عنوان

اثرات پلیمرهای سنتتیک و منبع تخمدان‌ها روی بهبود نتایج انجماد شیشه‌ای بافت تخمدان گاوی,‮‭Effects of synthetic polymers and source of ovaries on improvement of vitrification outcomes of bovine ovarian tissue‬

Number

‭۲۱۲۵۶پ‬

.Language of Text, Soundtrack etc

per

Title Proper

اثرات پلیمرهای سنتتیک و منبع تخمدان‌ها روی بهبود نتایج انجماد شیشه‌ای بافت تخمدان گاوی

Parallel Title Proper

‮‭Effects of synthetic polymers and source of ovaries on improvement of vitrification outcomes of bovine ovarian tissue‬

First Statement of Responsibility

/محمد حامد شهسواری

Name of Publisher, Distributor, etc.

: کشاورزی

Date of Publication, Distribution, etc.

، ‮‭۱۳۹۷‬

Name of Manufacturer

، میرزائی

Specific Material Designation and Extent of Item

‮‭۱۲۶‬ص‬

Text of Note

چاپی - الکترونیکی

Dissertation or thesis details and type of degree

دکتری

Discipline of degree

علوم دامی گرایش فیزیولوژی دام

Date of degree

‮‭۱۳۹۷/۰۶/۲۰‬

Body granting the degree

تبریز

Text of Note

با وجود تمامی پیشرفت‌صهای صورت گرفته در فرآیند محافظت انجمادی بافت تخمدان، همچنان چالش‌صهایی بر سر راه این فرآیند وجود داشته و می‌صبایست برای بهینه کردن استفاده از نمونه‌صهای تخمدانی یکنواخت، اصلاح گردد .از سوی دیگر نوع و غلظت عوامل محافظت کننده در برابر انجماد فاکتورهای مهمی هستند که موفقیت نتایج حاصل از انجماد شیشه ای بافت تخمدان را متاثر می‌صسازند .در راستای رسیدگی به این موضوع مطالعه حاضر اقدام به بررسی اثرات پلیمرهای سنتتیک‮‭۱۰۰۰ - (Supercool X‬،‮‭۱۰۰۰ - Supercool Z‬و‮‭۱۲) (- PVP K‬آزمایش‮‭۱)‬ ، جسم زرد و سمت تخمدان) راست در برابر چپ) (آزمایش ‮‭۲)‬ بر انجماد بافت تخمدان گاو به روش انجماد شیشه ای نمود .در آزمایش‮‭۱‬ ، قطعات تخمدانی بدست آمده از هر یک از جفت تحمدان‌صها سریعا مورد تثبیت بافتی قرار گرفتند) کنترل تازه (و یا برای انجماد شیشه ای آماده شدند و سپس به مدت ‮‭۱‬ یا ‮‭۵‬ روز مورد کشت برون تنی واقع شدند .انجماد شیشه ای با استفاده از سیستم انجماد بافت تخمدانی ‮‭(OTC)‬ انجام گرفت .بطور خلاصه، در تعادل قرار دادن نمونه‌صها در محلول انجماد شیشه ای ‮‭(VS)‬ بطور تدریجی در دو مرحله به قرار زیر انجام پذیرفت‮‭VS۱ -: ۱‬ شامل ‮‭MEM‬ مکمل شده با‮‭۱۰ mg/ml BSA‬ ، ‮‭۲۵/۰‬ مولار ساکارز) تنها در گروه ساکارز(،‮‭۱۰‬ درصد اتیلن گلایکول ‮‭(EG)‬ و‮‭۱۰‬ درصد دی‌صمتیل‌صسولفوکساید ‮‭(DMSO)‬ با یا بدون پلیمرها ‮‭(۲/۰‬ درصد حجمی/حجمی‮‭۱۰۰۰ - Supercool X‬یا ‮‭۴/۰‬درصد حجمی/حجمی‮‭۱۰۰۰ - Supercool Z‬یا ‮‭۲/۰‬ درصد حجمی/حجمی‮‭۱۲) - PVP K‬،‮‭VS۲ - ۲‬ شامل ‮‭MEM‬ مکمل شده با‮‭۱۰ mg/ml BSA‬ ، ‮‭۲۵/۰‬ مولار ساکارز) تنها در گروه ساکارز(،‮‭۲۰‬ درصد اتیلن گلایکول ‮‭(EG)‬ و‮‭۲۰‬ درصد دی‌صمتیل‌صسولفوکساید .