تبریز: دانشگاه تبریز، دانشکده کشاورزی، گروه بیماری شناسی گیاهی
PHYSICAL DESCRIPTION
Specific Material Designation and Extent of Item
۹۶ص
NOTES PERTAINING TO PUBLICATION, DISTRIBUTION, ETC.
Text of Note
چاپی
DISSERTATION (THESIS) NOTE
Dissertation or thesis details and type of degree
کارشناسی ارشد
Discipline of degree
کشاورزی-بیماری شناسی گیاهی
Date of degree
۱۳۹۰/۱۱/۲۵
Body granting the degree
تبریز: دانشگاه تبریز، دانشکده کشاورزی، گروه بیماری شناسی گیاهی
SUMMARY OR ABSTRACT
Text of Note
Cucumber mosaic virus(CMV)یکی از مهمصترین ویروس های آلوده کننده اعضای خانواده کدوئیان و متعلق به جنس Cucumovirus و خانواده Bromoviridae میصباشد.این ویروسدارای دامنه میزبانی بسیار وسیعی است و گونهصهای گیاهی زیادی از خانوادهصهای مختلف را آلوده میصکند.آن دارای ژنوم چند بخشی شامل سه قطعه آرانصای تک رشتهصای، دو آرانصای زیرژنومی و در برخی از جدایهصها دارای آرانصآی ماهوارهای است .RNA۱به عنوان بزرگترین قطعه ژنوم ویروس بوده و دارای ۳۳۵۷ نوکلئوتید است و پروتئین ۱a را کد میکند RNA۲ .حاوی ۳۰۵۰ نوکلئوتید و پروتئین ۲a را رمز میکند RNA۳ .حاوی حدود ۲۲۰۰ نوکلئوتید و دارای دو سیسترون۳aو CP میباشد .پروتئین ۳a توسط ORF قرار گرفته در مجاورت ۵رمز میشود .دومین ORF موجود درORF۳ ، پروتئین پوششی (۲۶ کیلو دالتون(را کد میکند که در طرف ۳مولکول RNA۳ قرار گرفته و از طریق RNA۴ زیر ژنومی کد میشود .این پروتئین به همراه پروتئین) ۳a پروتئین حرکتی (برای حرکت سلول به سلول در میزبان مورد نیاز هستند .پروتئینهای ۱a و ۲a نیز در همانندسازی ویروس ضروری هستند .ذرات ویروسی چند وجهی به قطر ۲۹ نانومتر و بدون غلاف هستند و در طبیعت توسط شتهصها به روش ناپایا منتقل میصشوند .این ویروس بر طبق خصوصیات سرولوژیک و ترادف نوکلئوتیدی در دو زیرگروه طبقه بندی میصشوند .هدف این پژوهش، بیان ژن پروتئین پوششی ویروس موزاییک خیار در سیستم پروکاریوتی باکتری Rosetta Escherichia coliبود .بخشی از آرانای سوم ویروس) CMV استرین B۱۳) که پروتئین پوششی را رمز میکند، قبلا با استفاده از آغازگرهای اختصاصی از رویcDNA تکثیر و همسانهسازی شده بود .در این تحقیق از کلونی باکتریایی همسانه شدهی واجد pTZ۵۷CMVCP پلاسمید رشد داده شد و به روش لیز آلکالینی استخراج شد .سپس برش آنزیمی با آنزیمهای BamHI و SacI برروی این پلاسمید انجام شد .قطعه مورد نظر، به حامل بیان)pET۲۱a + (برش داده شده توسط آنزیمهای BamHI و SacI اتصال داده شد و این فراورده به درون باکتریE.coli انتقال داده شد .پس از بیان پروتئین پوششی CMV درE.coli strain Rosseta gami ، اندازهصی آن درPAGE - SDSبررسی شد .وزن مولکولی این پروتئین در حدود ۳۰ کیلو دالتون بود که بدون احتساب چند اسیدآمینهص افزوده شده توسط انتهاهای N وC حامل، با اندازهصی پروتئین پوششی CMV که KDa ۲۶ است، مطابقت داشت .پروتئین پوششی CMV نوترکیب بیان شده در باکتری، با استفاده از آزمونهایELISA- DAS، DIBA و وسترن بلات مورد بررسی قرار گرفت .در همه این موارد نتایج به دست آمده تایید کننده بیان ژن مورد نظر بودند .در نهایت تشکیل پروتئین پوششی ویروس CMV با استفاده از میکروسکوپ الکترونی مورد بررسی قرار گرفت .نتایج این مطالعهعلاوه بر تاییدبیان این پروتئین،تشکیل ذرات شبه ویروسی را نیز به اثبات رساند