عنوان

بررسی بیان miR-383-5p و PD-L1 در بافت سرطانی سینه و اثر جایگزینی miR-383-5P در مهار بیان PD-L1، رشد سلولی، مهاجرت سلولی و القای آپوپتوز در رده سلولی سرطان سینه

Number

پ۲۴۱۲۴

.Language of Text, Soundtrack etc

per

Title Proper

بررسی بیان miR-383-5p و PD-L1 در بافت سرطانی سینه و اثر جایگزینی miR-383-5P در مهار بیان PD-L1، رشد سلولی، مهاجرت سلولی و القای آپوپتوز در رده سلولی سرطان سینه

First Statement of Responsibility

شیرین آذربرزین

Name of Publisher, Distributor, etc.

علوم طبیعی

Date of Publication, Distribution, etc.

۱۳۹۹

Specific Material Designation and Extent of Item

۶۲ص.

Accompanying Material

سی دی

Dissertation or thesis details and type of degree

دکتری

Discipline of degree

زیست جانوری ژنتیک مولکولی

Date of degree

۱۳۹۹/۱۱/۱۳

Text of Note

مقدمه: سرطان پستان یکی از علل مرگ‌ومیر در سراسر جهان است و درمان آن‌یک چالش جهانی می‌باشد. MiRNA ها، RNA های غیر کد شونده کوچکی (~18-22 نوکلئوتید) هستند که یک تنظیم‌کننده مهم بیان ژن به شمار می‌آیند. MiR-383-5p یکی از ژن‌هایی هست که نشان داده‌شده است که PD-L1 را هدف قرار می‌دهد و در بسیاری از سرطان‌ها کاهش بیان دارد و با عدم تنظیم ژن هدفش موجب افزایش بیان آن می‌شود. هدف از این مطالعه بررسی اثرات جایگزینی miR-383-5P بر روی رده‌ی سرطانی MDA-MB-231 و بررسی مسیرهای مولکولی درگیر برای فرآیندهای ضد سرطان می‌باشد.مواد و روش‌ها: در این مطالعه ابتدا سطوح بیان miR-383-5P و PD-L1 با استفاده از qRT-PCR در بافـت سرطانی بیمـاران مبتلابه سـرطان پستان و چهار رده سرطانی پستان بررسی شد و بر این اساس mimic-miR-383-5P با استفاده از تکنیک الکتروپوریشن در رده‌ی سلولی MDA-MB-231 ترانسفکت شد و برای بررسی اثرات سایتوتوکسیک mimic-miR-383-5P تست MTT بر روی سلول‌های MDA-MB-231 انجام گرفت. برای بررسی اثرات جایگزینی روی تهاجم از تست خراش استفاده شد و بیان ژن‌های درگیر در این مسیر ازجمله MMP-2, 3, 9 و Vimentin بررسی شد. تست آپوپتوز برای بررسی اثرات جایگزینی بر روی مرگ سلولی انجام گرفت و ژن‌های درگیر در این مسیر ازجمله Caspase-3, 9, Bax و Bcl-2 بررسی شدند. مراحل چرخه سلولی با استفاده از فلوسایتومتری ارزیابی شد. ژن‌های کلیدی مسیر سیگنالینگ PI3K/AKT/mTOR بررسی شدند. سلول‌های MDA-MB-231 با سلول‌های T استخراج‌شده از خون محیطی توأمان کشت شدند و ژن‌های درگیر در مسیر خستگی سلول‌های T ازجمله IL-2, IL-10, TNF-α, TGF-β, INF-γ بررسی شدند.یافته‌ها: میزان بیان miR-383-5P و PD-L1 در بافت سرطانی سینه و رده‌های سلولی به ترتیب کاهش و افزایش داشت. نتایج تست MTT نشان داد که جایگزینی miR-383-5P موجب مهار رشد سلولی شد. بر اساس داده‌های به‌دست‌آمده، جایگزینی miR-383-5P موجب القای آپوپتوز و فعال شدن Caspase-3, 9 و Bax در سلول‌های MDA-MB-231 شد. در ادامه، نتایج تست خراش نشان داد که جایگزینی miR-383-5P می‌تواند مهاجرت سلولی سلول‌های سرطانی پستان را در مقایسه با گروه کنترل کاهش دهد و موجب کاهش بیان ژن‌های درگیر در این مسیر ازجمله MMP-2, 3, 9, و Vimentin شود. همچنین جایگزینی موجب مهار مسیر سیگنالینگ PI3K/AKT/mTOR در سلول‌های MDA-MB-231 شد. درنهایت، نتایج تست هم کشتی نشان داد که جایگزینی miR-383-5P موجب تغییر بیان ژن‌های درگیر در مسیر خستگی سلول‌های T شد.نتیجه‌گیری: بر اساس این مطالعه، فعال شدن مسیرهای متاستاز، مسیر سیگنالینگ PI3K/AKT/mTOR غیرفعال شدن مسیر آپوپتوز می‌تواند ناشی از کاهش بیان miR-383-5P باشد؛ بنابراین miR-383-5P می‌تواند هدف درمانی جدید برای درمان سرطان پستان باشد.