‮‭(DMSO)‬ بافت‌صهای تخمدانی برای آنالیزهای بافت‌صشناسی و زنده مانی ‮‭(ROS‬ و‮‭۱) - Ethidium homodimer‬و همچنین حضور ایمونولوژیکی‮‭AQP۳‬ ، ‮‭AQP۹‬ آماده شدند .در آزمایش دوم، تخمدان‌صها بر اساس وجود یا عدم وجود اجسام زرد و سمت تخمدان‌صها به پنج دسته به قرار زیر تقسیم شدند‮‭(+ CL-: ۱‬ دارای جسم زرد(،‮‭(- CL- ۲‬ بدون جسم زرد(،‮‭Right (- ۳‬ تخمدان‌صهای سمت راست(،‮‭Left (- ۴‬ تخمدان‌صهای سمت چپ(،‮‭Control (- ۵‬ تخمدان‌صهایی که هیچ‌صگونه انتخابی بر اساس وجود یا عدم وجود جسم زرد و یا سمت تخمدان در مورد آنها انجام نگرفت .(انجماد شیشه ای با استفاده از سیستم انجماد بافت تخمدانی ‮‭(OTC)‬ انجام گرفت .بافت‌صهای تخمدانی برای آنالیزهای بافت‌صشناسی و زنده مانی ‮‭(ROS‬ و‮‭۱) - Ethidium homodimer‬و همچنین حضور ایمونولوژیکی ‮‭AQP۳‬ و کانکسین ‮‭(Cx) ۳۷‬ و ‮‭۴۳‬ آماده شدند .نتایج آزمایش اول نشان داد که در خلال تمامی دوره‌صهای بعد از گرم‌صسازی، در گروه‌صهای تیماری که حاوی پلیمر بودند، درصد فولیکول‌صهای نرمال از لحاظ ویژگی‌صهای شکل‌صشناسی تقریبا در گروه دارای‮‭۱۰۰۰ - Supercool X‬بالاترین بود .علاوه بر این گروه‮‭۱۰۰۰ - Supercool X‬پس از گرم‌صسازی در مقایسه با دیگر گروه‌صها رنگ‌صپذیری قوی‌صتری برای ‮‭AQP۹‬ ثبت نمود .با این وجود ویژگی‌صهای شکل‌صشناسی بعد از فرآیند محافظت در برابر انجماد با زنده‌صمانی و عملکرد فولیکول همبستگی نداشته بطوریکه میزان نکروز و تخریب بافتی در گروه‮‭۱۲ - PVP K‬در مقایسه با گروه‮‭۱۰۰۰ - Supercool X‬کمتر بوده و سطوح ‮‭ROS‬ آن شبیه به گروه کنترل تازه بود .همچنین نتایج حاصل از این تحقیق نشان داد که درصد فولیکول‌صهای نرمال از لحاظ ویژگی‌صهای شکل‌صشناسی در گروه‌صهای بدون جسم زرد و تخمدان راست در مقایسه با دیگر گروه‌صهای انجماد شیشه ای شده-گرم‌صسازی شده بالاتر بوده است .همچنین مشخص شد که میزان نکروز و تخریب بافتی گروه راست کشت داده شده کمترین میزان در بین بقیه گروه‌صها بوده است .در واقع مطالعه حاضر برای اولین بار نشان داد که منشاء تخمدان‌صها و اضافه نمودن پلیمرهای غیرنفوذکننده به داخل سلول‮‭۱۰۰۰) - (Supercool X‬فاکتورهای مهمی در راستای بهبود نتایج حاصل از انجماد شیشه ای بافت تخمدان گاو هستند .ما معتقد هستیم که علاوه بر عوامل محافظت‌صکننده در برابر انجماد نفوذکننده، اضافه نمودن یک‮‭۱۰۰۰) - (Supercool X‬و شاید ترکیبی از پلیمرهای غیر نفوذ کننده‮‭۱۰۰۰ - (Supercool X‬و‮‭۱۲) - PVP K‬می‌صتواند در راستای بهبود نتایج انجماد شیشه ای بافت تخمدان گاو مفید باشند

