عنوان

تولید تراریخته‌ی کپسید پروتئینی ویروس برگ بادبزنی مو به منظور تهیه آنتی بادی

Number

‭۲۰۲۵پ‬

.Language of Text, Soundtrack etc

per

Title Proper

تولید تراریخته‌ی کپسید پروتئینی ویروس برگ بادبزنی مو به منظور تهیه آنتی بادی

First Statement of Responsibility

/شاهین نوری نژاد زرقانی

Name of Publisher, Distributor, etc.

تبریز: دانشگاه تبریز

Specific Material Designation and Extent of Item

‮‭۱۲۶‬ ص، جدول، نمودار، عکس، لوح فشرده‬

Text of Note

چاپی

Text of Note

واژه نامه بصورت زیرنویس

Text of Note

کتابنامه ص.: ‮‭۱۱۵-۱۲۶‬

Dissertation or thesis details and type of degree

کارشناسی ارشد

Discipline of degree

گیاهپزشکی

Date of degree

‮‭۱۳۸۴/۱۰/۲۰‬

Body granting the degree

تبریز: دانشگاه تبریز

Text of Note

ویروس برگ بادبزنی مو ‮‭grapevine fanleaf Nepovirus (GFLV)‬ از خانواده‌صی ‮‭Comoviridae‬ یکی از مهمترین ویروس‌های بیمارگر مو می‌باشد .پیکره‌صی این ویروس دو ذره‌ای، جورقطر، به قطر ‮‭۳۰‬ نانومتر بوده و در طبیعت توسط نماتد ‮‭Xiphinema index‬ منتقل می‌شود .این ویروس فاقد میزبان لکه موضعی است .از طرف دیگر غلظت این ویروس در گیاه پایین بوده و محصول نهایی خالص‌صسازی این ویروس نیز بسیار پایین می‌صباشد .هدف این تحقیق بیان ژن پروتئین پوششی ویروس برگ بادبزنی مو در باکتری به منظور تولید آنتی سرم، بدون نیاز به خالص-سازی ویروس بود .بنابراین، برای یافتن منبع ویروسی نمونه‌صبرداری از برخی تاکستانهای شمالغرب کشور صورت گرفت .برای سنجش ‮‭GFLV‬ در این نمونه‌صها از‮‭ELISA - DAS‬و‮‭ELISA - DAC‬استفاده شد که وجود ویروس را در تعداد ‮‭۳۰‬ نمونه‌صی آلوده محرز نمود .سپس از این نمونه‌صها آرصان‌صای کل استخراج و دی‌صان‌صای مکمل آرصان‌صای ‮‭((cDNA‬ ویروس بطور کامل سنتز شد .بخشی از آرصان‌صای دوم ویروس که پروتئین پوششی را رمز می‌کند، به کمک دو آغازگر اختصاصی ‮‭G۲/۳NC‬از روی ‮‭cDNA‬ افزایش یافت و به حامل همسانه‌صسازی‮‭easy - pGEM‬ ‮‭T‬متصل گردید .تعداد سه کلون از هرکدام از سه جدایه‌صی این ویروس) در مجموع نه کلون (تعیین توالی نوکلئوتیدی شدند و این توالی‌صها در بانک اطلاعاتی ‮‭GenBank‬ ثبت گردیدند .میزان تشابه ژنتیکی موجود در بین این سه جدایه و جدایه‌صهای از قبل تعیین توالی شده توسط نرم افزار ‮‭GeneDoc ver. ۲.۶.۰۰۲‬ بررسی و ماتریس این تشابهات بدست آمد .جدایه‌صهای تعیین توالی شده در سطح اسیدهای نوکلئیک‮‭۹۳ - ۸۴‬درصد با یکدیگر و‮‭۸۴ - ۸۳‬ درصد با جدایه‌صهای از قبل تعیین توالی شده مشابهت نشان دادند .توالی اسید آمینه‌صهای پروتئین پوششی جدایه‌صهای کلون شده توسط نرم افزار مورد پیش بینی قرار گرفتند و با همدیگر و نیز با جدایه‌صهای از پیش تعیین توالی شده مقایسه شدند .این توالی‌صها در سطح اسیدصهای آمینه‮‭۹۸ -۹۳‬درصد با یکدیگر و‮‭۹۴ - ۹۳‬درصد با سایر جدایه‌صها تشابه نشان دادند.شجره‌صی فیلوژنی این جدایه‌صها توسط نرم افزار ‮‭Treecon ver. ۱.۳b‬ ترسیم شد .این جدایه‌صها در گروه مجزاء نسبت به ویروس رشاد اروپایی ‮‭(arabis mosaic virus)‬ و جدایه‌صهای از قبل شناخته شده‌صی ‮‭GFLV‬ قرار گرفتند .با طراحی آغازگرهایی که در دو انتهای قطعه‌صی افزایش یافته طی‮‭PCR - Nested‬جایگاه‌صهای برش ‮‭BamHI‬ و ‮‭HindIII‬ می-افزودند، قطعه‌صی مورد نظر افزایش و به حامل بیان)‮‭pET۲۱a‬ + (اتصال داده شد .پس از بیان پروتئین پوششی ‮‭GFLV‬ در‮‭Escherichia coli BL۲۱‬ ، اندازه‌صی آن در‮‭PAGE - SDS‬بررسی شد .وزن مولکولی این پروتئین در حدود ‮‭۷۰‬ کیلو دالتون بود که منهای تعداد اسیدآمینه‌صهای افزوده شده توسط حامل، با اندازه‌صی پروتئین پوششی ‮‭GFLV‬ مطابقت داشت .پروتئین پوششی ‮‭GFLV‬ بیان شده در باکتری در آزمون‮‭ELISA - DAC‬با پادتن اختصاصی ‮‭GFLV‬ واکنش داد و موجب تغییر رنگ چاهک‌صهای تشتک الایزا شد.