Text of Note

Aims: MicroRNAs (miRs) play pivotal roles in breast cancer development. The dysregulation of miRs has been associated with PD-L1-mediated immune suppression. This study aimed to examine the effect of transfected miR- 383-5p on breast cancer cells and T-cells and its association with clinicopathological features in affected patients. Main methods: Initially, miR-383-5p and PD-L1 expression levels were investigated in breast cancer tissues. Then, MDA-MB-231 cells were transfected with miR-383-5p mimics to perform analyses. Cell viability was investigated using the MTT assay, and the annexin V/PI staining assay was performed to examine apoptosis induction. Furthermore, the effect of miR-383-5p on cell migration and cell cycle progression was analyzed using the wound-healing assay and flow cytometry, respectively. Gene and protein expressions were studied using qRTPCR and western blotting. Finally, the effect of miR-383-5p on T-cells, which were co-cultured with cancer cells, was investigated. Key fndings: Compared to non-malignant tissues, PD-L1 was up-regulated, and miR-383-5p expression was downregulated in breast cancer tissues. Moreover, miR-383-5p reduced breast cancer cell viability via inducingapoptosis and modulating the expression of apoptosis-related genes. Besides, miR-383-5p could inhibit the migration of breast cancer cells via down-regulating metastasis-related genes. Besides, transfected miR-383-5p induced the secretion of pro-inflammatory cytokines from T-cells. Furthermore, the results showed that miR- 383-5p might exert its tumor-suppressive effect via inhibiting the PI3K/AKT/mTOR pathway. The inhibitoryeffect of transfected miR-383-5p on the PI3K/AKT/mTOR pathway might be the underlying mechanism for inhibiting tumoral PD-L1 expression. Signifcance: Overall, miR-383-5p can be a promising therapeutic agent for treating breast cancer.

Variant Title

Investigating the expression of miR-383-5P and PD-L1 in breast cancer tissues and the effect of replacing miR-383-5P mimic in the inhibition the PD-L1 expression, cell growth, cell migration, and apoptosis induction in the breast cancer cell line.

Entry Element

‏آذربرزین،

Part of Name Other than Entry Element

‏‏ شیرین

Relator Code

تهيه کننده

Entry Element

‏صفرعلیزاده،

Entry Element

‏حسین پور فیضی،

Entry Element

‏برادران ،

Entry Element

‏خجسته بانان،

Part of Name Other than Entry Element

‏‏ رضا

Part of Name Other than Entry Element

‏محمدعلی

Part of Name Other than Entry Element

‏بهزاد

Part of Name Other than Entry Element

سید مهدی

Dates

استاد راهنما

Dates

استاد راهنما

Dates

استاد مشاور

Dates

استاد مشاور

Entry Element

تبریز