Text of Note

In spite of all the advances of cryopreservation of ovarian tissue, it is still a challenge and protocols should be optimized to handle the heterogeneity of the ovarian samples. On the other hand, type and concentration of cryoprotective agents (CPAs) are important factors which influence the likelihood of a successful ovarian tissue vitrification outcome. In an attempt to address this factors, the present study was conducted to evaluate the impacts of different synthetic polymers (Supercool X-1000, Supercool Z-1000 and PVP K-12; experiment 1), corpus luteum and side of ovaries (right vs. left; experiment 2) on vitrification of bovine ovarian tissue. In experiment 1, from each ovarian pair, fragments were recovered and immediately fixed for analysis (fresh control) or submitted to vitrification, either or not followed by in vitro culture for one or five days. Vitrification was performed using the ovarian tissue cryosystem (OTC). Shortly, equilibrium of the samples in the vitrification solution (VS) was gradually performed in two steps: (i) VS1 contained MEM supplemented with 10 mg/mL BSA, 0.25 M sucrose (only in vitrified Sucrose group), 10 ethylene glycol (EG) and 10 dimethyl sulfoxide (DMSO) with or without polymers (0.2 [v/v] Supercool X-1000, 0.4 Supercool Z-1000 or 0.2 PVP K-12). Similarly, (ii) VS2 was composed of MEM supplemented with 10 mg/mL BSA, 0.25 M sucrose (only in vitrified Sucrose group), 20 EG and 20 DMSO with or without polymers. The ovarian tissues were subjected for histological and viability analysis [Reactive oxygen species (ROS) production and degeneration cell assay (Ethidium homodimer-1)], as well as immunolocalization of AQP3 and AQP9. In experiment 2, Ovaries were categorized based on the presence or absence of CL and ovarian side and divided into five pools: 1/CL+ (with CL) group, 2/CL -(without CL) group, 3/right ovarian group, 4/left ovarian group and 5/C control group (ovaries which were not selected toward the presence or absence of CL or side of ovaries). Vitrification was performed using the ovarian tissue cryosystem (OTC) system. The ovarian tissues were intended for histological and viability analysis [Reactive oxygen species (ROS) production and degeneration cell assay (Ethidium homodimer-1)], as well as immunolocalization of AQP3 and conexinns (Cx 43 and Cx 37). The results of experiment 1 showed that during all periods after warming, among treatment groups which contain polymers (X-1000, Z-1000 and PVP), the percentage of morphologically normal follicles was almost the highest in the X-1000 samples. Furthermore, post-thawed X-1000 group revealed stronger labeling for AQP9 in primordial and transitional follicles, when compared with other treatments. However, morphology after cryopreservation did not correlate with follicle viability and function where the levels of necrosis and tissue damage of PVP K-12 group were lower in comparison with X-1000 group and only in PVP K-12 group, ROS level was similar to that of the fresh control group. The results of experiment 2 showed that the percentage of morphologically normal follicles was the highest in the CL() and right groups in comparison with other vitrified-warmed groups. Furthermore, the levels of necrosis and tissue damage of right cultured group was the lowest compared to other groups. In fact, the current study for the first time indicated that the origin of ovaries and the addition of non-permeating polymers (Supercool X-1000) are important factors to increase the outcome of bovine ovarian tissue vitrification. We believe that in addition to permeating CPAs, the addition of one (Supercool X-1000) or maybe a combination (Supercool X-1000 and PVP K-12) of non-permeating polymers could be useful to improve the outcome for vitrified bovine ovarian tissue

Parallel Title

‮‭Effects of synthetic polymers and source of ovaries on improvement of vitrification outcomes of bovine ovarian tissue‬

شهسواری، محمد حامد

Shahsavari, Mohammad Hamed

مقدم، غلامعلی، استاد راهنما

دقیق کیا، حسین، استاد مشاور

ریبیرو رودریگز، آناپولا، استاد مشاور

Public note

سیاه و سفید

نمایه‌سازی قبلی