمد، ولی با دو نژاد LBA۴۴۰۴ وAGL۱ ، گیاه تراریختهصای بدست نیامد .بهترین غلظت(OD=۶۰۰) ، در تراریختی با نژادGV۳۱۰۱ ، ۱ بود .پیش تیمار ریزنمونهصها به مدت دو روز، بهترین درصد تراریختی را داشتند .استفاده از استوسرینگون در مقدار ۱۰۰ میکرومولار برای تراریختی مناسب بود .در طی مراحل تراریختی گیاهان تراریختهص زیادی برای ژن AVP۱ در رقم اوربانا بدست آمد .از گیاهان منتقل شده به خاک، تعداد زیادی در جریان سازگاری به دلیل بیماری بوته-میری از بین رفتند .چند گیاه در نهایت به گلخانه منتقل شده و حضور ژن AVP۱ در آنصها با استفاده از پرایمر آن در مرحله این ویترو و گلخانه مورد تایید قرار گرفت.
Text of Note
Tomato is an importance crop from point of economical and scientifical aspect. Tomato is affecting by some biotic and abiotic stress. Genetical breeding of this plant to improving quality and quantity performance of this plant is essential in this experiment. Important factor on regeneration and transformation efficiency of tomato incluing Cultivar, type and concentration of grow regulators, explant type, Agrobacterium strain, and concentration, preculture time and astosyringon concentration was stadied. High percentage of regeneration was observed in MS medium supplemented with 1.5 mg/l BAP and 0.1 mg/l IAA. Urbana cultivar showed high percent of regeneration among all cultivars. Best shoot elongation and root elongation were observed in MS medium supplemented with 0.1 mg/l BAP and 2 mg/l IBA, respectively. Among three used strain of agrobacterium, GV3101 showed highest rate of transformation. Agrobacterium concentration in OD600=1 and 2 day preculture time have given best transformation efficiency. Unfortunately we missed some putative transgenic plants in hardening stage because of fungal desease. All putative transgenic plants, transferred to greenhouse were confermed by PCR method, using specific primer of AVP1 gene.