Text of Note

Grapevine fanleaf Nepovirus (GFLV), a member of the family Comoviridae, is one of the most severe viruses of the grapevine. Its virions are biparticle, isometric, and 30-nm in diameter. The virus is naturally transmitted by the dagger nematode Xiphinema index. No local lesion host has been reported for GFLV. The virus occurs in low concentrations in the plant so that purification protocols do not end up in a good virus yield. The aim of this work was to express GFLV coat protein gene in Escherichia coli BL21 to produce antiserum against the expressed protein. To find a virus source, sampling was done in some vineyards in North-West of Iran. Then DAC-ELISA and DAS-ELISA, which were used to screen the collected samples for presence of virus GFLV, detected virus in 30 samples. Full-length cDNA was synthesized for the total RNA extractions from the infected leaves. The segment of the virus RNA2, which encodes the coat protein, was amplified from full-length cDNA by the primer set G2/3' NC (Wetzel et al., 2001) and the RT-PCR products were ligated into pGEMT Easy vector (Promega). Three clones of each PCR product isolate (9 clones) were sequenced and the nucleotide data were submitted to GenBank. Sequence comparisons were done by using GeneDoc ver. 2.6.002 software within the new isolates and between these isolates and previously published GFLV variants. The comparisons revealed homology levels of 84-93 between three isolates and 83- 84 between these isolates and previously published GFLV-F13, -NW and GFLN-SP isolates. A neighbor-joining tree inferred by Treecon ver. 1.3b, showed that the Iran isolates were grouped in a separate cluster. The CP genes amplified from the three isolates, were inserted into the cloning vector via using the primers, in which BamHI and HindIII were engineered. Then these products were ligated into E. coli expression vector pET21a(+) and followed by transformation of the E. coli BL21 with the prepared plasmids. After inducing by IPTG, molecular weight of the expressed protein was determined by SDS-PAGE. A 70 KDa expected recombinant protein was evident with the E. coli cells, which carried the GFLV CP gene. Deduced amino acid sequences of the clones were predicted by GeneDoc ver. 2.6.002. This amino acid data comparison revealed homology levels of 93-98 between the three isolates from Iran and 93-96 between these isolates and previously published GFLV isolates. The recombinant GGLV coat protein, expressed in the bacteria, was detected by GFLV-specific antibodies in DAC-ELISA, which proved immunogenicity of the expressed protein being as good as that of the GFLV particles.

نوری نژاد زرقانی، شاهین

سخندان بشیر، نعمت، استاد راهنما

حجازی، سعید، استاد مشاور

ترابی، اسماعیل، استاد مشاور همکار

Public note

سیاه و سفید

نمایه‌سازی قبلی